改进的基于紫杉醇的抗肿瘤制剂制造技术

一种基于紫杉醇和人血清白蛋白的纳米颗粒的抗肿瘤制剂，它是在纳米颗粒制备过程中，将白蛋白水溶液与紫杉醇混合前，通过向白蛋白水溶液中加入生物相容性酸而得到的，此制剂的可注射的溶液具有在５．４－５．８之间的ｐＨ，并具有稳定性和不随时间改变性。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及基于紫杉醇和白蛋白纳米颗粒的抗肿瘤制剂，它能产生具有很高的不随时间改变性的可注射的重制水性混合物。
技术介绍
紫杉醇是在文献中已知的天然物质，具有重要的抗肿瘤活性。其弱水溶性使其难于对人给药，由于此原因，已开发了多种能使其可注射的系统。Bristol Myers Squibb(BMS)设计了一种组合物，并获得了专利，它的名称是TAXOL，在此组合物中，用克列莫佛(cremophor)使紫杉醇乳化，这样会使病人产生多种副作用(Lorenz等，药物作用(Agents Action)7，63-67(1987)；Weiss等，J.Clin.Onc0l.8，1263(1990))。由于活性成分的稀释，BMS制剂还涉及给药时间长的问题。为了克服所述的缺点，BMS对有同样剂量的紫杉醇但使用其他能避免强过敏性反应的赋形剂的TAXOL制剂进行了专利保护(EP-A-0584001，EP-A-0783885，EP-A-0783886，US 5641803，US5670537)。然而，在所有情况下，必须非常缓慢地对病人给药，超过约3小时。为防止TAXOL的副作用，鉴于人血清白蛋白(HSA)的生物相容性及其很强的与紫杉醇结合的能力，用它代替cremophor(Kumar等，Res.Comm.in Chem.Path.and Pharm.，80(3)，337-343(1993)；Paal等，Eur.J.Biochem.268，2187-2191(2001))。HSA形成含有溶解在水不溶性有机溶剂中的活性成分的微球的性质(Kramer等，J.Pharm.Sci.63，1646-1647(1974)；Grinstaff和Suslick，J.Am.Chem.Soc.112，7807-7809(1990)；Grinstaff和Suslick，Polym.Prepr.32，255-256(1991))，也使得开发以高于TAXOL的浓度给药紫杉醇的系统成为可能。可以通过已知的超声波、高压匀化和微流化技术得到紫杉醇和HSA的可注射的纳米乳剂。基于这些要素，并通过使用上述超声波、高压匀化技术，美国VivoRx药物公司已开发了含有紫杉醇和HSA的制剂CAPXOL(R)。在US 5439686、US 5498421、US 5560933和相应的WO94/18954中，VivoRx要求保护用超声波技术制备的紫杉醇和HSA的微粒，得到平均粒径(MPS)＜10微米的颗粒。在这些专利中记载的制备方法不能用于工业化规模，并且如此得到的微粒有太高的MPS，这使其不适于和不能用于对病人给药。VivoRx很清楚这一点，因此它在US 5916596和US 6096331及WO 98/14174和WO 99/00113中记载并要求保护通过用无菌0.9％NaCl水溶液重制紫杉醇和HSA的冷冻干燥粉末而得到的无菌纳米乳剂，其MPS＜0.2微米。如引证的专利所述的，这些用高压匀化方法得到的纳米乳剂据称有高的稳定性，此处术语“稳定性”的意义既表示MPS不随时间而改变，也表示不出现纳米颗粒沉淀(US6096331，实施例11)。用最大的细心，本专利技术人已许多次重复了前述专利的实施例，特别是US 5916596的实施例1、5和6，不曾得到在此专利的实施例和权利要求书中说明的结果。本专利技术人制备了所记载的混合物，然后在US 5916596推荐的压力范围内用Avestin匀化器对其处理，得到pH＝6.7的纳米乳剂，当如所述专利报道的，在旋转蒸发器中蒸发除溶剂时，总产生MPS约0.2微米(蒸发后MPS的增加＞0.02微米)的纳米颗粒，它们在可注射的生理溶液中形成的制剂不稳定(MPS的增加约为0.05微米，在约12小时内倾向于沉积)，并难于过滤通过0.22微米滤器进行灭菌，这与所述专利中声称的不同。本申请人已付出最大耐心的努力以用US 5916596记载的膜进行过滤，但这些结果总是失败，造成滤器堵塞并且紫杉醇产率总是低于30％，与声称的70-100％不同。另外，用刚刚描述的方法制备，然后按US 5916596和US 6096331报道的方法冷冻干燥并重制的产品的稳定性(按US 6096331的实施例11的技术评价)从未达到24小时(因此大大少于在专利中所公开的72小时)。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是提供一种由紫杉醇和人血清白蛋白的纳米颗粒构成的抗肿瘤制剂，它可以用生理溶液重组成可注射的混合物，所述颗粒在其中具有显著大于在现有技术中可能的稳定性，特别是超过24小时的稳定性。通过由紫杉醇和人血清白蛋白的纳米颗粒的冷冻干燥粉末构成的制剂达到了这一目的和进一步的目的，在制剂中紫杉醇的量在1％-20％之间，白蛋白的量在60％-98％之间，百分数是按重量计，纳米颗粒的平均粒径小于0.2微米，其特征在于所述冷冻干燥的粉末含有1％-20％重量之间的生物相容性盐，此盐由至少一种生物相容性酸成盐或由于存在至少一种生物相容性酸性缓冲物质而得到的，酸或酸性缓冲物质的存在的量是使粉末重制形成的水性可注射混合物的pH在5.4和5.8之间。盐的存在是由于酸及其盐形成了酸性缓冲物质(如化学家已知的)，并且白蛋白中的一些碱性基团与酸成盐，因此得到了其pH低于白蛋白的典型pH(即根据墨克索引13版第1519页记载为6.79-6.89)的混合物。实验已显示如果使用酸性缓冲物质(例如柠檬酸和柠檬酸钠的混合物)，在关于上述稳定性方面，结果不如仅使用酸好(柠檬酸或其它生物相容性酸)。显然，在加入水并与冷冻干燥粉末形成水性混合物后，可以容易地测定冷冻干燥粉末的pH。研究已显示，酸性纳米颗粒中也存在水粉末中水的量至高为5％(W/W)，通常约2％-4.5％(W/W)。因此，上述含有水的纳米颗粒也形成了本专利技术的一部分。本专利技术还涉及此制剂的可注射的重组水性混合物，其中，紫杉醇的浓度在0.1-3mg/ml之间，优选0.5-2.5mg/m1。也可以通过将人血清白蛋白(HSA)的无菌水溶液与紫杉醇的无菌溶液混合，并按前述Vivorx专利的教导处理此混合物，得到本专利技术的制剂，但与这些教导的不同之处在于，在与紫杉醇混合之前，向HSA的水溶液中加入至少一种生物相容性酸或酸性缓冲物质，其加入量足以将溶液的pH调节到5.4-5.8，优选5.5-5.7之间。生物相容性酸可以选自盐酸、柠檬酸、磷酸、醋酸、生物相容性有机或无机酸。也可以通过以下方法得到同样的制剂将0℃-40℃的含有紫杉醇和白蛋白的水性混合物在9000-40000psi的高压下经过匀质化处理，得到纳米乳剂，将其在-20℃和-80℃之间冷冻，并最终在+20℃和+35℃之间的温度下加热冻干，在无菌条件下通过将白蛋白溶解在无菌水中达到2％-3％(W/V)的浓度，然后向此溶液中加入2％-4％(V/V)的氯仿，然后加入占溶液中白蛋白重量5.40％-15.0％，优选5.60％-13.7％的无菌粉末状的紫杉醇，在加入紫杉醇之前向所述白蛋白溶液中加入足够量的至少一种生物相容性酸或酸性缓冲物质以将混合物的pH调节到5.4-5.8，优选5.5-5.7之间，以得到所述的水性混合物。可以注意到的是在后一方法中使用无菌粉末状的紫杉醇不仅大大简化了流程本身，也使此方法能与现有技术相比，还使在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有紫杉醇和人血清白蛋白的纳米颗粒的冷冻干燥粉末的抗肿瘤制剂，其中紫杉醇的量在１％－２０％之间，白蛋白的量在６０％－９８％之间，百分数是按重量计，纳米颗粒的平均粒径小于０．２微米，其特征在于所述冷冻干燥的粉末含有１％－２０％重量之间的的生物相容性盐，它是由至少一种生物相容性酸成盐或由于存在至少一种生物相容性酸缓冲物质而得到的，酸或酸性缓冲物质存在的量是使粉末重制形成的可注射水性混合物的ｐＨ在５．４和５．８之间。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：M泽诺尼，S玛施奥，
申请(专利权)人：艾斯多伯法股份公司，
类型：发明
国别省市：IT[意大利]