甘草及甘草提取物防治骨质疏松症的新用途制造技术

本发明专利技术公开了甘草及甘草提取物防治骨质疏松的新用途，通过动物实验研究和筛选，我们发现了中药豆科植物甘草（ＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｕｒａｌｅｎｓｉｓＦｉｓｃｈ．）的干燥根及根茎以及其干燥根的提取物三萜类化合物甘草皂甙（甘草甜素ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ或甘草酸ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃａｃｉｄ）和甘草次酸（ｇｌｙｃｙｒｒｈｅｔｉｎｉｃａｃｉｄ）、黄酮类化合物甘草黄甙（ｌｉｑｕｉｒｉｔｉｎ或称甘草黄碱酮）、异甘草黄甙（ｉｓｏｌｉｑｕｉｒｉｔｉｎ）、甘草素（ｌｉｑｕｉｒｉｌｉｇｅｎｉｎ）、异甘草素（ｉｓｏ－ｌｉｑｕｉｒｉｌｉｇｅｎｉｎ）以及甘草多糖有较好的防治骨质疏松症的作用。本发明专利技术对甘草及上述提取物用于防治人类骨质疏松症的新用途提出了新的思路。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及中药甘草及甘草提取物防治骨质疏松症的新用途。骨质疏松症是老年医学的热门课题，随着世界人口的老化，患骨质疏松症的人群在逐年增多，据统计我国目前65岁以上的老年人已占1.2亿，而患有骨质疏松症的患者在这些人群中约占90％，因此，防治骨质疏松是抗衰老，延长寿命，保证人民的生活质量的一个十分迫切的研究课题。目前国内外对防治骨质疏松症尚未找到理想的新药，传统应用的雌激素、补钙和维生素D联合应用虽有一定的疗效，但仍存在较多的治疗学上的难题，为了解决这一难题，本课题组的成员一直在从天然药物中寻找抗骨质疏松的理想药物，希望能找到一种理想的抗骨质疏松的新药。通过大量的动物实验研究和筛选，我们发现了中药豆科植物甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)的干燥根及根茎以及其干燥根的提取物三萜类化合物甘草皂甙(甘草甜素glycyrrhizin或甘草酸glycyrrhizicacid)和甘草次酸(glycyrrhetinic acid)、黄酮类化合物甘草黄甙(liquiritin或称甘草黄碱酮)、异甘草黄甙(isoliquiritin)、甘草素(liquiriligenin)、异甘草素(iso-liquiriligenin)以及甘草多糖有较好的防治骨质疏松症的作用。深入的已经也证明了甘草及甘草的上述提取物具有明显的防治骨质疏松的作用，为人类解决骨质疏松提供了一个新的途径。本专利技术的任务是用科学的工艺把甘草及其有效成份的提取物做成制剂，使该制剂用于人类防治骨质疏松症，该制剂既能阻止骨质的丢失，又能促进新骨的形成，为解决骨质疏松的难题提供新的用途。解决这一任务的途径是这样实现的，选取豆科植物甘草(Glycyrrhizauralensis Fisch.)的干燥根及根茎，即中药称为甘草的药用部份，按传统的工艺加10倍水，分别水提三次，过滤，浓缩至含药量100％，作为甘草水提液用于研究，此外，按有关文献报道的方法，用甘草为原料，分别提纯出其有关的化学成分甘草皂甙(甘草酸)、甘草次酸、甘草黄甙、异甘草黄甙、甘草素、异甘草素以及甘草多糖，然后用本研究室建立的小白鼠骨质疏松模型和大白鼠骨质疏松模型进行给药研究，比较观察甘草水提液和这七个受试品抗骨质疏松的药效学功能。结果如下甘草水提液和这七个受试品均有显著的预防实验动物骨质疏松的作用。其中甘草和甘草皂甙(甘草酸)预防动物骨质疏松的作用非常显著。甘草黄甙及甘草多糖作用次之，其他几个品种也有一定的疗效。实施例甘草酸(Glycyrrhizin，GL)是中药甘草的有效成分，具有抗炎、抗过敏以及保肝护肝的作用，近年来，已发现不仅原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者可发生骨质疏松症，其它原因的肝脏疾病也可引起，因此，防治肝脏疾病所致的骨质疏松症日益受到重视。本研究用小白鼠建立慢性肝纤维化的动物模型，探讨在慢性肝病中骨丢失的状况，并观察甘草酸护肝的同时，是否有减少骨丢失的作用。1 材料与方法1.1 动物 本院实验动物中心提供的普通级昆明种小白鼠40只，体重20-22g，♀♂各半，按体重对等原则随机分组。1.2 药物 四氯化碳(分析纯)购于广州化学试剂厂，批号为980402-25，实验时用纯正食用花生油配成40％四氯化碳花生油。秋水仙碱 (colchicine，CL)德国进口分装，批号991010，购于上海医学试剂公司，用时配成0.01mg.ml-1水溶液。甘草酸 蒙古甘草提取，10mg.ml-1，由广东医学院医药科技开发中心提供。1.3 仪器与试剂 WFX-1D原子吸收分光光度计(北京第二光学仪器厂生产)；梅特勒-托利多AE240电子天平(梅特勒-托利多仪器公司上海分公司)，LEICA QWIN图象分析仪(德国莱卡公司)，UV-3101PC扫描分光光度仪(日本岛津仪器设备公司株式会社)，天冬氨酸氨基转氨酶(AST/GOT)测试盒均购于南京建成生物工程研究所，丙氨酸氨基转移酶(ALT/GPT)测试盒购于宁波市慈城生化试剂厂，总蛋白(TP)液体试剂盒和白蛋白(Alb)试剂盒均购于北京中生生物工程高技术公司。1.4实验方法 取上述小鼠随机分为4组，每组10只，♀♂各半，分笼饲养，A组予N.S 10ml.kg-1皮下注射，首剂加倍，5d注射1次，连续5周，注射后予N.S 10ml.kg-1灌胃，qd，连续6周；B组，予40％四氯化碳花生油溶液按10ml.kg-1皮下注射，首剂加倍，5d注射1次，连续5周，注射后予N.S按10ml.kg-1灌胃，qd，连续6周；C组按B组同法给予CCl4后按0.01mg.kg-1予秋水仙溶液；D组，按B组同法注射CCl4后按100mg.kg-1予甘草酸溶液。在实验过程中每天观察各组小鼠进食、饮水、活动情况及皮毛变化，7d称体重1次，于第五周全部停用四氯化碳，继续给药1周，于末次给药后第二天分别摘眼球取血，分离血清作生化检查；取肝、肾、脾和胸腺称重，右股骨干燥后称重，酸溶解测定骨中微量元素和羟脯胺酸(Hyp)的含量；肝左叶用玻氏液固定，石蜡包埋，切片、HE及VG(Van Gieson)染色后作病查。1.5 观察指标及测定方法(1)对小白鼠一般情况及体重的观察。(2)按文献测定骨羟脯氨酸的含量。(3)按文献检测血清学指标，赖氏法测定ALT(谷丙转氨酶)、AST(谷草转氨酶)的活性，双缩尿法测定血清TB(总蛋白)及溴甲酚绿法测定血清Alb(白蛋白)含量。(4)取小鼠右侧股骨干燥后酸溶解，用原子吸收分光光度仪测定Ca2+、Cu2+、Zn2+、Fe2+、Mg2+的含量。(5)按文献观察肝组织大体及镜下病理改变，将肝脏病变分4级进行评价。(6)肝组织胶原纤维的相对量的判定VG胶原特殊染色，按文献用半定量方法判断胶原纤维增生程度。1.6 统计学处理 实验数据采用X±S表示，组间差异性用t检验，差异的显著性分别用下述标志表示与A组比较*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001，与B组比较ΔP＜0.05；ΔΔP＜0.01；ΔΔΔP＜0.001；＜0.01)半定量标准判断采用等级秩和检验。2 结果2.1 小鼠慢性肝损伤后一般情况和体重变化 实验中仅B组2只小鼠死亡。各组小鼠的体重变化结果见表1，由表1可见，CCl4染毒一周后B、C、D三组动物的体重均比A组明显减轻(P＜0.05)，B组至第六周体重明显比A、C、D三组0.01mg.kg-1低(P＜0.05)，而C、D两组的体重并不比A组低(P＞0.05)，故认为两种药物对降低CCl4的毒性有一定的作用。表1小鼠慢性肝损伤后各组小鼠的体重变化结果(X±S，n＝10)(g)Group Original First Second Third Forth Firth Sixthweight week week week weekweek weekA 19.4±1.4 24.2±1.829.5±4.9 31.7±5.1 32.±5.3 33.2±6.0 34.1±6.1B 20±1.6 22.3±1.9*26.9±4.7 27.9±3.4 30.±2.6 28.3±1.9 28.7±1.9*C 20±1.1 21本文档来自技高网...

【技术保护点】
甘草及甘草提取物在制备用于防治骨质疏松症的制剂中的应用。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴铁，邹丽宜，崔燎，陈方，刘晓青，刘钰瑜，
申请(专利权)人：广东医学院医药科技开发中心，
类型：发明
国别省市：44[中国|广东]