山苍子油作为抗念珠菌感染药物的应用制造技术

本发明专利技术提供山苍子油作为抗念珠菌感染药物的应用，它作为一种有效的、毒副作用低的口服抗系统性白念珠菌及克柔氏念珠菌感染的药物，对耐唑类念珠菌也同样有效并且在用药过程中不易产生耐药性，对系统性白念珠菌感染治疗时山苍子油剂量为：２．５－２０ｍｇ／ｋｇ／日，对系统性克柔氏念珠菌感染治疗时山苍子油剂量为：１０－４０ｍｇ／ｋｇ／日，连续用药７－１０天，具有临床应用的可行性，且急性毒性低，治疗指数高，毒副反应小，实验证明山苍子油是一种有良好开发前景的抗系统性念珠菌感染的天然药物。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及山苍子油Lisea cubeba(Lour.)pers的应用研究，尤其是山苍子油作为抗念珠菌感染药物的应用。
技术介绍
近年来，由于各种原因引起免疫机能受损人群的急剧扩大，真菌感染的发病率快速增长，深部真菌感染已成为这部分患者的主要死亡原因之一。过去常采用两性霉素B、5-氟胞嘧啶等治疗深部真菌感染，但这类药物的毒性和副反应较多。唑类尤其是以氟康唑为代表的三唑类药物的出现使深部真菌病的治疗有所改观。但存在天然耐药菌珠，且随着这类抗真菌药物的大量使用，真菌耐药现象越来越普遍。因此研制和开发高效、低毒，不易引起耐药性的新型抗真菌药物是当前急待解决的问题。山苍子系樟科木姜子属植物，又名山鸡椒，毕澄茄，山苍子油系其果实的提取油，为黄色到棕黄色有强烈柠檬气味的挥发油，山苍子油成分复杂，含有柠檬醛、柠檬烯、α-蒎烯、甲基庚烯酮、樟脑、香叶醇等多种成分，但其中柠檬醛含量最高，果实挥发油柠檬醛含量为10.71-33.91％，精油中柠檬醛的含量可达60-90％，是山苍子油的主要药效成分，柠檬醛的化学名为3.7-二甲基-2.6-辛二烯醛，有两种异构体，α型即香草醛、β型即橙花醛。既往研究表明，山苍子油具有抗真菌、抗细菌、抗过敏、平喘及抗心律失常等多种作用，但口服给药对系统性念珠菌感染的疗效，对耐唑类念珠菌的效果，及在用药过程中是否易产生耐药性，尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供山苍子油作为抗念珠菌感染药物的新用途，它可作为一种有效的、毒副作用低的口服抗系统性白念珠菌及克柔氏念珠菌感染的药物，对耐唑类念珠菌也同样有效，并且在用药过程中不易产生耐药性。本专利技术采用口服进行抗系统性白念珠菌及克柔氏念珠菌感染治疗。对系统性白念珠菌感染治疗时山苍子油剂量为2.5-20mg/kg/日，对系统性克柔氏念珠菌感染治疗时山苍子油剂量为10-40mg/kg/日，连续用药7-10天。本
技术实现思路
通过以下四大方面加以说明一、微量稀释法检测山苍子油抗念珠菌的敏感性研究结果采用NCCLS推荐的抗真菌药物敏感试验方案即液体微量稀释法(brothmicrodilution)测定了山苍子油对白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔氏念珠菌的最小抑菌浓度(MIC)值，并以氟康唑对这五种菌的MIC值作质控。电镜下观察药物作用前后克柔氏念珠菌超微结构的改变，从而为克柔氏念珠菌等耐唑类药物真菌提供新的治疗药物及依据。(一)材料与方法1.实验菌株来源标准株白念珠菌1a、热带念珠菌2a、近平滑念珠菌3a、光滑念珠菌4a、克柔氏念珠菌5a各1株，由中国医学科学院皮肤病研究所中国真菌保藏中心提供。2.培养基RPMI-1640液基。3.指示剂alamar blue购自英国serotec公司。4.方法参照NCCLS方案中液体微量稀释法(1995年版)进行，设置氟康唑为实验质控药物。(二)结果1.山苍子油对五种念珠菌的MIC值测定结果，见表1；表1山苍子油对五种念珠菌的MIC值(μg/ml)MIC值菌种(G±S)白色念珠菌14.14±3.64热带念珠菌23.22±2.85光滑念珠菌31.24±2.88近平滑念珠菌 76.19±4.40克柔氏念珠菌 28.30±2.54 n＝7，五种念珠菌的MIC值经方差分析检验，P＝0.316，五种菌间无显著性差异。2.电镜研究结果未用药组的克柔氏念珠菌结构完整，具完好的细胞壁及细胞膜，内部结构密实，可见出芽。1/2MIC氟康唑作用后，大部分克柔氏念珠菌完好，见完整细胞壁及细胞膜。1/2MIC山苍子油作用后，大部分菌细胞壁溶解，细胞器肿胀，细胞膜连续性破坏，甚至坏死溶解。(三)结论山苍子油不仅对白念珠菌有抗菌作用，对其他临床常见的念珠菌种如热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、特别是对天然耐唑类药物的克柔氏念珠菌也具有良好的抗菌效果，电镜观察显示天然耐唑类药物的克柔氏念珠菌经山苍子油处理后细胞壁、细胞膜及细胞器溶解坏死；氟康唑处理组无明显的破坏作用。二、山苍子油对小鼠急性毒性实验结果(一)材料和方法1.动物清洁级ICR小白鼠(滇实动证2001035号)，体重20-23克，雌雄各半。云南省天然药物药理重点实验室提供。2.方法急性毒性实验山苍子油选用五个剂量组，每组10只小鼠1000mg/kg，1800mg/kg，2600mg/kg，3400mg/kg，4000mg/kg。灌胃给药后连续观察7天动物的反应和死亡分布情况，死亡动物立即尸检，用改进的Bliss法计算LD50及95％可信区限。(二)结果山苍子油灌胃给药LD50为2319.89mg/kg，95％可信区限为1649.46mg/kg-3 262.80mg/kg。三、山苍子油对小鼠系统性念珠菌感染的疗效观察目的以感染动物的平均存活时间和肾脏菌落形成单位计数为指标，观察山苍子油对小鼠系统性白念珠菌及克柔念珠菌感染的疗效。方法用经腹腔注射环磷酰胺造成免疫抑制的小鼠模型，分别经尾静脉注射白念珠菌及克柔念珠菌菌悬液，以山苍子油灌胃给药进行抗念珠菌感染治疗，观察其存活时间，计数肾脏菌落形成单位，并与氟康唑进行比较。结果山苍子油灌胃给药7天，在2.5mg/kg/日及更高剂量组可明显延长白念珠菌感染小鼠的存活时间，减少肾脏菌落形成单位数，但较氟康唑相应剂量组疗效则较弱；但于10mg/kg/日及更高剂量组明显延长了克柔念珠菌感染小鼠的存活时间，可减少肾脏菌落形成单位数，而氟康唑相应剂量组对克柔念珠菌感染小鼠无效。结论山苍子油是一种有效的口服抗系统性白念珠菌及克柔念珠菌感染药物。(一)材料动物清洁级ICR小白鼠(滇实动证2001035号)，体重20-23克，雌雄各半。云南省天然药物药理重点实验室提供。受试菌种白念珠菌C1a，克柔念珠菌C5a，由中国医学科学院皮肤病研究所中国医学真菌菌种保藏中心提供。(二)方法1、山苍子油对念珠菌感染小鼠生存时间的影响建立白念珠菌及克柔念珠菌感染小鼠模型，于接种菌悬液1小时后开始灌胃给药，连续7天，停药后继续观察小鼠死亡情况，共21天。设立一个阴性对照组(药用花生油组)，并与氟康唑进行对比。2、抗念珠菌感染鼠模型肾脏菌落形成单位计数山苍子油与氟康唑分别取相同的剂量组，给药7天后于次日取小鼠双侧肾脏制成匀浆，用无菌生理盐水稀释至10ml，取0.1ml接种于SDA培养平皿(加氯霉素0.125g/1000ml)27℃培养48小时后计数菌落形成单位。3、统计学处理用改进的Bliss法计算山苍子油及氟康唑的ED50；Wilcoxon秩和检验程序分析对小鼠平均存活时间的影响以及相同剂量下山苍子油组与氟康唑组小鼠肾脏菌落形成单位数的差异，直线回归方程描述山苍子油剂量与小鼠存活率之间的关系。(三)结果1、山苍子油对白念珠菌感染鼠模型的疗效山苍子油可延长白念珠菌感染鼠模型的存活时间，减少肾脏菌落形成单位数，但较之氟康唑疗效较弱，见表2，3。表2 山苍子油对白念珠菌感染小鼠存活时间的影响药物 剂量 动物数平均存活时存活率ED50与95％可名称 (mg/kg) (只) 间(天) (％) 信限(mg/kg)20a1019.5 8010b1016.1 40 11.71山苍子油 5c1012.3 10 (8.45-16.21)2本文档来自技高网...

【技术保护点】
山苍子油作为抗念珠菌感染药物的应用，采用口服进行抗系统性白念珠菌及克柔氏念珠菌感染治疗。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吕昭萍，李筱芳，冯华，方芳，赖爱云，黄云莉，王正文，
申请(专利权)人：昆明医学院第一附属医院，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]