将多潜能干细胞从组织中流通到外周血的药物制造技术

从组织（骨髓，皮肤，骨骼肌，等等）中流通多能干细胞到外周血的药物；使用从组织（骨髓，皮肤，骨骼肌，等等）中流通多能干细胞到外周血的药物治疗心力衰竭，肝衰竭，肾衰竭，神经变性疾病（帕金森氏病，阿尔茨海默氏病），心血管疾病，脑血管疾病，脊髓损伤，关节炎，骨质疏松，糖尿病等等的方法。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及将有能力分化为多种存在于成体组织中的细胞，例如红细胞，白细胞，血小板，纤维母细胞，脂肪细胞，骨骼肌细胞，平滑肌细胞，心肌细胞，神经元，神经胶质，少突胶质细胞，血管内皮细胞，皮肤表皮细胞，皮肤真皮细胞，毛囊细胞，骨细胞，成骨细胞，破骨细胞，软骨细胞，气管上皮细胞，肺泡细胞，胃肠道上皮细胞，口腔上皮细胞，成釉质细胞，成牙本质细胞，肝细胞，肝星形细胞，胆囊上皮细胞，胰脏内分泌细胞，胰脏外分泌细胞，肾管状细胞，肾血管小球细胞，输尿管上皮细胞，泌尿道上皮细胞，垂体内分泌细胞，甲状腺细胞，肾上腺皮质细胞，肾上腺髓质细胞，前列腺细胞，乳腺细胞，视细胞，色素上皮细胞，角膜细胞，泪腺细胞和鼓室细胞的多能干细胞流通到外周血的试剂；通过含有试剂的组织再生而进行治疗的试剂；使用试剂回收多能干细胞的方法；将通过以上方法制备的多能干细胞诱导分化为体细胞的方法。
技术介绍
目前，从脑死亡的供体进行器官移植作为心功能不全，肝功能不全，肾功能不全，神经变性疾病(例如帕金森氏病，阿尔茨海默氏病)，心血管疾病，脑血管疾病，脊柱损伤，关节炎，骨质疏松，糖尿病等等的一种激进疗法。然而，由于缺少供体，所以即使在移植治疗发达的美国，希望器官移植的患者中只有大约5％可以获得器官。另外，器官移植伴有免疫排斥，所以，一生都要施用免疫抑制剂，并且有遭受源于供体的感染性疾病的风险。为了解决供体缺乏，异种移植技术正在发展。然而，免疫排斥的问题还没有解决，并且与同种异体移植术相比，排斥的程度更为严重。猪被认为是异种移植的有效材料，通过移植还有感染来自于猪的病毒等等的风险。实际上，在马来西亚近1,000,000头猪感染了Hendra病毒，结果，导致多于70人死于感染。为了克服以上提及的关于同种异体移植和异种移植的问题，从干细胞分化和诱导人组织和细胞的技术已经在研究。干细胞是有着自我复制能力和分化为多种组织的多能能力的细胞。根据它们的收集部位，干细胞可以粗略地分为五种，它们是胚胎干细胞(ES细胞)，胎儿干细胞，成体干细胞，脐带血干细胞和胎盘干细胞。ES细胞(胚胎干细胞)分离于囊胚期称为胚胎内细胞团的位置处，EG细胞(胚胎生殖细胞)收集于具有全能性，可以分化为成体的所有细胞的胚胎生殖系，所以，它们作为组织重建的材料引起广泛注意。另外，从胎儿组织中分离培养组织特异的干细胞，例如中性干细胞。然而，因为制备这样的衍生于胚胎和胎儿的干细胞，需要破坏胚胎和胎儿，所以有一个伦理问题。而且，干细胞不是患者自身的细胞，在从脑死亡的供体进行器官移植的情况下不易避免免疫排斥。而且，因为胚胎的干细胞和胎儿的干细胞的功能是个体的产生，它们的特性与成体干细胞不同，它们对成体组织的亲和性也不同。实际上，当ES细胞移植到成体组织时，会形成肿瘤。以上表明移植源于胚胎和胎儿的细胞到成体中的治疗方法不容易检验和证明其长期的安全性。在干细胞是源于成体组织的情况下，使用患者自身的细胞进行治疗是可行的。干细胞有自我复制的能力，它们可以大量的产生。相应的，可以通过证明体外培养和产生的干细胞与组织中的干细胞相同，保证移植的安全性。用于皮肤和软骨复制的商业产品已经有售。然而，存在于成体组织中的组织特异性干细胞分裂能力有限，所以有一个不利之处即难以获得足量的细胞。另外，只要是使用组织特异性的干细胞，它们只能用于治疗这种组织，并且不能重复使用。然而最近表明有能力分化为成体中几乎所有种类细胞的多能干细胞存在于成体组织中(WO 01/11011，WO 01/21767，WO 01/48149)。因为有自我复制能力的这样的细胞表现为无限生长，所以也可以大量地产生细胞。进一步地，与源于胚胎和的ES细胞不同，那些细胞即使移植到成体细胞，也不形成肿瘤。已经表明出生后这样的多能干细胞可以在从人的皮肤，骨骼肌和骨髓中制备。另一方面，为了治疗多种疾病已经尝试通过移植造血干细胞进行造血系统重建。造血干细胞从骨髓收集，从骨髓中收集干细胞对患者而言是一个负担。所以，考虑到使收集容易或使移植时间缩短，已经尝试将造血干细胞流通到外周血中，从外周血中收集造血干细胞而不是从骨髓中收集造血干细胞。作为将造血干细胞流通到外周血的方法，此方法已知使用造血系统生长因子，趋化因子，细胞毒素剂，等等。G-CSF(粒细胞集落-刺激因子)，GM-CSF(粒细胞-巨噬细胞集落-刺激因子)，IL-7，IL-12，flt-3配体，干细胞因子(SCF)，血小板生成素，等等已知作为造血系统的生长因子。IL-8，MIP-2(巨噬细胞炎症蛋白-2)，BB-10010(MIP-1α)等等已知作为趋化因子。环磷酰胺等已知作为细胞毒素剂。哥伦比亚大学的研究组发现通过G-CSF流通到人外周血的细胞中分离出CD34-阳性细胞，并且移植到心脏梗塞模型中时，血管生成发生，心功能提高。纽约州立大学的研究组发现小鼠骨髓的Lin-阴性和c-kit-阳性造血干细胞移植到患有心脏梗塞的小鼠时，心肌和血管再生。同一研究组也发现，当心脏梗塞开始前给小鼠施用G-CSF和SCF，在梗塞位置发生心肌和血管再生，研究组认为通过G-CSF造血干细胞流向外周血，因此梗塞的心肌再生。专利技术公开多能干细胞可以再生多种组织。从患者的皮肤，骨骼肌和骨髓中收集多能干细胞涉及例如对患者自身造成剧痛，组织破坏等等问题。所以，为了容易地从患者的外周血中进行收集，需要将多能干细胞流通到外周血的试剂。也要求找出没有细胞移植时，使组织破坏和变性的因素，所述因素可以简化从患者中收集细胞，细胞体外培养和细胞移植到患者的使用细胞的再生医药治疗步骤。为了解决以上提及的问题，已经加强研究以找出多种因素，结果，据信在活化免疫系统中起作用的细胞因子已经发现有把参与多种组织修复的多能干细胞流通到外周血中的作用，因此本专利技术已经达到。本专利技术是关于以下的(1)到(40)。(1)将多能干细胞从组织中流通到外周血的试剂，其含有作为活性成分的细胞因子，所述细胞因子选自活化单核细胞或巨噬细胞的细胞因子，活化的单核细胞或巨噬细胞分泌的细胞因子，和G-CSF受体表达的造血细胞分泌的细胞因子。(2)以上(1)中提及的试剂，其中细胞因子是选自G-CSF，M-CSF，GM-CSF和IL-8的细胞因子。(3)以上(1)中提及的试剂，其中活化单核细胞或巨噬细胞的细胞因子选自M-CSF和GM-CSF。(4)以上(1)中提及的试剂，其中表达G-CSF受体的造血细胞是粒细胞或中性粒细胞。(5)以上(4)中提及的试剂，其中中性粒细胞分泌的细胞因子是IL-8。(6)以上的(1)到(5)中任意一项提及的试剂，其中细胞因子是化学修饰过的细胞因子。(7)以上(6)中提及的试剂，其中细胞因子用聚亚烷基二醇化学修饰的细胞因子。(8)以上的(1)到(7)中任意一项提及的试剂，其中构成细胞因子的氨基酸序列中的一个或几个氨基酸被去除，取代，插入或增加，并且细胞因子实质上有相同的活性。(9)以上(1)中提及的试剂，其中组织是骨髓。(10)以上(1)中提及的试剂，其中多功能干细胞选自CD45-阴性细胞，血型糖蛋白A-阴性细胞和oct3/4-阳性细胞。(11)以上(1)中提及的试剂，其中多功能干细胞选自CD45-阴性和血型糖蛋白A-阴性细胞，oct3/4-阳性和CD45-阴性细胞，oc本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种将多能干细胞从组织流通到外周血的试剂，其含有作为活性成分的的细胞因子，所述的细胞因子选自活化单核细胞或巨噬细胞的细胞因子，活化的单核细胞或巨噬细胞分泌的细胞因子和表达Ｇ－ＣＳＦ受体的造血细胞分泌的细胞因子。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：佐藤秀尚，山田阳史，安藤博司，横山裕美，樱田一洋，
申请(专利权)人：协和发酵工业株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]