一种利用表面活性剂提高绿色木霉生防活性的方法技术

本发明专利技术涉及一种利用表面活性剂提高绿色木霉生防活性的方法。本发明专利技术以绿色木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　　ｖｉｒｉｄｅ　　Ｔｒ９７０１）生产其活孢子制剂，绿色木霉的发酵以食用菌废料为主，加入适量麦麸、无机营养盐、黄豆渣，以绿色木霉孢子、硅藻土、黄原胶、ＳＤＳ、几丁质等配制成绿色木霉可湿性粉剂，将表面活性剂Ｔｗｅｅｎ－８０（失水山梨醇油酸酯聚氧乙烯醚）的与绿色木霉可湿性粉剂复合施用，可以提高其对蔬菜灰霉病、白粉病等的防治效果，提高绿色木霉在植株的定殖能力。此方法简单、提高绿色木霉生防活性的幅度较大，且具有能显著降低表面和界面张力，对绿色木霉无毒性等诸多优点，应用前景良好。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及提高生防活性的方法，具体涉及一种利用表面活性剂提高绿色木霉防治植物地上部病害的方法。
技术介绍
木霉是自然界中普遍存在的一类真菌，在土壤、植物根围、叶围及种子、球茎表面经常可以分离到。近些年人们发现某些木霉是植物病原真菌的寄生菌或拮抗菌，如哈茨木霉(T.harzianum)、钩状木霉(T.hamatum)、绿色木霉(T.viride)可以防治真菌病害。迄今为止有关木霉在生防方面的研究已开展近70年，在国外已经出现了商品化的木霉制剂。如以防治李属果树银叶病(Chondrostereum purpureum)的木霉制剂在西欧已商品化生产；以色列的Makhteshim Agan公司开发的以哈茨木霉T39菌株为发酵液的生防制剂，商品名Trichodex，剂型为25％可湿粉，它可以用于防治灰霉病菌(Botrytis cinerea)、菌核病菌(Scleratina sclerotiorum)、叶霉病(Cladosporium fulvum)、霜霉病(Pseudoperonasplra cubensis)和白粉病(Sphaerotheca fuliginea)等叶部病害，在国内也有研究利用木霉菌控制植物病害。从公开报道的文献中可以看到人们对生防木霉菌的研究，大多集中在菌株的筛选、鉴定、发酵培养及其利用等方面。其中，绿色木霉(Trichoderma viride)是一种具有广谱抑病能力的真菌，可以通过拮抗、竞争、寄生、诱导抗性、促生等作用方式，对多种植物病害具有明显的防治作用。但是，由于绿色木霉菌制剂为活孢子制剂，易受外界各种因素的干扰，导致其生防活性下降，这一直是阻碍其大规模生产应用的瓶颈问题，因而有待于采用措施解决这一问题，用以提高绿色木霉的生防效果。鉴于绿色木霉是活菌制剂，主要通过活菌孢子来实现其生防活性，因此提高绿色木霉孢子等的活性及其在田间的定殖能力，对于提高该制剂的田间施用效果有很好的作用。因此研究利用一种既能显著降低表面和界面张力，又对绿色木霉菌无毒性作用的表面活性剂，用以提高绿色木霉孢子的存活及其在田间的定殖能力，是提高绿色木霉生防活性的重要途径。
技术实现思路
本专利技术旨在研究一种利用表面活性剂提高绿色木霉生防活性的方法。本专利技术是通过以下技术方案实现上述专利技术目的的。主要内容包括由绿色木霉(Trichoderma viride)的抑菌活性、鉴定、安全性、人工发酵和制剂化及其与表面活性剂Tween-80(失水山梨醇油酸酯聚氧乙烯醚)的复合施用技术，本专利技术的特征在于在具防治植物病害的绿色木霉Tr9701的生物制剂中加入表面活性剂-Tween-80(失水山梨醇油酸酯聚氧乙烯醚)，Tween-80的加入量，配制和施用技术。具体实施例方式下面进一步详述本专利技术。1、绿色木霉Tr9701的抑菌活性、鉴定及其安全性所筛选、利用的生防菌绿色木霉菌Tr9701属半知菌类、丛梗孢目、木霉菌属，为绿色木霉(Trichoderma viride)。通过生防菌对病原菌拮抗活性的初步筛选，获得的绿色木霉Tr9701对立枯病菌、灰霉病菌有强拮抗活性，且对多种病原菌都有不同程度的抑制作用，是比较理想的生防菌株。当绿色木霉遇到病原菌时，受到刺激和诱导，可产生溶菌酶(如几丁质酶等)，抑制立枯病菌和灰霉病菌等的生长，并可降解菌丝。且其适应性广，生长和繁殖快，可迅速利用营养并占据空间，抑制病菌生长侵染。将所获绿色木霉Tr9701进行温室茄苗接种防病试验，绿色木霉菌剂对立枯菌的防治效果较好，子叶期防效达73.3％，真叶期达71.34％。通过伤口接种安全试验，绿色木霉Tr9701均未引起茄子、黄瓜和烟草萎蔫或猝到，未见其根部和叶部发生病变，植株生长正常，说明所筛选到的绿色木霉Tr9701对茄子和黄瓜等植株是安全的，无致病性。对绿色木霉Tr9701进行生物学测定，其以小麦粉和豆粉浸出液培养基生长最适，在其上孢子生成最快、产生孢子量多，分生孢子在1％葡萄糖溶液中萌发效果最好；20℃～30℃为其菌落生长和分生孢子形成的适宜温度；木霉菌菌落生长和孢子可以耐受45℃的高温，致死温度为55℃持续15min；适宜pH为5～8；短时紫外线照射不会对绿色木霉菌的生长和孢子着生产生影响。2、绿色木霉的人工发酵1)绿色木霉Tr9701(Trichoderma viride)，菌株转接保存在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，培养基成分为马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000mL，pH6.5～7。扩繁斜面培养基采用小麦粉培养基斜面培养(小麦粉培养基全麦粉20g、葡萄糖20g、酵母膏2g、琼脂20g，加水1000mL，pH6.8～7.0)，26℃、光照培养5天，培养绿色木霉产生孢子。2)液态发酵液态发酵培养基采用小麦粉培养液，成分包括全麦粉20g、葡萄糖20g、酵母膏2g，加水1000mL，pH6.8～7.0。培养基灭菌后接种绿色木霉种子液(孢子浓度5×106个孢子/mL)，种子液与培养液的接种比例为1∶30，26℃、200rpm、光照震荡培养5天，培养绿色木霉产生菌丝球和孢子。3)固态发酵固体发酵培养基可选用小麦粒培养基和食用菌废料培养基培养。小麦粒培养基配方小麦粒、葡萄糖、酵母浸膏以1000∶20∶10的比例混匀，使含水量达到80～100％，初始pH6.5～7；食用菌废料培养基配方食用菌废料、麦麸、黄豆渣以500∶100∶20以的比例混匀，其中添加磷酸二氢钾(KH2PO4)0.2％～0.4％、硫酸镁(MgSO4`7H2O)0.02％。培养基灭菌后接种绿色木霉种子液，按照孢子悬浮液∶固体基质＝2.5∶100，将孢子悬浮液均匀加入固体发酵基质中，24～26℃，光照培养6～8天，培养期间应定期震荡基料通气。表1、不同时期绿色木霉菌孢子种群密度变化(小麦粒培养基) 表2、不同时期生防木霉菌孢子种群密度变化(食用菌废料培养基) 3、50％绿色木霉可湿性粉剂的配方及其贮存性能50％绿色木霉可湿性粉剂配方硅藻土或膨润土、绿色木霉菌培养孢子、黄原胶和SDS和几丁质分别按照46.7％、50％和3.3％的比例混合均匀，并进行细化细度95％以上可通过100目筛，制成品外观松散、流动性好。绿色木霉活菌制剂应该在密闭条件下室温保存，有条件的可以低温保存，低温密闭条件更有利于延长绿色木霉制剂的保质期。50％绿色木霉可湿性粉剂品质标准为有效成分含量≥50％，(孢子数＞10×107孢子/克)；水分＜5％；细度(过100目筛，％)≥95％；4、Tween-80(失水山梨醇油酸酯聚氧乙烯醚)的配制及其配合施用技术50％绿色木霉可湿性粉剂对蔬菜灰霉病、白粉病等均有良好的防治效果，但田间施用过程中，由于环境或施用技术等因素，均会影响其防治效果，因此我们提出采用Tween-80(失水山梨醇油酸酯聚氧乙烯醚)与其混合施用，以提高其防治效果。具体方法采用净化水将Tween-80(失水山梨醇油酸酯聚氧乙烯醚)按照10∶1的比例进行稀释，配制成10％Tween-80稀释液备用，将10％Tween-80(失水山梨醇油酸酯聚氧乙烯醚)与50％绿色木霉可湿性粉剂按照1∶1混合后，按照50％绿色木霉可湿性粉剂的施用剂量稀释施用，经验证该方法可明显提高绿色木霉在植株上的附着力和延展性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用表面活性剂提高绿色木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　　ｖｉｒｉｄｅ）生防活性的方法，包括绿色木霉的人工发酵和制剂化，及表面活性剂Ｔｗｅｅｎ－８０（失水山梨醇油酸酯聚氧乙烯醚）的复合施用技术，本专利技术的特征在于将具防治植物病害的绿色木霉Ｔｒ９７０１的生物制剂中加入表面活性剂－－Ｔｗｅｅｎ－８０（失水山梨醇油酸酯聚氧乙烯醚），用以提高绿色木霉的生防活性，具体涉及Ｔｗｅｅｎ－８０的配制及其协同施用技术。

【技术特征摘要】
1.一种利用表面活性剂提高绿色木霉(Trichoderma viride)生防活性的方法，包括绿色木霉的人工发酵和制剂化，及表面活性剂Tween-80(失水山梨醇油酸酯聚氧乙烯醚)的复合施用技术，本发明...

【专利技术属性】
技术研发人员：王勇，王万立，刘春艳，郝永娟，刘水芳，刘晓琳，
申请(专利权)人：天津市植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]