猪生殖和呼吸综合症病毒(PRRSV)重组禽痘病毒疫苗制造技术

本发明专利技术描述重组载体，如病毒；例如，痘病毒，如禽痘病毒，其含有来自猪生殖和呼吸综合症病毒的外源ＤＮＡ。本发明专利技术还描述含有重组痘病毒的免疫组合物，其用于在施用该组合物的宿主动物中诱导免疫反应。本发明专利技术还描述通过对需要治疗的或易受猪生殖和呼吸综合症病毒感染的动物施用本发明专利技术的组合物来治疗或防止由猪生殖和呼吸综合症病毒引起的疾病的方法。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及重组载体，例如病毒，痘病毒，以及制造和使用该载体的方法。专利技术进一步涉及重组禽痘病毒例如ALVAC，该病毒表达猪的生殖和呼吸综合症病毒(PRRSV)的基因产物；例如，重组载体例如病毒，如ALVAC重组体，含有并表达PRRSV开放阅读框3和5，或5和6，或4和5，或者它们的组合体，尤其是3和5和6，或者4和5和6。本专利技术也涉及免疫组合物或者疫苗，这些组合物或者疫苗诱导针对PRRSV基因产物的免疫反应。专利技术也进一步涉及这些组合物或者疫苗，这些组合物和疫苗提供抗PRRSV感染的保护性免疫。而且，本专利技术涉及制造及使用这些重组载体和组合物的方法。本申请中参考了几篇出版刊物。这些文献的完全引用见说明书末尾权利要求书之前部分，和/或文献引用处。这些文献和本专利
相关；而且，此次申请中引用或者参考的每篇文献(“此处引用文献”)此处引用文献所参考和引用的每篇文献在此引用作为参考。
技术介绍
猪的生殖和呼吸综合症病毒(PRRSV)属于称为动脉病毒(arteriviruses)的包膜的正链RNA病毒家族。该家族中的其它病毒为原型病毒，马动脉炎病毒(EAV)，乳酸脱氢酶病毒(LDV)和猿出血热病毒(SHFV)(deVries等人，1997综述)。同冠形病毒和动脉病毒显著的共有特征近来导致它们在新产生的序列中的定位，巢病毒(Nidoviales)(Pringle，1996；Cavanagh，1997；de Vries等人，1997)。动脉病毒组的四个成员，基因组结构，复制策略和蛋白的氨基酸序列类似，它们在体内和体外感染巨噬细胞的优先选择也相似(Conzelmann等人1993；Meulenberg等人，1993a)。1987年在北美发现一种猪的新型病毒疾病(Hill，1990)而1990年在欧洲(Paton等人，1991)也发现了这种疾病。这种疾病，被不同地认为是猪的生殖和呼吸综合症(PRRS)，猪不育和呼吸综合症(SIRS)，猪的流行性流产和呼吸综合症(PEARS)和神秘猪疾病(mystery swine disease)，其主要特点在于母猪的生育失败及所有不同年龄的猪呼吸问题。病原体，目前认为是PRRS病毒，最初在荷兰分离得到，作为Lelystad病毒(Wensvoort等人，1991)。随后，在北美Benfield等人(1992)和Collins等人(1992)分离到一种相关的病毒(原型病毒株ATCC VR2332)。在感染的巨噬细胞中进行免疫过氧化物酶检验中，PRRSV欧洲分离物的特异性多价抗血清和北美分离物交叉反应，反之亦然(Wensvoort等人，1992)；然而，进一步的试验表明欧洲和北美分离物代表两种截然不同的基因型，这两个基因型独立进化于分离的大陆(Mardassi等人，1995；Meng等人，1995a和b；Murtaugh等人，1995；Nelsen等人，1999)。近乎同时在全球范围出现的由分别进化的病毒引起的猪疾病表明猪的饲养和管理的改变可能导致PRRS的出现(Nelsen等人，1999)。在美国，目前估计40％到60％的畜群受到感染(Bautista等人，1993；Cho等人1993)，而在欧洲，认为在某些地区超过50％的畜群受到PRRSV感染(Albina，1997)。很难衡量该疾病造成的经济效应，该效应在不同的国家不同。在美国，已经记录每年每只猪的损失为500$(Done和Paton，1995)。尽管已经意识到不同的感染畜群不同病例临床效果变化很大而且感染临床症状不明显，生产率在可接受的参数内，但是主要的两组临床征象(Sign)和PRRS的发生相关。这两组为(1)生殖征象包括早产，晚期流产，小猪出生虚弱，死产数和干尸化数目增加(Done和Paton，1995)。(2)呼吸疾病征象在新生猪中也非常重要，主要特征为呼吸困难及咳嗽。尽管所有年龄的猪都有易感性，但是通常这些症状出现在3周龄的猪中。和生殖障碍相比，临床上明显的呼吸器官疾病在实验上很难重复(Zimmermann等人，1997)。这些临床征象改变显著并受到以下因素的影响病毒株(Halbur等人，1995)，感染年龄和遗传易感性差异(Halbur等人，1992)，并发感染(Galina等人，1994)，猪的密度，猪的运动及其居住系统(Done等人，1996)和免疫状态包括可能正在增强的PRRS病毒特异性抗体(Yoon等人，1994)的低水平出现。按照发病机制，由PRRSV诱导的最显著的改变为严重损坏肺泡巨噬细胞，该细胞大量受到损坏(Done和Paton综述，1995；Rossow，1998)。在肺和淋巴节大量单核细胞的凋亡诱导可以来解释PRRSV感染的猪的肺泡巨噬细胞，循环淋巴细胞和单核细胞数量惊人减少的原因(Sirinarumitr等人，1998；Sur等人1998)。结合循环淋巴细胞损坏和粘膜纤毛清除体系的损坏，这可能抑制免疫力并造成猪更易受到二次感染。PRRSV感染后细菌二次感染比率增加已被证实(Galina等人，1994；Done和Paton，1995；Nakamine等人，1998)。PRRSV感染的严重性可能由细菌或者支原体感染而加重(Thacker等人，1999)。此外人们已经发现大量的病毒感染是和PRRS相关的(Carlson，1992；Brun等人，1992；Halbur等人，1993；Done等人1996；Heinen等人，1998)。有3种传播途径(1)鼻对鼻或者亲密接触(Done等人，1996)，(2)浮质(Le Potier等人，1995)，以及(3)通过尿液，粪便，精液传播。通过污染的精液受精途径传播方式已经得到很好的证明(Yeager等人，1993；Albina，1997)。de Vries等人(1997)对动脉病毒的基因组结构做过综述。基因组RNA为单链，有传染性，多聚腺苷酸化并且5′端带帽。PRRSB基因组很小，为15,088个碱基。EAV和LDV基因组稍小分别为12,700个碱基和14,200个碱基。可以得到EAV，LDV和PRRSV基因组完整的序列(Den Boon等人，1991；Godeny等人，1993；Meulenberg等人，1993a)。基因组含有8个开放阅读框(ORF)按照以下顺序编码复制酶基因(ORF 1a和1b)，包膜蛋白(ORF 2和6)和核壳体蛋白(ORF7)(Meulenberg等1993a)。从6个亚基因组RNAs表达ORF2到7，前者在复制过程中合成(Meng等人，1994，1996)。这些亚基因组RNA形成一个3′共末端嵌套，由相同的引导区组成，来自病毒基因组5′末端(Meulenberg等人，1993b)。尽管RNAs结构上为多顺反子，但是翻译限制于唯一的5′端序列，在套组中下级更小的RNA中不存在该5′端序列。2个大重叠开放阅读框(ORF)，命名为ORF1a和ORF1b，占据了基因组的三分之二。第二个ORF，ORF1b仅仅在翻译阅读之后表达，翻译阅读通过假节结构介导的a-1移码(Brierley1995)。由这些ORF编码的多肽被病毒编码的蛋白酶蛋白水解切割产生参与RNA合成的蛋白。现有关于每个ORF编码的蛋白的特征的认识概要如下。美洲PRRSV本文档来自技高网...

【技术保护点】
重组禽痘病毒，其包含与猪生殖和呼吸综合症病毒的基因组ＲＮＡ互补的ＤＮＡ。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：JCF奥冬尼特，MJM巴伯罗特，JM派里茨，PGN鲍社，
申请(专利权)人：梅瑞尔公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]