一种知母多糖提取物及其制备方法和医药用途技术

本发明专利技术涉及一种知母多糖提取物及制备方法和医药用途。制备方法包括原料脱脂后，再经过水提取、醇沉淀得到粗多糖，粗多糖经过透析、离子交换层析脱去蛋白、色素，除去小分子化学成分，制成较高纯度的知母多糖提取物。本发明专利技术提取物中知母多糖的含量以葡萄糖计，所述多糖的含量占知母提取物重量百分比60％以上。本发明专利技术通过大量的药理学实验发现，知母多糖提取物具有免疫抑制活性，用于治疗免疫炎性损伤性疾病：肾炎、肺炎、上呼吸道感染、肝炎、扁桃体炎及糖尿病的医药用途。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种知母多糖提取物和其制备方法，及将该知母多糖提取物用作免疫抑制活性，用于治疗免疫炎性损伤性疾病肾炎、肺炎、上呼吸道感染、肝炎、扁桃体炎及糖尿病的医药用途。
技术介绍
知母为百合科知母属植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)的根茎，性味苦、甘、寒，归肺、胃、肾经。具有清热泻火、滋阴润燥功能，用于外感热病，高热烦渴，肺热燥咳，骨蒸潮热，内热消渴，肠燥便秘。现代研究发现知母中的化学成分以留体皂苷、双苯吡酮类为主，尚有木脂素类、黄酮类、有机酸类等，是现代医药研究中的热点药物之一，近年来的研究进展迅速，但大都集中于知母皂苷类、双苯吡酮类成分上，认为知母皂苷为知母的重要药效物质基础，对知母多糖研究较少，尚未见其具有免疫抑制活性的报道。本专利技术通过深入的化学、药理学、药效学研究，专利技术了一种制备知母多糖的新方法，该方法操作简单，经济节能，并且能得到较高纯度和较大含量的多糖组分；同时首次发现知母多糖具有免疫抑制活性，可用于治疗与免疫炎性损伤相关的各种疾病肾炎、肺炎、上呼吸道感染、肝炎、扁桃体炎及糖尿病。这与知母以往研究中皂苷类、双苯吡酮类药效物质基础的研究是完全不同的。
技术实现思路
本专利技术目的之一是提供一种具有免疫抑制活性的知母多糖提取物。本专利技术目的之二是提供一种上述知母多糖提取物的制备方法，知母多糖的含量占提取物重量百分比的60 %以上。本专利技术目的之三是将上述知母多糖提取物制成各种剂型的免疫抑制剂，用于治疗免疫炎性损伤性疾病肾炎、肺炎、上呼吸道感染、肝炎、扁桃体炎及糖尿病的医药用途。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案来实现的—种知母多糖提取物的制备方法，其特征在于知母原料药材脱脂后，再经过水提取、醇沉淀得到粗多糖，粗多糖经过透析、离子交换层析脱去蛋白、色素，除去小分子化学成分，制成较高纯度的知母多糖提取物。一种制备上述知母多糖提取物的方法，其包括以下具体步骤(1)将知母用高浓度乙醇回流除去脂溶性杂质；(2)残渣加水回流提取，滤液浓缩，加入乙醇醇沉，离心得沉淀；C3)沉淀依次用无水乙醇，丙酮分别洗涤；(4)洗涤后的沉淀用蒸馏水复溶，透析；( 透析液浓缩，加入乙醇醇沉，离心得多糖沉淀；(6)多糖沉淀依次用无水乙醇，丙酮分别洗涤；(7)洗涤后的沉淀用蒸馏水复溶，采用弱酸弱碱型阴、阳离子交换树脂串联法脱去多糖中的色素和蛋白质，即得知母多糖提取物。为了达到更好的提取效果，优选的，步骤(1)中将知母用6 12倍重量的80 95%乙醇回流脱脂2 3次，每次回流2 池；步骤O)中将残渣加6 12倍重量的蒸馏水回流提取2 3次，每次回流提取2 3h，将滤液浓缩至药材0. 2 1. 0体积，加入80 95%乙醇醇沉，离心得沉淀；步骤C3)、(6)中将沉淀依次用2 4倍重量的无水乙醇，丙酮分别洗涤；步骤中的沉淀以0. 5 2. 0倍重量的蒸馏水复溶，以分子量大小为 3. OXlO3-L 2X IO4的透析袋透析24 72h。将从知母中分离出的多糖依次采用DEAE-kpharose F. F和DEAE-52离子交换色谱柱(洗脱相为0. 1-lmol/L的NaCl溶液)，收集液可以选择但不限于如下琼脂糖凝胶柱色谱做进一步纯化分离S印hadex G50、S印hacryl S100、S印hacryl 200、S印hacryl S300 和kphacryl S400(洗脱相为0. 1-lmol/L NaCl溶液)。本专利技术知母多糖提取物中总多糖的含量占提取物重量百分比的60%以上，进一步纯化甚至可以得到知母多糖单体。所述的知母多糖提取物，具有免疫抑制活性对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能呈抑制作用，提示具有非特异性免疫抑制功能；降低绵羊红细胞所致实验大鼠溶血素生成的含量，表示具有体液免疫抑制功能。知母多糖提取物通过免疫抑制机制，可用于治疗免疫炎性损伤性疾病肾炎、肺炎、上呼吸道感染、肝炎、扁桃体炎及糖尿病。本专利技术知母多糖提取物可以加入制备不同剂型时所需的各种辅料和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂后，以常规的中药制剂方法制备成任何一种适宜的临床制剂，例如可以是注射剂(粉针、冻干粉针、水针、输液等)、口服制剂(片剂、口服液、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊或滴丸)等。具体实施例方式下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。实施例1取知母药材约2. ^ig，用90%乙醇回流提取3次，每次池，过滤，将滤渣晾干，残渣加蒸馏水10倍量，回流提取3次，每次池，过滤，合并滤液，减压回收溶剂至药材1倍体积， 用95%乙醇调至含醇量为80%，静置过夜，2000rpm/min离心，沉淀依次用4倍量无水乙醇、 丙酮洗涤，得总多糖。取总多糖加水溶解，上清液装入透析袋中流水透析48h，蒸馏水透析 Mh，透析液减压浓缩至药材1体积，加入95%乙醇调含醇量为85%，静置过夜，2000rpm/ min离心，沉淀用4倍量无水乙醇、丙酮依次洗涤，蒸馏水复溶，经过弱酸弱碱型阴、阳离子交换树脂(Amberlite FPA90C1+Amberlite IRC84)脱去总多糖中色素和蛋白质冷冻干燥， 得精制知母多糖。用苯酚-硫酸法，在500nm处，紫外分光光度法测定总多糖含量，以葡萄糖 C6H12O6 计为 65%。实施例2取知母药材约3kg，用80 %乙醇回流提取2次，每次3h，过滤，将滤渣晾干，残渣加蒸馏水8倍量，回流提取2次，每次3h，过滤，合并滤液，减压回收溶剂至药材1倍体积， 用95%乙醇调至含醇量为80%，静置过夜，2000rpm/min离心，沉淀依次用3倍量无水乙醇、丙酮洗涤，得总多糖。取总多糖加水溶解，上清液流水透析48h，蒸馏水透析Mh，透析液减压浓缩至药材1体积，加入95%乙醇调含醇量为80%，静置过夜，2000rpm/min离心，沉淀用3倍重量无水乙醇、丙酮依次洗涤，蒸馏水复溶，经过弱酸弱碱型阴、阳离子交换树脂(Amberlite FPA90C1+Amberlite IRC84)脱去总多糖中色素和蛋白质冷冻干燥，得精制知母多糖。用苯酚-硫酸法，在500nm处，紫外分光光度法测定总多糖含量，以葡萄糖C6H12O6 计为60%。实施例3制成输液剂将知母总多糖经过琼脂糖凝胶柱kphacryl S300,Sephadex G50色谱做进一步纯化分离得到98%纯度以上的知母多糖提取物，加入适量增溶剂，研磨，再加入少量注射用水进行稀释，混勻，然后加入氯化钠适量，溶解后再加注射用水至规定量，滤过，灌封，灭菌， 即得。实施例4制成片剂取之母多糖提取物适量，加入稀释剂、崩解剂等辅料适量，混勻，制成颗粒，干燥， 压制成片，包衣或喷薄膜衣即得。实验例1知母多糖抗炎实验研究取ICR雄性小鼠，随即分成知母高剂量G40mg/kg)、知母低剂量(110mg/kg)、阳性对照地塞米松(3. 6mg/kg)及空白对照组。秤取各组小鼠体重，计算均值标准差确定无组间差异，连续灌胃给药三天，第三天于末次给药后50min，每鼠右耳涂致炎本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种知母多糖提取物，其特征在于：所述知母多糖提取物中总多糖的含量占提取物重量百分比的６０％以上。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：匡海学，王秋红，王知斌，夏永刚，穆光锐，薛娟，
申请(专利权)人：匡海学，
类型：发明
国别省市：93