溶菌酶二聚体的新应用制造技术

溶菌酶二聚体，优选按重量计含１０％或更少的不需要的副产品并且基本上不含溶菌酶的单体形式，在制备用于预防和／或治疗选自癌症，毛发生长紊乱，鱼类疾病和蜜蜂疾病的疾病的药物组合物中的应用。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及到溶菌酶二聚体的新用法和含有这种二聚体的组合物。这种新用法是以对免疫系统的非特异性刺激这一共同原则为基础的，特别应用于人和动物体内与自然防御系统和再生系统功能损伤相关症候或疾病的预防和/或治疗。
技术介绍
八十年代后期，人们发现某些酶的二聚体尽管基本上保留有相应单体的有益特性，但比单体的毒性小得多，并且在某些情况下以治疗量剂应用也根本不显示消极的副作用。WO89/11294中已描述了包括以溶菌酶二聚体或包括其它二聚化酶作为活性成分的抗病素和抗菌性组合物。这里的报导是当溶菌酶二聚体在培养物中的浓度为1.25-20mg/ml时，它可抑制多种从病人取得的标本中所培养菌株的增殖。当二聚体以1-2mg/kg体重的剂量，每天口服2次应用时，也可对尤细小病毒(cpV)感染的治疗有效。后来，又发现了溶菌酶二聚体的又一些诱人的特性并且开发了药物，另外的治疗性应用，尤其用于如WO94/01127中说的细菌和病毒感染的治疗。WO94/01127中出现的模型理论可帮助理解用溶菌酶二聚体观察到的不同效果。尽管溶菌酶二聚体的全部作用方式还不完全明了，但似乎存在由相应单体的溶菌活性所不能解释的其它治疗能力。本专利技术人发现二聚体溶菌酶的某些免疫刺激作用，尤其关系到细胞因子水平的调节。此外，他们据自己的实验推断，溶菌酶二聚体能阻止病毒穿透细菌的细胞，可能是通过封闭细胞膜外的某些区域，其中可能包括病毒的受体蛋白。现有技术公开了另外的用溶菌酶二聚体在体外获得的结果。尤其是Bartholeyns和Zenebergh(欧洲癌症杂志，15卷85-91，1979)检测了二聚体溶菌酶体外对肝癌细胞(HCT)的抑制细胞生长的活性。他们发现对细胞培养中癌细胞倍增的抑制率为73％±15％(同上，89页，表2)。奇怪的是，除WO94/01127外到目前为止没有用溶菌酶二聚体的体内实验的报导。这很奇怪，令人惊异，现在等待解释，为何Bartholeyns和Zenebergh或其它的研究者不继续对此物进行研究，以开发另外对癌症有希望的发现。根据Sorrentino等欧洲生化杂志124，183-189(1982)的方法制备的纯化溶菌酶二聚体与本专利技术中优选应用的溶菌酶二聚体所进行的比较(附图说明图1)至少揭示了一种可能的原因在依照Sorrentin等制备的制剂中含有高浓度的副产品，如溶菌酶单体、三聚体和四聚体，而本专利技术中所优选应用的产品是高纯度的，也就是说含有需聚溶菌酶二聚体的量达制剂中所有溶菌酶流分重量的90％。WO91/10731中已描述了制备这样高纯度溶菌酶二聚体的方法。因为本领域中15年前就已经知道，尽管溶菌酶单体有好的抗菌作用，但它有相当的毒性可引起炎症和严重的过敏反应甚至引起中毒性休克症状，所以现有技术溶菌酶二聚体的纯化在体内实验和应用中只是不够好，这就很好地支持了这种必然。在这种情况下可很好地理解为什么包括Bartholeyns和Zenebergh在内的权威人士—尽管推荐把溶菌酶二聚体作为有希望的候选物进行进一步研究—在以后的10到15年中没有进行另外的实验开发溶菌酶二聚体的体内应用。尽管科学界可能由于对体内应用溶菌酶二聚体所持有的偏见而对此缺乏研究动机，本专利技术仍进行了进一步的研究和开发工作，以改进二聚体溶菌酶生产和纯化的方法，发现人和动物体内应用可起到如WO91/01127中所示具有抗病毒和抗菌作用的产品。此外，本专利技术人知道二聚体的溶菌酶与单体相比毒性低并且可得到新的、高纯度的溶菌酶二聚体，在此基础上他们试图并开始用溶菌酶二聚体制剂在体内做抗肿瘤(癌症)实验，尽管现有技术并没有建议它用于治疗细菌或病毒感染之外的疾病。本专利技术的最大优势之一是为药物组合物的生产提供了高纯度溶菌酶二聚体的应用以补充或替代传统的化疗中通常应用的毒性极高的抗癌药物。附图简述图1示按照2种不同的现有工艺所制备的溶菌酶二聚体的纯度的比较。专利技术详述本专利技术中所指的高纯度溶菌酶二聚体由于其毒性单体的量小可用于制备直接用于人和动物治疗的药物组合物。如上面所指出的，纯化溶菌酶二聚体含有大约10％重量或更少的不需要的副产品，可通过任何来源的溶菌酶单体的二聚体化而获得，例如从人、动物、卵、植物、微生物而来的溶菌酶单体，这些单体可以天然状态进行自然分离或通过化学或基因工程的方法生产，以制备出化学和生物特性与天然品相同或基本相同的溶菌酶单体。本专利技术的专利技术人用体外细胞培养和体内实验模型，优选小鼠和大鼠的实验模型进行的实验，能成功的证明所应用的溶菌酶二聚体组合物对体内和体外癌组织细胞增殖有明显的抑制效果，甚至有完全抑制的效果。这种治疗作用可由不同的癌类型进一步证实，这些癌型包括并不限于本领域中已知的由病毒诱导或感染而引起的那些；这些病毒具体包括人类的乳头瘤病毒，EB病毒、乙型肝炎病毒和逆转录病毒如HIV-1(成人T细胞白血病病毒)，HTLV-II(淋巴瘤病毒)和HIV-I(人类免疫缺陷病毒)及亚型。由这些病毒诱导或感染而引起的癌症类型包括即子宫颈癌，泌尿生殖道癌，卡波济肉瘤，原发肝细胞癌，白血病，T细胞淋巴瘤，艾滋病或其中的亚型。为动物和人类癌症的预防和/或治疗提供一种药物组合物和一种方法是本专利技术的目的之一。当溶菌酶二聚体组合物用于手术创伤后如下肢切除以后有或多或少感染的病人时，在该临床试验中意外的发现了这种高纯度溶菌酶二聚体的又一有益用途。实验证实二聚体的局部应用不仅可有效地治疗创伤部位的感染而且在治疗部位可刺激毛发生长和毛发再生。这一意外发现引起进一步的研究，最终制备出用于毛发生长紊乱，尤其是免疫功能失常或功能障碍所引起的毛发生长紊乱，如斑秃的药物组合物。这种组合物至少可部分满足作为毛发生长刺激剂这一长期渴求组合物的标准。相信产生这一完全出乎意料效果的基本原理包括对免疫防御机制的刺激和增强作用，对细胞层浅表和皮肤血液循环的促进作用，对免疫功能的系统非特异性增强作用和也许包括其它一些尚未确定的作用。在鱼场和养蜂场，传统的抗生素被不同的包括溶菌酶二聚体在内的非特异性免疫刺激剂所代替而进行的筛选实验中发现了含有溶菌酶二聚体的药物组合物的又意外和非常有趣的商业用途。鱼的饲养中应用免疫刺激剂来预防和/或治疗鱼类疾病是一有希望的新发展(Siwicki和Andenson 1990；Siwicki等1994)。现在，应用包括抗生素，药物和化学物质等用于鱼类疾病治疗的物质对养鱼池进行灭菌(Stoskopf，1993)。尽管每种治疗至少对某一特殊疾病的治疗部分有效，但随着这些物质在环境和鱼肉中的积累以及对不同抗生素抗性的微生物病理性品系的出现，问题也出现了。在养蜂时，如果可以证明蜂感染了象细菌和/或病毒这样的微生物就要大范围杀死蜂群。这样做可避免感染在其它的群体中扩散以此使所受的损失最小。这种需要为蜜蜂的预防和/或治疗提供一种替代和可靠的方法，这种方法兼有抗生素的优点，另外可增强蜜蜂的免疫系统而又不会导致抗生素抗性微生物品系的产生。而且，即使溶菌酶二聚体最终以检测到的浓度存在于蜂蜜产品中应该认为是质量的提高而这非变质，因为溶菌酶二聚体有非特异性免疫刺激效果的好处。通常免疫刺激剂包括一组在动物和人体内增强非特异性细胞和体液防御机制的生物和合成组合物。象β-葡聚糖，脱乙酰壳多糖，左旋咪唑，微量矿本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：W·基茨卡，
申请(专利权)人：尼卡健康产品有限公司，
类型：发明
国别省市：