糖链识别抗体及治疗HIV感染疾病的药物制造技术

一种糖链识别抗体，其属于ＩｇＭ类并且识别Ｇｇ４Ｃｅｒ（Ｇａｌβ１－３ＧａｌＮＡｃβ１－４Ｇａｌβ１－４ＧｌｃβＣｅｒ）或ＧＭ２。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及新的糖链识别抗体，更具体地涉及属于IgM类并且识别在HIV感染细胞中表达的糖链的抗体，以及涉及用于治疗HIV患者的含有该抗体为有效成分的药物。
技术介绍
1981年在圣弗兰西斯科第一次发现AIDS(后天免疫缺陷综合症)，为同性恋男性致命的免疫缺陷疾病(Gottlieb，M．S．，Schroff，R．，等，N．Engl．J．Med．，305，1425-1430(1981))。两年以后，法国Pasteur研究所Montanie研究小组发现引起AIDS的病毒(Barre-Sinoussi，F．，Chermann，J．C．，等，《(科学》(Science)，220，868-871(1983))。1985年，该病毒被统一命名为HIV(人免疫缺陷病毒)(Coffin，J．，Haase，A．，等，《(科学》(Science)，232，697(1986))。AIDS是具有下面特征和性质的疾病当一个个体通过性交，输血等感染了HIV，则该病毒破坏受感染个体的免疫功能，引起宿主，即该感染个体后天性免疫缺陷。甚至，该宿主出现多种症状，例如腹泻和肺炎，导致宿主的最终死亡。迄今为止，很多研究人员力图开发出治疗AIDS的药物。例如，从Mitsuya等发现叠氮基胸苷(AZT)(Mitsuya，H．，等，《美国国家科学院院刊》(Proc．Natl．Acad．Sci．，USA．)，82，7096(1985))开始，临床条件下已经研究了ddI(2’，3’-二脱氧肌苷)，ddC(2’，3’-二脱氧胞苷)，和其它物质。但是，还没有获得提供令人满意效果的药物。尽管从HIV感染到发病的潜伏期根据个体而大大不同，但是大约感染HIV人数的50％肯定会在感染后10年内出现病症，并且几乎所有的感染患者在出现病症后1-3年内死亡。超过40岁的成年和儿童在感染HIV后很快发展病情。解释感染与出现AIDS相关综合症(ARC)之间的潜伏期的原因可能包括患者一般的健康状况，遗传素因，与其它感染疾病的并发症，和其它依赖宿主的原因，以及感染病毒菌株间的差异。由于灌输血液成分而感染的情况下，大多数HIV感染个体出现AIDS而死亡。但是一些感染个体即使在感染10年后也不出现AIDS，而且另一些感染个体在出现AIDS之前甚至需要更长时间。这种病例分布世界各地，而且据报道5％的HIV感染个体长时间生存。HIV感染人员中长时间保持没有症状的称作长时间生存者已经引起了很大关注，因为认为他们提供了解释他们对HIV病毒的抗性或防止出现病理症状的机理的线索。因此对这些长时间生存者进行了大量的研究和探讨。但是还没有清楚地明白为什么长时间生存者尽管感染了HIV但是不出现AIDS的原因。因此期望澄清HIV抗性原因，并以此为基础开发出治疗HIV疾病的药物。本专利技术的公开本专利技术人研究了HIV感染人员病毒复制的静止情况和活性情况之间的差别。在该项研究中发现一些感染患者携带的某些糖链的天然抗体中存在的特异性IgMs可能能解释疾病发展的延迟。作为抗原的糖链据认为不存在于处于正常环境下的人体内，或者以有限量存在。但是当细胞受HIV感染时，这些糖链出现在T细胞或巨噬细胞的表面。(一般来说，已知当细胞发生肿瘤或感染一种病毒时，特殊的糖链出现在这些细胞的表面)。如果属于IgM类的这些糖链所属抗体作为天然抗体存在于血清中，则抗体识别HIV感染细胞，并且与这些感染细胞结合。补体级联在该局部位点被激活，在该位点IgM与糖抗原结合，导致HIV感染细胞的溶胞作用。这样，含有上述天然IgM抗体的血清建立一个特定的环境，在该环境下HIV感染细胞不容易增殖。本专利技术人还发现HIV感染细胞增强了补体敏感性。这些事实不仅在体外得到了证明，而且在感染了HIV且延迟出现AIDS的患者体内也得到了证明。即，实际证明了这些长期生存患者出现属于IgM类的与HIV感染细胞反应的抗体。也发现通常抵抗补体的细胞在神经节四糖(Gg4)的抗体结合这些细胞后被补体溶胞。另外，属于IgM类的具有与感染细胞结合能力的抗体减少了感染细胞，这是补体激活介导的细胞溶解的结果，并且该抗体使HIV感染细胞出现了一个洞孔。于是可以知道施用属于IgM类的并且具有与HIV感染细胞反应性的抗体对于治疗HIV携带者是有用的。因此，本专利技术提供一种糖链识别抗体，其属于IgM类并且其识别Gg4Cer(Galβ1-3 GalNAcβ1-4 Galβ1-4 GlcβCer)或GM2。本专利技术还提供一种治疗HIV疾病(AIDS)的含有糖链识别抗体作为有效成分的药物。本专利技术还提供一种用糖链识别抗体治疗HIV疾病的组合物。本专利技术还提供糖链识别抗体的用途及治疗HIV疾病的治疗剂的制备方法。本专利技术还提供一种治疗HIV感染患者的方法，其特征在于对HIV患者施用有效量的糖链识别抗体。附图的简要说明附图说明图1是表明对血清样品No．1进行表位分析结果的图示。图2是表明对血清样品No．56进行表位分析结果的图示。图3是表明含有来自健康HIV血清阴性供者的IgM的人血清对HIV感染的MOLT4细胞的溶胞能力的图示。图4是表明一项试验结果的图示，在该项试验中，用来自正常人血清-1(NHS-1)的IgM抗体级分分别处理神经氨酸酶处理的MOLT4细胞，未处理的MOLT4细胞，和HIV-MOLT4细胞，然后用荧光素标记的抗人IgM抗体免疫染色。图5是表明被各种糖包被的脂质体吸收的IgM抗体残留的溶细胞能力的结果，以及被IgM处理的靶细胞的免疫染色的结果的图示。图6是表明测定HIV-感染-MOLT4细胞上补体灭活膜的表达量的流式细胞测量法的结果的图示。进行本专利技术的最佳方式这里所使用的糖链用本领域习惯缩写代表Gg代表神经元系列，Cer代表神经酰胺，Gal代表半乳糖，GalNAc代表N-乙酰基半乳糖，及Glc代表乳糖。本专利技术抗体可以从人血清中分离，或者可以通过使用Gg4Cer或GM2作为抗原产生抗体的常规方法制备，只要这些抗体识别Gg4Cer或GM2(神经节苷脂GM2II3αNeuAc-GgOse3Cer)并且属于IgM免疫球蛋白。为了从人血清中分离本专利技术抗体，使用常规方法，用Gg4Cer或GM2作为抗原筛选存在的抗体。血清可以是从血清阴性HIV感染患者采集的样品或是其它的从健康个体采集的样品。抗Gg4Cer或GM2抗体可以通过常规方法获得，例如杂交瘤方法或者使用EB病毒无限增殖化方法。用于筛选的技术包括常规的ELISA，RIA，荧光抗体技术，斑点免疫结合试验，蛋白质印迹方法，和51Cr-释放方法。从上述血清分离出来后，本专利技术抗体容易用公知的免疫球蛋白纯化技术纯化。这些方法的例子包括盐沉淀，凝胶过滤，和亲和层析(使用甘露聚糖柱，偶联甘露糖聚合物来去除甘露糖结合的蛋白质(MBP))。本专利技术抗体也可以通过常规的杂交瘤方法用Gg4Cer或GM2作为抗原来制备。本专利技术抗体可以是单克隆或多克隆抗体，只要他们识别Gg4Cer和／或GM2并且属于IgM类。本专利技术抗体对于治疗HIV疾病是有用的，这一点从下文中得到证明。本专利技术人获得了具有引起HIV-1感染的T细胞系细胞溶解能力的人血清样品。发现用HIV-1的HTLV-ⅢB菌株感染的人T细胞系(MOLT4)被来自HIV血清阴性健康个体的新鲜正常人血清(NHS)溶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：冈田秀亲，冈田则子，
申请(专利权)人：大塚制药株式会社，
类型：发明
国别省市：