新的乙型肝炎疫苗制剂制造技术

本发明专利技术涉及一种乙型肝炎疫苗的新配方，该疫苗的主要成分为基因工程乙型肝炎病毒表面抗原、人抗乙型肝炎表面抗原抗体、铝佐剂、无毒单磷脂Ａ（ＭＰＬ）等。以该配方制备的乙型肝炎疫苗的免疫原性优于目前使用的铝佐剂疫苗，该乙型肝炎疫苗可用于成人、肾移植病人、肾透析病人等的免疫，以预防乙型肝炎病毒的感染，该乙型肝炎疫苗亦可用于慢性乙型肝炎患者的免疫治疗。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种新的疫苗制剂，特别是乙型肝炎疫苗制剂，该制剂采用的配方，可诱导机体产生较强的免疫反应。可用于成人、其它类型乙型肝炎疫苗免疫失败者、肾透析病人、器官移植病人的免疫，以及慢性乙型肝炎病人的免疫治疗。
技术介绍
乙型肝炎病毒(HBV)为嗜肝DNA病毒，具有双层壳结构，外壳含乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、前S1蛋白(PreS1)和前S2蛋白(PreS2)，内核的表面为乙型肝炎核心抗原(HBcAg)和e抗原(HBeAg)，内核内含双链环状DNA和DNA多聚酶(DNA-P)。自1985年中国开展乙型肝炎疫苗接种工作以后，在免疫儿童中乙型肝炎病毒携带率已由10％左右降低为1％左右。北京、上海等地由于新生儿乙型肝炎疫苗接种率高，学龄前儿童的乙型肝炎病毒携带率已降低至0.5％以下。实践证明，如同其它疫苗可预防疾病一样，接种乙型肝炎疫苗及联合使用乙型肝炎免疫球蛋白是预防和控制乙型肝炎最有效的武器。接种乙型肝炎疫苗不仅可以预防乙型肝炎，而且可以预防与乙型肝炎病毒有关的肝癌，同时还可以预防丁型肝炎。目前中国使用的乙型肝炎疫苗每剂量含5μg、10μg酵母表达的HBsAg或10μg、20μgCHO细胞表达的HBsAg，每剂量含0.5～1.0mg铝佐剂。美国MSD公司生产的用于器官移植、肾透析及免疫力低下者的疫苗剂量为40μg/剂。现用的乙型肝炎疫苗均为含氢氧化铝佐剂的疫苗，能较好的诱导体液免疫，但难于诱发高水平的体液免疫。本专利技术将脱毒单磷脂A(MPL)加入到含HBsAg、人抗乙型肝炎表面抗原抗体(HBIG)及铝佐剂的疫苗中，可有效的刺激机体产生高水平体液免疫。复旦大学上海医学院研制的治疗性乙型肝炎疫苗含乙型肝炎表面抗原及HBIG(乙型肝炎表面抗原超量)，在临床前动物实验及有限的临床应用中表现出具有良好的提升人体体液免疫的作用，在动物试验中还表现出了刺激细胞免疫的作用。本专利技术与其不同之处是抗原与抗体的量均等，即抗原的加入量不多于抗体，另外还加入了免疫增强剂MPL，动物实验的结果明显优于现用的乙肝疫苗。可大辐度的提高人体抗乙型肝炎病毒的体液免疫及细胞免疫，可用于慢性乙型肝炎病人的治疗。
技术实现思路
本专利技术提供一种新的乙型肝炎疫苗制剂，该制剂的特征在于，在配方中加入了无毒(脱毒)单磷脂A(以下简称为MPL)，以及抗原与抗体的量均等，即抗原的加入量不多于抗体，本专利技术的乙型肝炎疫苗是基于打破免疫系统细胞对HBV病毒免疫耐受或对HBsAg低反应者而设计的，疫苗所含的人抗体Fc段与抗原呈递细胞(APC)表面的Fc受体结合，主动呈递乙肝病毒表面抗原，在MPL存在的情况下，有效地激活T细胞，可以产生较强的体液免疫，在试验鼠中诱生高水平的抗-HBs。采用此种新型免疫增强剂及特定类型的抗原提呈既可对免疫抑制药物使用者进行有效的免疫，又可对慢性HBV感染者进行免疫治疗，有望将目前较难治疗的无症状HBV表面抗原(HBsAg)携带者转阴并出现抗-HBs。已有的研究证明疫苗中加入MPL可诱导机体产生高水平的特异性体液免疫及细胞免疫，含MPL的以乙型肝炎病毒表面抗原等为主要成分的乙肝疫苗将会给慢性乙型肝炎的治疗带来光明的前景。本专利技术中使用的乙型肝炎表面抗原为基因工程重组抗原，而不是来源于乙型肝炎病人血浆的乙型肝炎表面抗原。由酵母菌或CHO细胞表达的基因工程表面抗原由226个氨基酸组成。重组酵母菌或CHO细胞表达的HBsAg均可形成22nm颗粒，已用于人群免疫十余年，均表现出良好的预防乙型肝炎病毒感染的效果。本专利技术乙型肝炎疫苗配方中所使用的无毒(脱毒)MPL购自美国Avanti Polar Lipids，Inc，许多报道表明MPL可有效的提高体液免疫及细胞免疫，已广泛用于新型蛋白类疫苗的配方中。本专利技术乙型肝炎疫苗制剂含有乙型肝炎病毒表面抗原、MPL、HBIG、铝佐剂，其中的乙型肝炎表面抗原可以为重组酵母制造或重组CHO表达的乙型肝炎表面抗原或其片段或含pre S1/Pre S2成分的抗原。本专利技术的疫苗制剂，其中，HBIG可以是人抗-HBs、人源化抗-HBs单克隆抗体或人源性抗-HBs单克隆抗体。本专利技术的疫苗制剂，还可含有其它已知的可提高机体免疫的人体或微生物蛋白质及多糖或小分子化合物。本专利技术优选的疫苗制剂每剂中各主成分的含量范围如下MPL 10～100μg、HBsAg 5～120μg、HBIG 5～100IU、铝离子0.25～1.20mg。本专利技术还包括本专利技术的疫苗制剂在制备用于成人、肾透析病人、器官移植病人及乙型肝炎高危人群免疫的药物中的应用。以及在制备慢性乙型肝炎病人的免疫治疗药物中的应用。本专利技术的疫苗制剂可以采用以下方法制备用水溶解脱毒MPL，用磷酸盐缓冲液溶解基因工程乙型肝炎表面抗原，将一定量的HBsAg与不同量的HBIG反应，然后用EIA试剂盒测定反应体系中残存的HBsAg及HBIG的量，确定使反应体系中95％以上的抗原和抗体均参与反应的抗体量。向定量的HBsAg溶液中加入铝佐剂，室温条件下放置，按预先确定的比例加入HBIG(也可在加铝佐剂前加入)，室温条件下反应，再加入适当浓度的MPL溶液。根据HBsAg的加入量，以磷酸盐缓冲液调整混悬液的总体积，再加入1％的硫柳汞(也可不加)即得。动物试验表明本专利技术的新型乙型肝炎疫苗是安全的，对试验动物无可见的毒性。可有效的刺激动物产生高滴度的特异性抗体。按上述配制方法备的乙型肝炎疫苗与其它配方配制的乙型肝炎疫苗或对照疫苗在小鼠中的免疫学试验简述如下材料基因工程(酵母)乙型肝炎表面抗原(20μg/ml)、抗-HBs Mab(3.0mg/ml)、鼠抗体(Mab，3.0mg/ml)、氢氧化铝佐剂(1.0mg/ml)，磷酸铝佐剂(1.0mg/ml)，MPL(2.0mg/ml)，生理盐水。设备Labsystem MK3酶标仪、冰箱、37℃培育箱、洗板机、分析天平、可调定量移液器、玻璃吸管。试验方法先将5mg MPL溶入2.5ml生理盐水中，超声波处理1分钟，备用。各试验组佐剂及各种成分的加量见表1 表1、不同佐剂乙型肝炎疫苗的配制组别HBsAg Al(OH)3AlPO4MPL Anti-HBs Mab Mab HBIG 生理盐水 合(20μg/ml) (1.0mg/ml) (1.0mg/ml) (2mg/ml)(3mg/ml)(3mg/ml) (270IU/ml) 计mlml ml μl μl μl μl ml mlH1 4.0 4.0 / / / / / /8.0H2 4.0 4.0 / / 14.0/ / /8.0H3 4.0 4.0 / 40.014.0/ / /8.0H4 4.0 4.0 / 40.0/ 14.0 / /8.0H5 4.0 4.0 / 40.0/ / 100/8.1H6 4.0*4.0 / / 7.0 / / /8.0P6 4.0 / 4.0 / / / / /8.0P7 4.0 / 4.0 / 7.0 / / /8.0P8 4.0 / 4.0 40.01本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种乙型肝炎疫苗制剂，其特征在于，该制剂中含有乙型肝炎病毒表面抗原，铝佐剂，无毒单磷脂Ａ（ＭＰＬ），人抗乙型肝炎表面抗原抗体（ＨＢＩＧ）。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孔健，蒋先敏，
申请(专利权)人：北京绿竹生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]