一种器官保存液及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种器官保存液及其制备方法。在１０００ｍｌ器官保存液中含有：５ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ溶液３ｍｌ及羟乙基淀粉５８．５～７１．５ｇ；乳糖酸钾３７．０８～４５．３２ｇ；ＭｇＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ１．１２～１．３８ｇ；腺苷１．６１～１．９７ｇ；别嘌呤醇０．１３～０．１６ｇ；ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］３．１５～３．８５ｇ；蔗糖９．２３～１１．２９ｇ；谷胱甘肽０．９２～１．１２ｇ；盐酸地尔硫卓２０ｍｇ；ＫＯＨ和双蒸水适量；其ｐＨ值为７．３～７．５。制备方法是：将８００ｍｌ双蒸水置于容器内，搅拌中加入上述药物，并通过ＫＯＨ调节ｐＨ值，用双蒸水调至１０００ｍｌ搅拌均匀，最后经无菌滤膜过滤后０℃～８℃无菌保存备用。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物学和医学领域，尤其是涉及一种器官保存液及其制备方法。
技术介绍
器官移植是20世纪人类医学科学的重大进展。目前，全世界在肝脏、肾脏、心脏、胰腺和骨髓移植的领域的移植总数已超过70万例(次)，存活最长的器官移植受者已近半个世纪。器官移植是本世纪医学发展的主要方向之一，是治疗终末期器官衰竭唯一有效的根治手段。任何临床器官移植首先要有高质量的供体，这是器官移植成功的先决条件和根本保障，作为器官移植学三大支柱之一的器官保存是器官移植的基石。1987年，Folkert O.Belzer博士领导的美国WISCONSIN大学实验小组成功研制了一种低温保存液——UW液，极大地延长了肝脏、肾脏、胰腺、心脏、肺和小肠等器官的保存时间，推动了世界器官移植的快速发展。UW液的成分是羟乙基淀粉50克/升、乳酸(内酯)35.83克/升、KH2PO43.4克/升、MgSO4·7H2O 1.23克/升、棉子糖17.83克/升、腺苷1.34克/升、别嘌呤醇0.136克/升、总谷胱甘肽0.922克/升、KOH 5.61克/升、pH为7.4胰岛素40单位青霉素G 20万单位、地塞米松16mg。UW液的特点有(1)不使用代谢活跃的葡萄糖来维持渗透压，而用乳糖醛酸盐作为非渗透阴离子，并用棉子糖作为附加的渗透支持，用来预防因体温过低而引发的细胞水肿；(2)用谷胱甘肽、别嘌呤醇对抗氧自由基；(3)含有腺苷，可刺激ATP合成，支持能量代谢；(4)含羟乙基淀粉(250 KU)，用来防止细胞间隙膨胀和维持胶体渗透压；(5)以磷酸盐系统防止细胞酸中毒。临床证实UW液可显著延长器官体外活性，由此增加了可供移植的器官数量。目前，UW液及其各种UW型改良液已在国际上日益广泛应用。但是目前此类保存液并不能降低器官移植过程中的灌注再损伤，对进一步提高器官移植后的存活率存在一定障碍。由于移植器官的保存对于移植手术的成功与否至关重要，因此，本领域迫切需要开发新的器官移植保存液。缺血再灌注损伤是缺血再灌注损伤的特殊类型，在现代临床肝移植中越来越显出其重要性，以往研究表明在肝脏的再灌注期，枯否氏细胞大量激活，释放一系列的炎性损伤因子，导致肝窦内皮细胞损伤及肝功能受损。在冷保存期间导致再灌注损伤的因素已经存在，而在再灌注期通过某种途径激活相关损伤因子，导致肝脏损伤。尽管缺血缺氧引起细胞凋亡的机制尚不完全清楚，但缺氧引起细胞膜钙离子通道状态改变，导致细胞内钙超载，已被普遍认为是细胞死亡的“最后共同途径”。研究证明，拮抗钙离子内流，在一定程度上能够抑制细胞的凋亡。盐酸地尔硫卓为钙离子通道阻滞药，临床用于在冠状动脉痉挛引起的心绞痛，可使心外膜、心内膜的冠状动脉扩张，缓解心绞痛，在劳力性心绞痛，它扩张周围血管，降低血压，减轻心脏工作负荷。由于盐酸地尔硫卓使血管平滑肌松弛，周围血管阻力降低，血压下降，而用于治疗高血压。但是在器官保存液中使用盐酸地尔硫卓未见报导。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对目前传统的UW液使用中存在的不能降低器官移植过程中的灌注再损伤的实际问题，提供一种能在器官移植保存中通过抑制钙超载，对缺血所致的器官细胞损伤有明显的保护作用的多器官移植保存液及其制备方法。本专利技术的目的是这样实现的一种器官保存液，其特征在于，在1000ml器官保存液中含有5mol/L的NaOH溶液3ml以及羟乙基淀粉58.5～71.5g；乳糖酸钾 37.08～45.32g；MgSO4·7H2O 1.12～1.38g；腺苷 1.61～1.97g；别嘌呤醇 0.13～0.16g；KH2PO43.15～3.85 g；蔗糖 9.23～11.29g； 谷胱甘肽 0.92～1.12g；盐酸地尔硫卓 20mg； KOH 适量； 双蒸水 适量；保存液的pH值为7.3～7.5。在本专利技术中所述的羟乙基淀粉的分子量为200KD，取代级为0.5MS。一种上述器官保存液的制备方法，其特征在于按照1000ml配制量的具体步骤如下(a)用去离子水配制5mol/L的NaOH溶液3ml备用；配制5mol/L的KOH溶液20ml备用；取5mol/L的KOH溶液5ml，并将0.13～0.16g的别嘌呤醇溶解于其中备用；(b)将800ml双蒸水加入＞1000ml的容器中，再加入37.08～45.32g乳糖酸钾搅拌至颜色变为清晰；并在搅拌中依次加入1.12～1.38gMgSO4·7H2O、备用的3ml NaOH溶液、备用的15ml KOH溶液，继续搅拌；(c)加入1.61～1.97g腺苷，搅拌至颜色变为清晰，加入5ml溶有别嘌呤醇的KOH溶液，搅拌至颜色变为清晰；加入3.15～3.85g KH2PO4，搅拌至颜色变为清晰；加入9.23～11.29g蔗糖，搅拌至颜色变为清晰；加入0.92～1.12g谷胱甘肽，搅拌至颜色变为清晰；加入20mg盐酸地尔硫卓，搅拌至颜色变为清晰；加入58.5～71.5g羟乙基淀粉，搅拌至颜色变为清晰；(d)用KOH混合物的pH值调至7.3～7.5，继续加双蒸水，至1000ml搅拌均匀，形成器官保存液；(e)所得1000ml保存液，先经0.45μm无菌滤膜滤除不溶性杂质，再用0.45μm和0.22μm无菌滤膜叠加过滤后，滤液在0℃～8℃无菌保存。在所述的器官保存液的制备方法中配制的环境温度为20～25℃。本专利技术的优点在于盐酸地尔硫卓是苯并噻嗪类钙通道阻断药，能阻止L型钙通道，阻止钙内流。同时刺激钙离子ATP酶，使胞质内钙排除增加，增强线粒体、内质网等摄取储存钙的作用。在细胞膜表面存在通过介导胞浆游离钙升高而起作用的钙动员受体，钙通道阻滞剂是指能选择性地阻滞Ca2+从细胞外液经电压依赖性钙通道流人细胞内，从而减少细胞内Ca2+浓度的药物，有效地预防细胞内钙超载，从而对缺血再灌注有保护作用。在生理情况下肝细胞内外存在Ca2+浓度差但保持得相当稳定，对维持细胞的各种代谢过程十分重要。但在缺血再灌注损伤时Ca2+即可通过细胞膜上钙通道流入细胞内，破坏了肝细胞分裂、增殖、能量代谢及氧的供求关系，细胞膜变薄，细胞膜损伤，影响线粒体呼吸功能和氧化磷酸化，ATP生成减少，使肝细抱变性、坏死。如灌注液中使用Ca2+拮抗剂，则对缺血所致的肝细胞损伤有明显的保护作用。由于器官保存液含有盐酸地尔硫卓，从而减轻钙超载；并能促进平滑肌松弛及血管扩张和血流增加，提高器官和组织对缺血的耐受性，促进器官和组织功能恢复。它含有这种逆转因热缺血造成的血管内皮细胞损伤药物，能有效地防治被保存器官的血管内皮损伤。应用该保存液可有效延长移植器官的存活时间，提高移植器官在宿主体内的存活率，还可以减轻缺血再灌注损伤，它可以替代传统的UW液应用于包括肝脏、肾脏、胰腺、心脏、等重要脏器的移植。本专利技术的优点还在于采用了第三代的中分子量、低取代级的羟乙基淀粉(平均分子量为200KD，取代级为0.5MS)，与高分子量(450～480KD)羟乙基淀粉相比，其对凝血功能的影响较小；与低分子量(70～130KD)羟乙基淀粉相比，其清除快、体内蓄积少，有防堵毛细血管渗漏作用。具体实施例方式实施例1器官保存液的制备(以配制1000ml为例)原材料的准备羟乙基淀粉65g；乳糖酸钾41.2g；MgSO4·7H2O 1.25g；腺苷本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种器官保存液，其特征在于，在１０００ｍｌ器官保存液中含有：５ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ溶液３ｍｌ以及羟乙基淀粉５８．５～７１．５ｇ；乳糖酸钾３７．０８～４５．３２ｇ；ＭｇＳＯ↓［４］７Ｈ↓［２］Ｏ１．１２～１．３ ８ｇ；腺苷１．６１～１．９７ｇ；别嘌呤醇０．１３～０．１６ｇ；ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］３．１５～３．８５ｇ；蔗糖９．２３～１１．２９ｇ；谷胱甘肽０．９２～１．１２ｇ；盐酸地尔硫卓２ ０ｍｇ；ＫＯＨ适量；双蒸水适量；保存液的ｐＨ值为７．３～７．５。

【技术特征摘要】
1.一种器官保存液，其特征在于，在1000ml器官保存液中含有5mol/L的NaOH溶液3ml以及羟乙基淀粉 58.5～71.5g；乳糖酸钾 37.08～45.32g；MgSO47H2O 1.12～1.38g；腺苷 1.61～1.97g；别嘌呤醇0.13～0.16g；KH2PO43.15～3.85g；蔗糖9.23～11.29g； 谷胱甘肽 0.92～1.12g；盐酸地尔硫卓20mg； KOH 适量；双蒸水 适量；保存液的pH值为7.3～7.5。2.根据权利要求1所述的器官保存液，其特征在于所述的羟乙基淀粉的分子量为200KD，取代级为0.5MS。3.如权利要求1或2所述的一种器官保存液的制备方法，其特征在于按照1000ml配制量的具体步骤如下(a)用去离子水配制5mol/L的NaOH溶液3ml备用；配制5mol/L的KOH溶液20ml备用；取5mol/L的KOH溶液5ml，并将0.13～0.16g的别嘌呤醇溶解于其中备用；(b)将800ml双蒸水加入＞1000ml的容器中...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙倍成，陆森，王尤山，罗望，岳明，
申请(专利权)人：南京吉脉生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]