预防和减少HIV感染的方法和药物成分技术

尽管已经对ＨＩＶ的遗传结构，ＨＩＶ的几种结构和地理群有较深和广泛的理解，但是在预防和治疗爱滋病方面所取得的成功还是很有限的。这里所描述的是用ｅｓ－ＬＡＰａｓｅ抗体，一种或多种ＬＡＰａｓｅ活性抑制剂，或它们的结合使用来预防和降低ＨＩＶ感染性的方法。也描述了用ｅｓ－ＬＡＰａｓｅ抗体，一种或多种ｅｓ－ＬＡＰａｓｅ活性抑制剂，或抗雌激素化合物来预防和降低ＨＩＶ感染性的方法。提出了新的药物组成。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
此项专利技术阐述抑制HIV感染的方法。这一方法使用对雌激素-受激亮氨酸氨基太酶(es-LAPase)抗体或一个及更多的es-LAPase活性抑制剂，以及它们相结合。这是一个通过使用对es-LAPase抗体，一个或多个es-LAPase活性抑制剂和抗-雌激素化合物抑制HIV传染的方法。抑制HIV感染的新成分也是其中之一。
技术介绍
尽管已经对HIV的遗传结构，HIV的几种结构和地理群有较深和广泛的理解，但是在预防和治疗爱滋病方面所取得的成功还是很有限的。虽然众所周知HIV及其变种是导致人类获得免疫缺陷综合症(AIDS)的主要因素，但是对导致病毒进入的早期分子机制的关键细胞因子的认识和理解还较少。无论是在活体还是在试管进行的研究都表明HIV感染的主要目标是CD4T-细胞。在T-细胞表面的CD4糖蛋白对HIV病毒有高度亲和力。其它分子，特别是来自化学增活受体家族的分子也参与促进病毒进入靶细胞。抑制HIV感染病人病情发展的治疗形式主要在于两种药物逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂。尽管在减缓病毒复制方面是成功的，但受到在病毒内的高速致突变剂的限制，导致药物结合点的改变及伴随的药效丧失。解决这一问题的方法之一时同时使用几种药物来降低病毒抗药株发展的可能性。然而，这种多药物配方引起一系列的副作用，结果顺应性降低。进一步，目前对某些特殊病人如妇女的HIV感染的治疗无特效。最近的报导发现从1991年到1995年HIV感染的妇女数量增加了63％，高于其它任何爱滋病人组，不论什么种族和感染方式。其它报导也证实了妇女(25-44岁)爱滋病发病率和死亡率增加。妇女爱滋病例增加的原因还未知。不仅妇女比男性易于感染，而且抗HIV药物对女性和男性的作用也有很大区别。例如，毒性，副作用，及血液水平也有性别差异。男性和女性激素差别被用来解释这种差别，但并没有明确的迹象。根据以上数据，必须根据男性和女性感染过程的差异制定治疗方案以改进疗效。CD4，假定的HIV受体，和化学增活共同受体(CKR-5，CCR-5和CXCR-4)的作用是独立的，我们描述过其在HIV病毒通道的内膜上和细胞外LAPase的重要作用。此专利技术通过LAPase活性与雌激素的联系克服了原来技术上的限制。这一联系被用来发现新的HIV病毒抑制剂，此抑制剂可以单独使用或与改进功效一起使用。专利技术概述这项专利技术涉及用es-LAPase抗体或es-LAPase活性抑制剂，或两者结合，抑制HIV感染的方法。进一步说明用es-LAPase抗体或es-LAPase活性抑制剂及抗-雌激素化合物抑制HIV感染的方法。新HIV感染抑制剂也是此专利技术的一部分。因此，此研究提供了降低HIV对含有足量LAPase抑制剂T-淋巴细胞感染的方法。此研究进一步提供了降低HIV对T-淋巴细胞的感染性的方法，这些细胞含有足量LAPase特异抗体，更具体讲，是对es-LAPase的特异性单克隆抗体。此研究也提供了降低HIV对T-淋巴细胞的感染性的方法，这些细胞含有足量LAPase特异抗体，及LAPase抑制剂。此研究也提供了降低HIV对T-淋巴细胞的感染性的方法，这些细胞含有足量LAPase特异抗体，LAPase抑制剂及抗雌激素化合物。进一步，根据我们的专利技术，提供了预防或降低HIV感染性的方法，包括给病人所需要的有效量的含有对es-LAPase抗体药物及药物载体。我们还提供了预防或降低HIV感染性的方法，包括给病人服用所需要的含有LAPase抑制剂药物及药物载体。这一专利技术提供了预防或降低HIV感染性的方法，包括给病人服用所需要的含有对es-LAPase特异性抗体药物，LAPase抑制剂及药物载体。这一专利技术还提供了预防或降低HIV感染性的方法，包括给病人服用所需要的含有es-LAPase特异性抗体，LAPase抑制剂和抗-雌激素化合物的药物及药物载体。我们的研究还提供es-LAPase特异性抗体，LAPase抑制剂。我们的研究还提供es-LAPase特异性抗体，LAPase抑制剂和抗-雌激素化合物。图例解释以下用图说明试验特点图一说明乳腺癌细胞系细胞上清液中雌激素对LAPase活性的作用。图二原始SDS PAGE(lane1)，提纯的LAPase(lane2)的MAb 7B6 Westernblot结果。图三由Bestatin，thioredoxin和glutathione进行的LAPase抑制剂的动力学。优选实施方案的描述此项专利技术阐述抑制HIV感染的方法。这一方法使用对es-LAPase抗体或对es-LAPase活性抑制剂，或两者相结合。这是一个通过使用es-LAPase抗体，es-LAPase活性抑制剂和抗雌激素化合物抑制HIV传染的方法。抑制HIV感染的新成分也是其中一部分。我们观察到CD4这一假定的HIV受体的独立作用，和B-化学增活共同受体(CKR-5，CCR-5和CXCR-4)的作用，在HIV病毒内膜上和细胞外LAPase都可以促进HIV进入T淋巴细胞。我们的研究揭示雌激素和雌激素类似物能刺激乳腺癌母细胞和T淋巴细胞中LAPase的活性。研究目的之一是鉴别和提纯受雌激素刺激的LAPase同功酶，即es-LAPase。具体细节在本文的参考文献“对雌激素刺激的亮氨酸氨基太酶”中介绍。另一方面是制备抗es-LAPase同功酶的抗体。抗体的制备方法是众所周知的。一般说来，通过用抗原免疫动物如小鼠，大鼠，兔，羊，马或牛来制备产生抗体的细胞。。免疫步骤及抗原浓度取决于能够提供足够量的产生抗体的细胞。这些产生抗体的细胞可以是脾细胞，淋巴细胞，淋巴结细胞或外周血淋巴细胞。选择适当的融合启动子，使这些产生抗体的细胞与骨髓瘤细胞融合，细胞系可以来源于各种动物如鼠，兔及人类。许多小鼠骨髓瘤细胞系是已知并可从医学科学团体及各种储存机构获得如美国分类培养收集机构。所用的这些骨髓瘤细胞对培养基应具有选择性以使未融合的骨髓瘤细胞在选择性介质中不能存活，而杂交细胞则能存活。最常用的细胞系是抗8-氮鸟票呤系，它含有较少的次黄票呤-鸟票呤-磷酸核糖转移酶，因此不能在HAT培养介质中生长。一般说来，该细胞系应是“非分泌”类，因而不产生抗体。所选的融合启动子是聚乙二醇，其分子量在1000到4000之间。也可用聚乙烯醇，病毒或电场作为融合启动子。这些存活的细胞(杂交物)需经筛选，找出能分泌特异性抗体的细胞。通常用ELASA进行初选。进一步，将这些杂交物培养上清液加到预先涂好抗原的微滴定盘中，这里所用的抗原是es-LAPase。培养上清液的特异抗体可用第二标记抗体检测。最常用的第二抗体是用过氧化物酶标记的羊-抗-鼠IgG，可购得商品抗体。对es-LAPase呈阳性的培养液用限制稀释法克隆。第二杂交物培养液用上法进行再筛选，阳性培养液用BIAcore(Pharmacia Biosencer AB，Uppsala，Sweden)系统检测。通过测定抗体是否与抗原结合来评估培养液并测定抗原结合的动力学参数。对选择的培养液再克隆直到培养液稳定并获得克隆。刚杂交之后的融合产物含有大约80个染色体。克隆过程是选择那些仍保留抗体生产的染色体密码的细胞。克隆过程一直重复到100％的亚群呈现特异性抗体的生产，这代表杂交物“稳定”。此外杂交物培养皿可有多种克隆，其中有些本文档来自技高网...

【技术保护点】
降低ＨＩＶ对Ｔ淋巴细胞感染的方法，包括用包含足量的ＬＡＰａｓｅ不竞争性抑制剂接触所说的Ｔ淋巴细胞。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：卡布里耶普利多塞胡多，
申请(专利权)人：堪波瑞尔医疗诊断加拿大控股公司，加拿大卫生部，
类型：发明
国别省市：CA[加拿大]