用于诱导对移植物的免疫耐受性的、包含免疫毒素和抑制树突细胞成熟的因子的组合物制造技术

本发明专利技术提供一种在受体中诱导对移植物的免疫耐受性的方法，所述方法包括：给予该受体一种免疫毒素，由此减少该受体的Ｔ细胞群；以及给予该受体一种抑制树突细胞成熟的因子。本发明专利技术也提供筛选与免疫毒素在诱导免疫耐受性方面起协同作用的因子的方法；以及筛选抑制树突细胞成熟的因子的方法。此外，本发明专利技术提供一种治疗患有自身免疫疾病的受治疗者的方法；该方法包括：给予该受治疗者一种免疫毒素，由此减少该受治疗者的Ｔ细胞群；且给予该受治疗者一种抑制树突细胞成熟的因子。在本文中，也提供一种组合物，所述组合物包括一种免疫毒素和一种抑制树突细胞成熟的因子。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
在过去的10年间，已用环孢菌素、硫唑嘌呤、强的松、以及各种各样其它的用于维持免疫抑制的免疫抑制剂治疗了大多数的移植受体。在美国，维持免疫抑制治疗的平均年费用大约是$10,000。除了所述的费用之外，这些药剂因为其非特异性的作用而具有相当大的副作用，所述副作用包括使细胞和器官的功能遭致损害以及增加对感染的易感性。移植免疫生物学中的一个主要目标是产生对移植物特异性的免疫耐受性；所述的免疫耐受性具有使患者摆脱持续药理学免疫抑制的副作用及其伴随的并发症和费用的潜力。在啮齿动物方面，已将抗T细胞疗法(抗淋巴细胞球蛋白)与供体细胞的胸腺注射结合使用(Posselt等，Science 1990；2491293-1295以及Remuzzi等，Lancet 1991；337750-752)。在啮齿动物模型中已证明成功的胸腺耐受性涉及在来自供体的器官同种异体移植之前，将受体胸腺暴露于同一个供体的同种抗原。然而，在大的动物方面还没有报道过胸腺的耐受性，且它与人中的耐受性的关系是未知的。实现免疫耐受性的一种方法是在移植之前，由于希望诱导对后面的移植物的耐受性，而使受体暴露于来自供体的细胞。这种方法涉及在施用了抗淋巴细胞血清(ALS)后不久的、或辐射后不久的所述受体的胸腺中，放置呈递MHC I类抗原的供体细胞(例如骨髓)。但是，这种方法已证明是难以适合于活的灵长类(例如猴或人)的。ALS和/或辐射使得宿主对疾病或副作用敏感，和/或ALS和/或辐射是不够有效的。如果能够有诱导对于移植、特别是对于异种移植的特异性免疫耐受性的安全方法；那么，由于可将其立即应用于新的移植，以及由于它可潜在地应用于移植物功能稳定的受体中的现存移植物，这种方法将具有极大价值，且会引起全世界病人和从事移植医生的注意。因此，期望有一种高特异性的免疫耐受性诱导。此外，需要一种在灵长类中用于给予耐受性且无使用ALS或辐射的有害效应的方法。而且，所述的目标是获得耐受性而不是简单地延迟排斥反应。一个重要的目的是将所述排斥反应抑制到排斥不成为一种减少移植受体平均寿命之因素的程度。专利技术概述本专利技术提供一种诱导对受体中移植物的免疫耐受性的方法，所述方法包括给予该受体一种免疫毒素，由此减少该受体的T细胞群；以及给予该受体一种抑制树突细胞成熟的因子。把所述的抑制树突细胞成熟的因子给予该受体至少一次，且优选在移植当天给予。更优选地是，在移植后一至两周的疗程期间，将所述抑制树突细胞成熟的因子再给予该受体四至十四次。可任意选择地，可在移植之前将所述的抑制树突细胞成熟的因子给予该受体，和/或可以在采收所述移植物之前，将所述抑制树突细胞成熟的因子给予该供体。所述的抑制树突细胞成熟的因子可以是NfκB核转位的一种抑制剂，所述核转位抑制剂包括例如，脱氧精胍菌素、甲基-脱氧精胍菌素、以及其它的脱氧精胍菌素的衍生物或类似物。其它的抑制树突细胞成熟的因子可包括例如，一种可溶性白细胞介素17(IL-17)受体Fc融合蛋白、一种糖皮质激素、肿瘤坏死因子α结合的一种阻断剂、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子结合的一种阻断剂、IL-12p70结合的一种阻断剂、或IL-1β结合的一种阻断剂。抑制树突细胞成熟的因子也可包括一种未成熟树突细胞表位的一种阻断剂、或一种涉及树突细胞成熟的树突细胞前体表位的一种阻断剂，所述的树突细胞前体表位例如一种抗CD40配体(即抗CD154)，且更具体地是，该抗CD40配体可以是5C8或其类似物的一种衍生物。本专利技术也提供一种筛选方法，即筛选与一种免疫毒素在诱导免疫耐受性方面起协同作用的因子的方法；所述方法包括将一种供体移植物移植到一个受体中，给予该受体一种免疫毒素，由此减少该受体的T细胞群；给予该受体所述的待筛选因子；获得一份包含树突细胞的样品；并测定在该样品中表达或者可被诱导表达成熟树突细胞之一种特异性标记的树突细胞的百分数；其中低的百分数表明协同作用。同样，本专利技术提供一种筛选方法，即筛选抑制树突细胞成熟的因子的方法，该方法包括由一份来自一受治疗者的、包含树突细胞的样品获得一个未成熟树突细胞群；在存在所述的待筛选因子的情况下培养所述的细胞群；且测定表达或者可被诱导表达成熟树突细胞之一种特异性标记的树突细胞的百分数；其中低的百分数表明对树突细胞成熟的抑制。本专利技术也提供一种治疗方法，即治疗患有一种自身免疫疾病的受治疗者的方法；所述方法包括给予该受治疗者一种免疫毒素，由此减少该受治疗者的T细胞群；且将一种抑制树突细胞成熟的因子给予该受治疗者。在本文中，也提供一种组合物，所述组合物包括一种免疫毒素和一种抑制树突细胞成熟的因子。更具体地讲，本专利技术提供一种组合物，其中，所述免疫毒素是一种针对CD3表位的抗T细胞免疫毒素，或者在其中，所述的抑制树突细胞成熟的因子是NfκB核转位的一种抑制剂。附图简述附图说明图1显示通过在第0天和第+1天用免疫毒素以及在第0-14天用DSG对所述的移植受体进行联合治疗，诱导肾移植耐受性，导致了主要为Th2细胞因子的极化。到移植后的第二周时，在接受所述联合治疗的组中显示出IL4极化(与仅用免疫毒素治疗的组相比IL4的水平较低，而与干扰素γ水平相比IL4的水平较低)。在4周时，所述接受DSG达两周的组在IL4极化方面显示出一种持续的、逐渐的增加；而在接受DSG仅达5天的组中，所述的极化则不再持续，且细胞因子型式是相反的。所述IL4极化的出现与抗CD3免疫毒素的类型无关，所述抗CD3免疫毒素即完整的IgG形式或F(Ab)2的形式。图2A、2B、及2C显示了对或者用完整的IgG免疫毒素(FN18-CRM9)、或者用F(Ab)2免疫毒素(FNl8-F(Ab)2-CRM9)、或者用缓冲的盐水(PBS)对照治疗的刚获得的恒河猴外周血淋巴细胞进行RT-PCR分析的结果。图2A表示在没有DSG的情况下的IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ的mRNA。图2B表示了在用DSG(2.5μg/ml)治疗的细胞中的IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ的mRNA。图2C表示了各种各样的mRNA与肌动蛋白对照的密度比。专利技术详述本专利技术提供一种利用一种免疫毒素诱导免疫耐受性的短疗程治疗方案，当将所述免疫毒素与抑制树突细胞成熟的因子联合使用时，则在保持移植物功能的同时，防止移植排斥。因此，本专利技术提供一种在受体中诱导对移植物的免疫耐受性的方法，所述方法包括给予该受体一种免疫毒素，由此减少该受体的T细胞群；以及给予该受体一种抑制树突细胞成熟的因子。正如各处所用的，“移植物”可以包括同种器官或异种器官、组织、或者细胞的移植物。例如，该移植物可以选自肾、肝、心脏、胰、肺、皮肤移植物、以及胰岛、肝细胞、干细胞前体和分化的干细胞前体的分离的细胞移植物。正如各处所用的，所述“受体”或“受治疗者”最好为哺乳动物，更优选地，所述哺乳动物受体为一种灵长类，且愈加更优选地是人。被治疗的所述“受体”或“受治疗者”包括单个的人、驯养的动物、家畜(例如牛、马、猪、等等)、以及宠物(例如猫和狗)。正如各处所用的，“供体”可以是尸体或活的供体。而且，该供体可以和所治疗的受治疗者是同一物种，或者，可以与所治疗的受治疗者是不同的物种。因此，用本专利技术的方法，可进行灵长类种间的交叉移植(即异种的移植或异种移植本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在受体中诱导对移植物的免疫耐受性的方法；所述方法包括：（ａ）给予所述受体一种免疫毒素，由此减少所述受体的Ｔ细胞群；以及（ｂ）给予所述受体一种抑制树突细胞成熟的因子。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：DM内维勒，JM托马斯，
申请(专利权)人：美国政府卫生与公众服务部，UAB研究基金会，
类型：发明
国别省市：US[美国]