细菌易位抑制剂以及细菌易位抑制方法技术

本发明专利技术涉及含有枯草芽孢杆菌的活菌体作为有效成分的细菌易位抑制剂和包括将所述细菌易位抑制剂经口给予的细菌易位抑制方法。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抑制细菌越过肠道屏障进行侵袭的细菌易位(translocation)抑制剂以及细菌易位的抑制方法。
技术介绍
几乎所有接触包括人在内的动物的微生物都是存在于动物肠道内的微生物。以人为例，每1g肠道内容物，在小肠的下端细菌数达到105～107，在大肠达到109～1011，细菌的种类据称大致有100种。这些细菌中的有害细菌侵入生物体内进行繁殖时，会引起所谓的条件性感染和多脏器功能不全、败血症等严重的疾病。作为抑制这些疾病的方法之一，认为是抑制这些有害细菌透过肠粘膜侵袭腹腔、内脏器官等。抑制这种侵袭的结构是肠道屏障。肠道屏障包括肠道免疫组织和解剖学结构。肠道免疫组织是与消化道附属淋巴器官、分泌型IgA、吞噬细胞等有关的肠道周围特有的免疫组织。肠道屏障的解剖学结构是指粘膜的粘液层和上皮细胞等对细菌透过肠粘膜的物理性抑制。具体地说，例如在细胞表层存在有构成细胞膜的一部分的蛋白、糖脂类、粘多糖类等糖类复合物。它们被称为糖衣或糖萼。这些结构发达则可以物理性地防御细菌的接触和攻击，使粘膜细胞的肠道屏障能力得到提高，降低上皮细胞的坏死、脱落的频率，降低对宿主生物体的负担。我们将细菌越过肠道屏障侵入宿主生物体内称为细菌易位(BTL)。BTL的途径被认为有淋巴系统和血管两条途径。但是从多数动物实验、临床研究可以看出，淋巴系统是主要的途径。对于粘膜损害为轻度、由于细菌的异常繁殖而发生的BTL，细菌走淋巴途径；而伴有出血性休克等大的侵袭的BTL，则认为也另外有细菌直接进入血液中的途径。在淋巴性BTL中，细菌只侵袭至肠系膜淋巴结(以下简称为MLN)时，并不会显示严重的病态。但是，MLN中的细菌量超过可处理量时，细菌进一步侵袭血管系统和内脏器官，引发严重的疾病。因此，抑制侵入MLN的BTL与以BTL为起因的疾病的预防紧密相连。禽畜肉用动物发生BTL时，涉及到食用部分的污染，不仅可能成为食物中毒的原因，也使正常的生长受阻，导致生产率降低。现有的对发生BTL的人或动物的治疗方法例如有给予抗生素、疫苗、干扰素等。但是给予抗生素会导致出现耐药菌、副作用等问题。疫苗由于其效果是基于对每种感染菌的特异性作用机制而产生，因此对于通过给予疫苗来抑制BTL，需要给予对应于所有的感染菌的疫苗。干扰素价格高，可以对人使用，但从经济的观点来看，对于禽畜肉用动物则难以使用。专利技术的公开本专利技术的目的在于提供简便而且有效地抑制BTL的药剂、以及简便且有效的BTL抑制方法。根据本专利技术，提供含有枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的活菌体作为有效成分的BTL抑制剂。还根据本专利技术提供上述BTL抑制剂，所述BTL抑制剂的特征在于上述枯草芽孢杆菌是枯草芽孢杆菌C-3102(通商产业省工业技术院微生物工业技术研究所保藏号FERM BP-1096)。进一步根据本专利技术提供上述BTL抑制剂，所述BTL抑制剂的特征在于上述枯草芽孢杆菌C-3102具有在经过提取、纯化、用序列1和序列2的引物进行PCR处理时生成约700bps片段的染色体DNA。此外，根据本专利技术提供BTL的抑制方法，该方法包括将上述BTL抑制剂经口给予的步骤。附图的简要说明附图说明图1是显示实施例3中健康对照组回肠观察结果的显微镜照片。图2是图1中观察的粘膜上皮细胞的坏死和剥离脱落以及嗜中性粒细胞和淋巴细胞对固有层浸润的说明图。图3是显示实施例3中健康摄取组回肠观察结果的显微镜照片。图4是图3中观察的粘膜上皮细胞的坏死和剥离脱落以及嗜中性粒细胞和淋巴细胞对固有层浸润的说明图。图5是显示实施例3中健康对照组盲肠观察结果的显微镜照片。图6是图5中观察的粘膜上皮细胞的坏死和剥离脱落以及嗜中性粒细胞和淋巴细胞对固有层浸润的说明图。图7是显示实施例3中健康摄取组盲肠观察结果的显微镜照片。图8是图7中观察的粘膜上皮细胞的坏死和剥离脱落以及嗜中性粒细胞和淋巴细胞对固有层浸润的说明图。图9是显示试验例1中PCR扩增产物的电泳结果的照片。实施专利技术的方式本专利技术的BTL抑制剂含有枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的活菌体作为有效成分。本说明书中的“枯草芽孢杆菌活菌体”是指枯草芽孢杆菌的活芽孢和/或营养细胞。枯草芽孢杆菌的细菌学性质记载于Bergey’s Manual of BacteriologyVol.11(1986)等中。上述活菌体可以具体地使用例如具有以下特征的菌体。(1)革兰氏阳性(2)形成卵圆形芽孢(3)杆菌(4)游动性有 (5)好气性(6)过氧化氢酶阳性(7)50℃下生长+(8)pH 5.7下生长+(9)对枸橼酸盐的利用+(10)是否可由糖类生成酸阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、甘露糖醇+(11)VP反应+(12)对淀粉的水解+(13)对硝酸盐的还原性+(14)吲哚的生成-(15)对明胶的水解+(16)对酪蛋白的水解+(17)在液体培养基上形成菌膜+(18)对牛乳的凝固-(19)对牛乳的胨化+枯草芽孢杆菌的BTL抑制作用根据菌株不同而多少有差异。作为本专利技术BTL抑制剂有效成分给予的枯草杆菌的菌株可以优选例如枯草芽孢杆菌C-3102。枯草芽孢杆菌C-3102于1985年12月25日保藏于通商产业省工业技术院微生物工业技术研究所，保藏号FERM BP-1096。通商产业省工业技术院微生物工业技术研究所更名为现在的独立行政法人产业技术综合研究所特许生物保藏中心(日本国茨城县筑波市东1-1-1中央第6)。公众可以通过现在的特许生物寄托中心利用枯草芽孢杆菌C-3102。枯草芽孢杆菌C-3102具有下述特征使用下述序列1和序列2的PCR引物进行染色体DNA的PCR反应，则可扩增约700bps的片段。序列1和序列2的引物本来是扩增编码解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)淀粉酶的DNA而开发的引物，因此对于其他的枯草芽孢杆菌，采用该PCR引物不会发生扩增。由枯草芽孢杆菌C-3102扩增的约700bps的片段具有与淀粉酶的序列不相同的特征，可以明确地与其他的枯草芽孢杆菌区别开。序列15’-GCCCCGCACATACGAAAAGACTGGCTGAAA-3’序列25’-GGATCCCACGTTGTGATTAAAAGCAGCGAT-3’作为培养基，上述枯草芽孢杆菌可以使用微生物培养中常用的含有碳源、氮源和无机物等的液体培养基或固体培养基进行培养。碳源只要是枯草芽孢杆菌可利用的碳源即可，可以例举葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉、糖蜜等；另外氮源可以例举蛋白胨、酪蛋白水解产物、肉膏、硫酸铵等。并且，根据需要可以添加磷酸、钾、镁、钙、钠、铁和锰等的盐类，维生素类，氨基酸类，表面活性剂等。培养条件优选有氧条件，培养装置优选例如小型发酵罐等的通气搅拌液体培养装置、架式固体培养、自动制曲培养装置等，培养温度为20～50℃，特别优选30～45℃，培养时间可以为12小时～7天，培养的初始pH可以为pH 5～9，特别优选pH 6～8。通过以上方法得到的培养物本身即可作为本专利技术的BTL抑制剂。另外，上述培养物的浓缩物、由上述培养物中分离的菌体或向其中添加赋形剂等添加剂制成干燥粉末、颗粒、片剂等制剂，均可作为本专利技术的BTL抑制剂使用。上述赋形剂并无特别限定，可以使用碳酸钙、玉米渣、玉米粉、脱脂米糠、麦麸、脱本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细菌易位抑制剂，所述抑制剂含有枯草芽孢杆菌的活菌体作为有效成分。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：丸桥敏弘，今林宽和，丸田喜义，
申请(专利权)人：卡尔皮斯株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]