从海洋放线菌中得到的新吲哚并咔唑生物碱及其组合物和用途制造技术

本发明专利技术提供式（１）的化合物和其可药用盐，其中Ｒ↑［１］是氢原子、含１到６个碳原子的烷基或含１个到６个碳原子的烷氧基；Ｒ↑［２］是氢原子、含１到６个碳原子的烷基或含１个到６个碳原子的烷氧基。本发明专利技术也涉及一种获得这种化合物的方法、含有这种化合物的组合物和它们的治疗用途。这种化合物显示出极佳的抗哺乳动物癌细胞系的活性。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

已经从产生斯太罗斯泼林(staurosporine)的放线菌(CLCO-002)的肉汤培养基中分离出新吲哚并咔唑生物碱。其通过在菌株的控制条件下需氧发酵，并分离和纯化其产物来生产。该化合物和发酵肉汤被证明具有抗几种癌细胞系的明显活性。然而，本专利技术的另一个目的是提供药物组合物，供需要使用该活性化合物治疗的患者用药。微生物产品由于当代已经建立了很好的工业生产，引起了人们的关注。因此，本专利技术的另一个目标是从发酵的肉汤中生产活性化合物并分离、提纯。式(1)中R1和R2的定义中，烷基和烷氧基的烷基部分是直链或支链烷基，含1到6个碳原子诸如甲基、乙烷基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、新戊基和己基。优选R1和R2独立地代表氢原子或含1到4个碳原子的烷基，特别是氢原子、甲基或乙基。在本专利技术特别优选的实施方案中，本专利技术涉及4’-N-甲基-5’-羟斯太罗斯泼林(IB-97224)和5’-羟斯太罗斯泼林(IB-97225)，化学结构为 本专利技术也描述了获得式(1)或可药用的盐的方法。这个方法包括培养能够产生式(1)化合物的微生物菌株，从培养肉汤中回收这种化合物，和可选地将所回收的化合物成盐。产生IB-97224和IB-97225化合物的特别优选方法包括在水性营养培养基中和可同化的碳氮源和盐一起在可控浸没需氧条件下培养能够产生IB-97224和IB-97225化合物的微生物菌株。IB-97224和IB-97225化合物从培养的肉汤中回收。优选的培养物是菌株CLCO-002，它的化学、生物化学和形态特性表明它属于放线菌。按照本专利技术其他的放线菌菌株也可以在本方法中使用。如上所述，式(1)化合物特别是IB-97224和IB97225已经发现有很好的抗鼠和人类瘤细胞系的活性，包括P-388D，HT-29，A-549和SK-MEL-28。因此，本专利技术也提供一种治疗或预防哺乳动物恶性肿瘤的方法，包括给需要这样治疗的哺乳动物一定的有效量的如上说明的式(1)的化合物或可药用的盐。本专利技术更进一步涉及如上述定义的式(1)的化合物或可药用的盐在用于制备用于治疗或预防哺乳动物恶性肿瘤的药物中的用途。本专利技术也涉及含有式(1)的化合物或可药用的盐作为活性成分以及可药用的载体或稀释剂的药物制品。药物组合物的例子包括含有合适成分的任何固体(药片、药丸、胶囊、颗粒等等)或液体(溶液、悬浮液或乳状液)，适用于口服、局部或非肠道使用，它们可以含有这种纯化合物或和载体或其他药物活性化合物相结合。当非肠道用药时这些组合物必需是无菌的。药物组合物的正确的剂量按照具体的制剂，使用的模式、具体的位置、患者和细菌或被医治的肿瘤的不同进行调整。其他的因素象年龄、体重、性别、饮食、给药时间、排泄速度、患者的状况、药物组合、反应敏感性和疾病的严重程度应加以考虑。在最大的容忍剂量内能够连续或周期性的用药。专利技术详述生产有机体用于生产新的化合物的微生物优选放线菌菌株，特别是放线菌菌株CLCO-002，保存在西班牙的西班牙典型培养物保藏中心，Universityof Valencia，保藏编号是CECT-3347。这项保藏符合布达佩斯条约的规定，在本申请授权时公众即可获得该保藏物。生物体从加那利群岛的水中收集的无定形的海绵状物质中分离获得。所有的培养在27℃下进行并记录21天的试验数据有机生物体的描述如下形态本项研究所用的培养基是ISP培养基No2、4、5和6(Shirlingand Gotlieb，1966)，ATCC培养基No 172(美国典型培养物保藏中心目录，1989)，Czapek琼脂(Atlas，1993)，Bennet琼脂(Atlas，1993)，1.5％水琼脂(Luedemann)。所有的培养基用50％的人造海水补充。在28℃生长21天后进行研究。观察到若干橙色阴影。非气生型菌丝形成。随后菌丝分支，观察到不溶性的色素。生理学特征用ISP-9(Shirling & Gotlieb，1966)研究碳氮的利用。由于在规定培养基中CLCO-002的生长速率低，碳和氮的利用试验表明有残余生长，因此未能获得清晰的试验结果。采用含提高NaCl浓度的ATTC`s 172培养基测量NaCl抗性。盐的最适浓度是1％。用7％的盐没有观察到生长。细胞的化学成分氨基酸用Hasegawa等(1983)的方法测量二氨基庚二酸。菌株CLCO-002的整个细胞水解产物中出现内消旋二氨基庚二酸的异构体。脂肪酸采用Van der Auwera等(1986)的方法确定FAMEs。FAME成分以及与其他类似菌株的成分比较在表1进行描述。尽管保存的生物体是优选的，但本专利技术不限制或局限于这种特殊的菌株或生物体。本专利技术人的目的是包括在本专利技术范围内的其他的生物体、菌株和突变体。表1TABLE 1菌株CLCO-002和其他放线菌菌株的FAME组成。组成的单位是总脂肪酸含量的百分数。130 i-140 140 i-150 a-150 150 i-161 i-160 161 160 i-171 i-170 a-170 171170 i-181 i-180 cis-181 180CLCO-002 ＜1 ＜1 ＜116.91 3.946.71 ＜1 31.83＜1 ＜13.73 ＜1 ＜1 24.333.31＜1 ＜1 4.13 ＜1STALBUS ＜1 6.52＜19.88 22.92 ＜1 5.5025.29＜1 3.75 1.283.38 8.60 ＜1 ＜1 ＜1 1.09＜1 ＜1SPAMETH 1.21 10.34 ＜11.86 ＜1 4.30 ＜1 15.515.63 8.62 1.08＜1 ＜1 24.029.437.11＜1 4.60 1.04SPVIRIDO ＜1 4.041.10 18.94 2.714.89 ＜1 26.44＜1 4.43 ＜1 2.60 1.58 11.368.587.48＜1 ＜1 1.16AMCITRE ＜1 ＜1 3.18 ＜1 ＜1 1.03 ＜1 6.37 12.62 40 ＜1 ＜1 ＜1 ＜1 1.16＜1 ＜1 14.25 2.82APBRAZIL ＜1 3.15＜115.46 18.91 2.76 ＜1 19.072.15 1.79 ＜1 2.39 9.64 11.182.82＜1 ＜1 3.38 1.06AMPDIGIT ＜1 11.57 ＜111.21 9.96＜1 2.8734.23＜1 1.08 ＜1 1.28 5.08 4.39 1.64＜1 1.767.60 1.54AMYORIE ＜1 3.402.37 19.94 4.661.17 ＜1 11.855.59 18.41 ＜1 2.99 4.44 3.09 2.73＜1 ＜1 6.21 3.04MNCHALC ＜1 1.68＜18.91 2.291.53 1.1538.23＜1 1.88 1.492.32 2.25 5.43 6.9514.58 本文档来自技高网...

【技术保护点】
式（１）的化合物和其可药用的盐：＊＊＊（１）其中：Ｒ↑［１］是氢原子、含１到６个碳原子的烷基或含１到６个碳原子的烷氧基；Ｒ↑［２］是氢原子，含１到６个碳原子的烷基或含１到６个碳原子的烷氧基。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：D加西亚格拉瓦洛斯，J佩兹，LM坎多，F罗梅洛，F埃斯普里戈，
申请(专利权)人：拜奥马研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：ES[西班牙]