一种同步检测Tm和Pa过敏原的磁性免疫层析方法，其特征在于：将样品垫、结合了抗-Tm和抗-Pa免疫磁珠的结合垫、层析膜、吸水垫依次相互交错约2mm粘贴在底板上，然后在上层覆盖透明塑料密封膜，构建成一种可同步检测Tm和Pa过敏原的磁性免疫层析试纸条；其中所述的层析膜上预包被有Pa抗原检测线T1、Tm抗原检测线T2和山羊抗小鼠IgG质控线C，通过层析作用可以捕获免疫磁珠，依据样品层析后形成肉眼可见的1-3条显色条带，实现Tm和Pa过敏原的快速定性检测；或者将所构建的磁性免疫试纸条通过磁性分析仪进行检测，依据样品层析后形成的检测线和控制线的磁信号检测值来实现单一过敏原的定量分析，或两种过敏原的同步定量检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种过敏原的磁性免疫检测技术，尤其是一种可同步检测Tm和1 过敏原的磁性免疫层析方法，属于食品的检验领域，涉及食物过敏原的检测
，也涉及过敏原的临床检测领域。
技术介绍
食物过敏是一个世界性公共卫生问题。调查显示世界上约4%的人口对食物过敏。 为了保护易感者健康，部分国家和地区对食物过敏原的标签标注进行了严格规定，并列入立法范围，因此食物过敏原的检测越来越重要。食物过敏是由食物引起的机体对免疫系统的异常反应，食物过敏原为食物中引发或激起过敏反应的物质，通常是在特定食物中含有的含量丰富、天然存在的蛋白质。根据过敏原反应的速度、机制及临床特点将致敏机制分为 I型、II型、III型、IV型，其中大部分食物过敏是由IgE介导的I型超敏反应，一般症状包括呕吐、腹痛、腹泻等，也包括皮肤反应及呼吸道症状，严重情况下甚至会出现过敏性休克或死亡，目前尚无有效的治疗方法。为了保护易感者健康，部分国家和地区对食物过敏原的标签标注进行了严格规定并列入了立法范围。目前，已被确定的过敏性食物多达180种以上，联合国粮农组织(Food and Agriculture Organization, FAO)报告了 90%以上食物过敏原存在于八大类食物中，即牛奶、鸡蛋、鱼、甲壳类水产品、花生、大豆、坚果类及小麦，其中就包括鱼类和甲壳类水产品及其制品。据调查，在我国15 M岁年龄段人群中，约6%的人有过食物过敏的经历，在我国青少年过敏人群中对鱼类等海产品过敏的约占3-6%，位居其他致敏食物的首位。水产品的主要过敏原可分为两大类，一为贝类及虾蟹等甲壳类动物中的原肌球蛋白(Tropomyosin， 简称Tm)，另外一种则是鳕鱼等鱼类中的小清蛋白(Parvalbumin，简称1^)。由于食物成分的复杂性，加之食品加工过程中使用各种配料和添加剂，传统的化学分析很难满足食物过敏原的检测要求，因此，食物过敏原的快速检测技术研究一直是国内外科学家的研究热点。目前，食物过敏原的检测技术以分析全蛋白或酶解后肽段氨基酸序列的质谱技术、检测编码过敏原DNA片段的聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)技术及分析过敏原性的免疫学检测技术为代表。质谱技术能精确测定全蛋白或酶解后肽段的氨基酸序列，再根据相应数据库来确定致敏蛋白，但是质谱技术存在着费时、所用仪器昂贵、 检测费用相对较高等缺点。PCR方法则在检测过程中易因操作不当受到污染而产生假阳性结果，存在操作要求技术性强、不能反映食物的真正过敏性即人们摄入该食物后会产生过敏反应等缺陷。食物过敏原的免疫学检测技术有酶联免疫吸附法(ELISA)，生物传感器法和免疫层析法。其中ELISA法是目前技术较为成熟的方法，市场上已有杏仁、大豆、花生、甲壳类、芝麻、芥末、羽扇豆、牛奶等食物过敏原的ELISA检测试剂盒，这些试剂盒可在30 60min中内实现定性或半定量检测，但是存在假阳性和假阴性反应。生物传感器法是根据待测物质和分子识别元件特异性结合，发生生物化学反应， 产生的生物学信息通过信号转换器转化为可以定量处理的电、光等信息，再经仪表放大和输出，从而达到分析和检测的目的。目前，微型SI^R生物检测器已应用于食品生产过程中花生过敏原的检测，该检测器可实现在线定量检测。但是生物传感器法需要特定的设备和配件，检测成本高，对硬件设施要求极高。由于食品工业界需要的是快速、简便、高效、特异性强且成本低廉的检测方法，因此，上述这些方法皆无法满足食品工业界的需求。免疫层析技术是ELISA技术原理的扩展应用，一般使用乳胶颗粒、胶体硒、胶体金、脂质体及上转磷等作为着色标记物。在层析时，标记物与待测物之间形成的复合物可被相应的配体所捕获而聚集于硝化纤维膜上的检测线并呈现出标记物所带有的颜色，因此可以通过纤维膜上显色条的有无、颜色深浅和反射光线等从而实现检测目的，具有操作简便、 快速的优点。在目前公开的报道中，大都以胶体金作为指示剂，因此又被称为胶体金检测法。公开号为101881769A的中国专利文献公开了一种检测虾过敏原的免疫胶体金试纸条及其制备方法，可以实现过敏原的定性检测，但是难以进行定量检测，而且目视检测使检测结果不易记录和保存。另外，在待测物质的高通量快速检测方面，也多以胶体金为标记物，如公开号为 CN101358972中国专利文献公开了检测一种或多种猪病毒性腹泻疾病抗体的试纸条。公开号为CN101363856中国专利文献公开了一种同时检测麻疹、风疹病毒特异性抗体IgG抗体的快速检测试纸条。公开号为CN1866021中国专利文献，提出了一种同时快速检测霍乱弧菌01群、0139群及霍乱毒素的试纸条。公开号为CN1904615的中国专利文献提供了一种能同时检测流感A、B病毒抗原的快速检测试纸条。在免疫层析检测技术中，除了采用胶体金作为标记物外，也有采用其它标记物作为指示剂的报道。专利号为US5753517的美国专利公开了一种使用乳胶颗粒作为标记物的定量免疫层析方法和仪器。公开号为CN2014^607的中国专利文献公开了一种以上转磷为标记物检测病毒的免疫层析方法。公开号为CN1645146A中国专利文献公开了一种用荧光稀土纳米颗粒作为标记物的免疫层析方法及其检测试纸条，可用于定量的新型免疫层析检测。此外，以磁性纳米颗粒(简称磁珠)作为标记物的免疫层析检测报道近年来也陆续出现。如公开号为CN101750494A中国专利文献，公开的是乙肝表面抗体的磁性免疫层析试纸条。公开号CN101762690A中国专利文献，公开的是一种定量检测血液中C反应蛋白的磁性免疫层析试纸条及制备方法。公开号CN101551391中国专利文献，公开的是用于检测氯霉素的免疫磁珠层析试纸条技术。公开号US2008/013884A1美国专利文献，公开了在标记物上偶联生物素，利用亲和素与生物素之间的亲和作用在结合双抗夹心模式设计的试纸条检测方法，包括磁性颗粒标记物层析法。另外，近些年在实现待测物质的高通量检测方面也取得一定进展，如公开号CN101566631A中国专利文献，公开的是用于联合检测HIV-1+2抗体和PM抗原的磁颗粒标记层析试纸条。 上述这些公开的专利技术皆采用了磁性免疫层析技术，它以超顺磁性颗粒代替传统的标记物来进行免疫层析，通过检测结合在超顺磁性纳米颗粒上的目标物来提供对生物样本的定量检测数据，再利用被磁颗粒标记抗体所捕获的免疫复合物与磁信号之间的线性关系即可实现对生物样本的快速定量检测目的，磁性免疫层析技术具有灵敏度高、稳定性强、线性范围宽、操作简便、快速等优点。目前，市场上至少有14种商业免疫层析检测试剂盒，检测物质包括牛奶、花生、榛子、甲壳类水产品等过敏原的产品，但是这些产品一般采用的都是胶体金免疫层析法，只能进行单一物质的定性或半定量监测，目前国内外尚无可以实现同时检测水产品中甲壳类和鱼类的主要过敏原的快速现场检测技术。
技术实现思路
本专利技术的目的针对现有技术不能同时检测过敏原Tm和1 的不足和缺陷，提供一种以免疫磁珠为标记物的免疫层析方法，既可单独捕获Tm或1 过敏原，也可同时捕获Tm 和1 过敏原，从而实现同步检测水产品主要过敏原Tm和1 目的。本专利技术提出的这种可同步检测Tm和1 过敏本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种同步检测Ｔｍ和Ｐａ过敏原的磁性免疫层析方法，其特征在于：将样品垫、结合了抗－Ｔｍ和抗－Ｐａ免疫磁珠的结合垫、层析膜、吸水垫依次相互交错约２ｍｍ粘贴在底板上，然后在上层覆盖透明塑料密封膜，构建成一种可同步检测Ｔｍ和Ｐａ过敏原的磁性免疫层析试纸条；其中所述的层析膜上预包被有Ｐａ抗原检测线Ｔ１、Ｔｍ抗原检测线Ｔ２和山羊抗小鼠ＩｇＧ质控线Ｃ，通过层析作用可以捕获免疫磁珠，依据样品层析后形成肉眼可见的１－３条显色条带，实现Ｔｍ和Ｐａ过敏原的快速定性检测；或者将所构建的磁性免疫试纸条通过磁性分析仪进行检测，依据样品层析后形成的检测线和控制线的磁信号检测值来实现单一过敏原的定量分析，或两种过敏原的同步定量检测。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：卢瑛，石良，王锡昌，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：31
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