杀灭土壤线虫微生态菌制剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种杀灭土壤线虫微生态菌制剂及其制备方法。杀灭土壤线虫的微生态菌制剂是巨大芽孢杆菌与细黄链霉菌优化组合的复合微生物，其中各组分的重量百分比为：巨大芽孢杆菌６０％～８０％，细黄链霉菌２０％～４０％。本发明专利技术的积极效果在于：菌制剂经活化，施入土壤中能很快形成微生态优势菌群，杀灭土壤线虫效率接近１００％，驱除蛴螬率达９５％以上。菌制剂的有效菌落数高，适应性强，对修复土壤生态环境具有明显的作用。

【技术实现步骤摘要】
生物
，本专利技术涉及一种杀灭土壤线虫微生态菌制剂及其制备方法。
技术介绍
目前我国的土壤生态系统己经或正在受到严重破坏，土壤线虫显著增多，植物病害的种 类和范围不断增加，这都是土壤生态系统遭到破坏的明证。其中土壤线虫是直接影响农作物 产量的土壤害虫，尤其是种植花生、红薯的土壤，线虫可以把整块整块土地的花生、红薯吃 光或破坏，几乎绝收。以前只是寻求化学杀虫剂，但其第一年有效，第二年则几乎无效，而 且它所造成的土壤污染几十年都消除不掉。所以，研究开发微生物制剂杀灭线虫势在必行。 国内外己有一些研究，但是，还未见高密度、高活性，能大面积使用的微生态菌制剂的报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种高密度、高活性的杀灭土壤线虫微生态菌制剂 及其制备方法。本专利技术解决该技术问题所采用的技术方案是以巨大芽孢杆菌(AS 1.217， Ba'〃w megaten'wm)为主，辅以适量细黄链霉菌 (AS4.891， ^reptow少c^ wz'cn y^vM^，并吸附固定化于麦麸上制备成菌制剂。两株菌种 均购于中国科学院微生物研究所菌种保藏中心。杀灭土壤线虫微生态菌制剂是上述巨大芽孢杆菌与细黄链霉菌优化组合的复合微生物组 成，其中各组分的重量百分比为巨大芽孢杆菌60% 80%，细黄链霉菌20% 40%。杀灭土壤线虫微生态菌制剂的制备方法包括下述步骤1. 将保存的各斜面菌种活化，分别摇瓶培养。巨大芽孢杆菌和细黄链霉菌都用可溶性淀 粉培养基培养，培养基pH7.0 7.5， 12rC高压灭菌20-30分钟；巨大芽孢杆菌，35 40 。C培养20 24小时；细黄链霉菌，28 3CTC培养36 50小时。2. 用玉米淀粉培养基， 一级液体扩大培养巨大芽孢杆菌与细黄链霉菌；接种量5% 10%。3. 用玉米淀粉培养基，二级液体扩大培养巨大芽孢杆菌与细黄链霉菌；接种量5% 10%。4. 以麦麸为载体分别固体扩大培养并固定化于麦麸上。麦麸灭菌前加入10%玉米淀粉的 培养液，固体扩大培养条件30 37°C，不断搅拌并通入净化的空气。5. 将巨大芽孢杆菌与细黄链霉菌经30 45'C温热风干燥，然后粉碎。6. 将吸附于麦麸上的巨大芽孢杆菌与细黄链霉菌混合，各菌组分的重量百分比为巨大 芽孢杆菌60% 80%，细黄链霉菌20% 40%。本专利技术的有益效果1)复合菌固定化于麦麸上，使每克复合菌制剂的有效菌菌落数(CFU)可高达100个亿， 几乎达到了最大可能数，至今还未见如此高含菌量菌制剂的报道.麦麸不仅能为所培养菌提供一些营养成分，还由于其网状结构，具有较大的比表面积，所以能在单位体积内附着吸附固 定化较多的菌体。所以，有效菌一旦施入土壤可以很快形成优势菌群，发挥杀灭线虫的作用， 杀灭率接近100%。还有杀灭或驱除蛴螬(金龟子的幼虫)的作用，杀灭率或驱除率达95% 以上。2) 土壤线虫的肠壁细胞含有较多的几丁质，而巨大芽孢杆菌能分泌较多的几丁质酶。所 以，土壤线虫一旦遇到巨大芽孢杆菌，由于其肠壁遭到巨大芽孢杆菌几丁质酶的破坏，最后 必死亡。巨大芽孢杆菌还具有把土壤固定化的磷转化为可溶性磷的作用，可溶性磷是植物和 微生物可利用的磷。细黄链霉菌，能产生抗生素抗病驱虫，分泌刺激素，促进植物生长，转化矿物质。 二者相互配合，不仅杀虫驱虫而且促进、修复土壤生态系统平衡。具体实施方式 实施例1按下列步骤进行-1) 将4'C保存的各斜面菌种活化，分别摇瓶培养。巨大芽孢杆菌和细黄链霉菌都用可溶 性淀粉培养基培养，具体配方如下可溶性淀粉20g， KNO:, lg,NaCl 0. 5g, K, 0. 5g, MgS04. 7H20 0. 5g, FeS04 0, Olg,蒸馏水lOOOmL， pH7. 2， 12rC高压灭菌20分钟。巨大 芽孢杆菌，37匸培养24小时；细黄链霉菌，3(TC培养48小时。2) —级液体扩大培养(巨大芽孢杆菌与细黄链霉菌分别单独扩大培养，培养基用玉米淀 粉，培养条件同上)；接种量5%。3) 二级液体分别扩大培养，培养基和培养条件同上；接种量5%。4) 以麦麸为载体分别固体扩大培养并固定化于麦麸上。麦麸灭菌前加入10%玉米淀粉培 养液，固体扩大培养条件30 37°C，不断搅拌并通入净化的空气。5) 将上述两种菌35。C温热风干燥，含水率20%以下，然后粉碎，将吸附于麦麸上的各 菌按重量百分比混合巨大芽孢杆菌600g，细黄链霉菌400g，充分混合，即可得到本发 明的菌制剂。实施例2按下列步骤进行-1) 将4'C保存的各斜面菌种活化，分别摇瓶培养。巨大芽孢杆菌和细黄链霉菌都用可溶 性淀粉培养基培养，具体配方如下可溶性淀粉20g， K亂lg,NaCl 0.5g, K2,4 0. 5g, MgS04. 7H20 0. 5g， FeS04 0. Olg,蒸馏水lOOOml， pH7. 2， 121。C高压灭菌20分钟。巨大 芽孢杆菌，37t:培养24小时；细黄链霉菌，3(TC培养48小时。2) —级液体扩大培养(巨大芽孢杆菌与细黄链霉菌分别单独扩大培养，培养基用玉米淀 粉，培养条件同上)；接种量10%。3) 二级液体分别扩大培养，培养基和培养条件同上；接种量10%。4) 以麦麸为载体分别固体扩大培养并固定化于麦麸上。麦麸灭菌前加入10%玉米淀粉培 养液，固体扩大培养条件30 37°C，不断搅拌并通入净化的空气。5) 将上述两种菌45'C温热风干燥，然后粉碎，将吸附于麦麸上的各菌按重量百分比混 合巨大芽孢杆菌80kg，细黄链霉菌20kg，充分混合，封装于有聚乙烯内衬的包装袋内，含 水率20°/。，有效期一年。实施例3按下列步骤进行1) 将4'C保存的各斜面菌种活化，分别摇瓶培养。巨大芽孢杆菌和细黄链霉菌都用可溶 性淀粉培养基培养，具体配方如下可溶性淀粉20g， KNQ, lg，NaCl 0. 5g， K2HP04 0. 5g， MgS04. 7H20 0. 5g, FeS04 0. Olg，蒸馏水1000ml, pH7. 2， 121。C高压灭菌20分钟。巨大 芽孢杆菌，37'C培养24小时；细黄链霉菌，3(TC培养48小时。2) —级液体扩大培养(巨大芽孢杆菌与细黄链霉菌分别单独扩大培养，培养基用玉米淀 粉，培养条件同上)；接种量10%。3) 二级液体分别扩大培养，培养基和培养条件同上；接种量5%。4) 以麦麸为载体分别固体扩大培养并固定化于麦麸上。麦麸灭菌前加入10%玉米淀粉培 养液，固体扩大培养条件30 37°C，不断搅拌并通入净化的空气。5) 将上述两种菌45t:温热风干燥，然后粉碎，将吸附于麦麸上的各菌按重量百分比混 合巨大芽孢杆菌750kg，细黄链霉菌250kg，充分混合，封装于有聚乙烯内衬的包装袋内， 含水率20%，有效期一年。实施例4:测定分离土壤线虫的方法
本专利技术用离心浮选法，这种方法能够有效的分离土壤中包括线虫卵及死体、非游动性线虫在内的大部分线虫。步骤如下取过20目筛土壤样品10g放在离心管内，加水10 15毫升充分震荡，混合； 将比重为1.20的蔗糖水溶液(蔗糖800g溶于l升水中)IO毫升，用移液管或加样器放 进离心管底部；2500g,离心5min。溶液分成两层，线虫聚集在交界层，用滴管吸取交界层本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种杀灭土壤线虫的微生态菌制剂，其特征在于：该菌制剂由巨大芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）和细黄链霉菌（Ｓｔａｅｓｔｏｍｙｃｅｓｍｉｃｒｏｆｌａｖｕｓ）优化组合的复合微生物组成，其中各菌组分的重量百分比为：巨大芽孢杆菌６ ０％～８０％，细黄链霉菌２０％～４０％。

【技术特征摘要】
1.一种杀灭土壤线虫的微生态菌制剂，其特征在于该菌制剂由巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)和细黄链霉菌(Staestomyces microflavus)优化组合的复合微生物组成，其中各菌组分的重量百分比为巨大芽孢杆菌60％～80％，细黄链霉菌20％～40％。2. 如权利要求1所述的杀灭土壤线虫的微生态菌制剂的制备方法，其特征在于它 包括下述步骤1) 将保存的各斜面菌种活化，分别摇瓶培养；巨大芽孢杆菌和细黄链霉菌都用 可溶性淀粉培养基培养，培养基pH7.0 7.5, 115 121。C高压灭菌20 30 分钟；巨大芽孢杆菌，35 4...

【专利技术属性】
技术研发人员：张清敏，崔合香，崔小会，刘曼，吉雪莹，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]