脑血管疾病的基因疗法制造技术

通过向人蛛网膜下隙导入肝细胞生长因子（ＨＧＦ）基因和／或血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）基因可有效治疗或防止脑血管疾病，如脑血管梗阻、脑梗死、脑血栓形成、脑栓塞、中风、脑出血、烟雾阴影疾病、脑血管性痴呆、阿尔茨海默痴呆等。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及治疗或预防脑血管疾病的新的基因治疗剂和施用该基因治疗剂的新方法。更具体地，本专利技术涉及脑血管疾病的治疗或预防剂，其含有肝细胞生长因子(HGF)基因和/或血管内皮生长因子(VEGF)基因作为活性成分。本专利技术还涉及新的施用方法，其包括向人蛛网膜下隙施用所述治疗或预防剂。新的血管和血管生成的产生与内皮细胞的激活同时被引发。已显示不仅刺激体内血管生成而且对内皮细胞有体外促有丝分裂作用的生长因子被称为“血管生成生长因子”。血管生成生长因子的治疗应用首次被Folkman等(N.Eng.J.Med.2851182-1186(1971))在文献中描述。随后的研究证实，重组血管生成因子如成纤维细胞生长因子(FGF)家族(科学(Science)2571401-1403(1992)；自然(Nature)362844-846(1993))、内皮生长因子(J.Surg.Res.54575-583(1993))和血管内皮生长因子(VEGF)可用于促进和/或增强心肌和后肢缺血动物模型中侧支循环分流(collateral circulation shunt)的形成(循环(Circulation)90II-228-II-234(1994))。而且，本专利技术人发现HGF和VEGF一样起内皮特异性生长因子的作用(J.Hypertens.141067-1072(1996))。上述利用血管生成生长因子治疗血管疾病的策略被称为“治疗性血管生成”。后来，该策略被应用于人的缺血疾病。但是，该策略在脑缺血中的有效性至今尚不知道。肝细胞生长因子(HGF)是在多种细胞中显示促有丝分裂、促游动性和形态发生活性的多效细胞因子(自然342440-443(1989))。HGF对脑的作用已有如下报道。例如，已知HGF和跨膜酪氨酸激酶的c-Met/HGF受体一起在脑的各个区域表达，而且，HGF和c-Met的可操作连接增强海马原代培养物中神经元的存活，并在神经元的体外发育中诱导neutrite延伸(细胞生物学杂志(J.Cell.Biol.)126485-494(1994)；日本未审查专利公开文本(Kokai)7-89869)。最近，已报道缺血神经元诱导HGF(脑研究(Brain Res.)799311-316(1998))，在海马中重组HGF对缺血后的延迟神经元死亡有神经保护作用，向脑连续注射重组HGF有效减小梗死的大小(J.Cereb.Blood Flow Metab.18345-348(1998))。这些发现提示HGF在脑缺血中起着重要的神经营养因子的作用。另一方面，血管内皮生长因子(VEGF)是对内皮细胞有促有丝分裂作用的二聚体糖蛋白，并具有增强血管透性的能力。VEGF对内皮细胞具有直接和特异的促有丝分裂作用(Biochem.Biophys.Res.Commun.161851-858(1989))。VEGF的结合位点包括酪氨酸激酶受体Flt、Flk-1和KDR存在于内皮细胞上，但不存在于其它类型细胞上，由此将VEGF的作用限制在内皮细胞。关于VEGF对脑的作用，已报道，中枢神经系统中的VEGF被脑缺血疾病快速诱导(分子细胞生物学(Mol.Cell.Biol.)164604-4613(1996))，而且给脑表面施用重组VEGF有效降低梗死的量(J.Cereb.Blood Flow Metab.18887-895(1998))。但其细节尚不知道。另一方面，除了HGF和VEGF的上述作用外，如上所述，这些因子还是有效的血管生成生长因子(细胞生物学杂志(J.Cell.Biol.)119629-641(1992)；Biochem.Biophys.Res.Commun.161851-858(1989))。缺血发病已知在缺血周围引起活跃的血管生成，这与人存活的延长有关(中风251794-1798(1994))。因此，血管生成被认为在脑缺血的康复和防止未来发病中起重要作用。但是，使用重组HGF或VEGF的治疗性血管生成对脑缺血等实际上是否可行还不知道。而且，重组血管生成生长因子从脑中迅速消失，因此需要向脑中不断注射，该程序在临床治疗中相当危险和不切实际。因此，如果将基因导入技术用于在缺血性脑及其周围连续表达和分泌血管生成生长因子，将是合理的。至今还没有HGF基因或VEGF基因应用于(基因治疗)脑中的缺血性疾病的例子，而且可能因为脑组织的独特特征，对于其适用性也没有建议。本专利技术的公开本专利技术涉及用于治疗或预防脑血管疾病的新的基因治疗剂，和用于施用所述基因治疗剂的新的方法。更优选地，本专利技术涉及用于治疗和预防脑血管疾病的新的药剂，其包含肝细胞生长因子(HGF)基因和/或血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因作为活性成分。本专利技术还涉及新的施用方法，其包括向蛛网膜下隙施用所述治疗或预防剂。本专利技术人在体内研究了HGF基因和VEGF基因的导入是否能在缺血脑的表面诱导血管生成。结果，我们揭示(a)转染HGF基因或VEGF基因后，在延长的期间内在脑中检测到这些蛋白质，(b)用HGF基因或VEGF基因转染进行治疗可在缺血脑的表面诱导血管生成，(c)HGF基因或VEGF基因的转染可有效治疗血管阻塞引起的脑中血流量减少，和(d)该治疗在阻塞之前实施时也是有用的。而且，我们还证明这些基因的导入通过新的施用方法，即导入蛛网膜下隙，可更为有效地获得。此外，本专利技术人还发现由于缺血在海马CA-1区引起的延迟神经元死亡可被HGF基因的导入抑制。基于以上发现，完成了本专利技术。因此，本专利技术提供描述于下列(1)到(23)项的专利技术。(1)脑血管疾病的治疗和预防剂，其包含HGF基因和/或VEGF基因作为活性成分；(2)上述(1)中的治疗或预防剂，其中脑血管疾病是脑血管梗阻、脑梗死、脑血栓形成、脑栓塞、中风、脑出血、烟雾阴影疾病、脑血管性痴呆、阿尔茨海默痴呆和脑出血或脑梗死的后遗症等；(3)脑中血流量减少的治疗或预防剂，其包含HGF基因和/或VEGF基因作为活性成分；(4)脑中血管生成的促进剂，其包含HGF基因和/或VEGF基因作为活性成分；(5)脑中神经元死亡的抑制剂，其包含HGF基因作为活性成分；(6)上述(5)的抑制剂，其中脑中神经元死亡是脑缺血引起的延迟神经元死亡；(7)脑中神经细胞凋亡的抑制剂，其包含HGF基因作为活性成分；(8)上述(1)-(7)之任一项的药剂，其包含HGF基因和/或VEGF基因作为活性成分，并且其联合HGF蛋白和/或VEGF蛋白一起使用；(9)上述(8)的药剂，其包含HGF基因作为活性成分，并且其联合HGF蛋白一起使用；(10)(1)-(9)之任一项的药剂，其中HGF基因和/或VEGF基因采用HVJ-脂质体的形式；(11)(1)-(10)之任一项的药剂，其被施用至蛛网膜下隙中；(12)制备(1)-(11)之任一项的药剂的方法，其包括将HGF基因和/或VEGF基因与药学上可接受的溶剂混合；(13)脑血管疾病的治疗或预防方法，其包括向人导入HGF基因和/或VEGF基因；(14)血流量减少的治疗或预防方法，其包括向人导入HGF基因和/或VEGF基因；(15)促进脑血管生成的方法，其包括向人导入HGF基因和/或VEGF基因；(16)抑制脑中神经元死亡的方法，其包括向人导入HGF基本文档来自技高网...

【技术保护点】
脑血管疾病的治疗或预防剂，所述药剂包含ＨＧＦ基因和／或ＶＥＧＦ基因作为活性成分。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：森下龙一，荻原俊男，
申请(专利权)人：安增生摩祺株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]