本发明专利技术是一种半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗的制备方法，其特征在于：将美人鱼发光杆菌ST1菌株接种在普通营养琼脂肉汤培养基上，28℃培养24h，加入终浓度0.3%的甲醛28℃灭活48h，得灭活菌体；取黄芪用蒸馏水浸泡后煎煮，过滤，浓缩得黄芪浸出液；将灭活菌体与得黄芪浸出液混合制得半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗。本发明专利技术疫苗能使半滑舌鳎产生良好的免疫应答，增强半滑舌鳎对病原美人鱼发光杆菌的免疫力，提高半滑舌鳎养殖的成活率，增加半滑舌鳎养殖的产量，提高半滑舌鳎养殖生产的经济效益。从根本上解决了目前半滑舌鳎养殖生产过程中易发生美人鱼发光杆菌所致疾病的问题。本发明专利技术还公开了一种半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗的使用方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种动物抗病疫苗的制备方法，特别是涉及一种半滑舌鳎美人鱼发光 杆菌疫苗的制备方法。本专利技术还涉及该疫苗的使用方法。
技术介绍
美人鱼发光杆菌广泛存在于海水及寄生于海产动物中，主要感染变温动物尤其是 养殖鱼类，除感染雀鲷科鱼类外，还感染鲨鱼、大菱鲆、五条蛳、半滑舌鳎等，对水产养殖生 产的危害是相当严重的，近年来，随着半滑舌鳎养殖规模的扩大，由美人鱼发光杆菌引起的 疾病给半滑舌鳎养殖生产造成了很大的损失，因此，对美人鱼发光杆菌引起的疾病的有效 预防，以最大限度地降低其危害程度，将能显著地提高半滑舌鳎养殖生产的经济效益。目前尚未见有半滑舌鳎抗病疫苗的研究与应用，目前养殖户大多使用化学合成药 物或抗生素类药物控制疾病的发生与流行，市场上缺乏一种适用于半滑舌鳎的抗美人鱼发 光杆菌疫苗。因此，开发研制半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗，对于有效控制半滑舌鳎美人鱼 发光杆菌弓I起的疾病的发生与流行具有重要的应用前景。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种提高半滑舌鳎免疫 力、降低半滑舌鳎养殖生产中由病原美人鱼发光杆菌所造成的危害、以满足半滑舌鳎养殖 生产上的抗病需求的半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗的制备方法。本专利技术所要解决的另一个技术是提供了几种如上所述的半滑舌鳎美人鱼发光杆 菌疫苗的免疫使用方法。本专利技术所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本专利技术是 一种半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗的制备方法，其特点是它以美人鱼发光杆菌STl iPhotobacteriunidaniseIae STl)为免疫原，以黄芪浸出液为佐剂；其具体步骤如下(1)将美人鱼发光杆菌STliPho tobac teriumdamseIae STl)菌株接种在普通营养琼 脂肉汤培养基上，28°C培养Mh，加入终浓度0. 3%的甲醛灭活48h，得灭活菌体；(2)取黄芪用蒸馏水浸泡30-60min后煎煮，过滤，浓缩至终浓度为原药lg/mL，得黄芪 浸出液；(3)将灭活菌体与得黄芪浸出液混合，制得水剂型黄芪佐剂半滑舌鳎美人鱼发光杆菌 疫苗；疫苗中病原美人鱼发光杆菌免疫原为1. 17X IO11ceIlsAiL,黄芪浸出液为lg/mL。本专利技术方法中涉及的美人鱼发光杆菌STl {Pho tobac teri umdamse Iae STl) 已经在《半滑舌鳎病原美人鱼发光杆菌表型及分子特征》(Wienotypic and molecular characterization of Photobacterium damselae, a pathogen of the cultured tongue sole Cynoglossus semilaevis in China.)中公开，该公开文献的发表刊物为新西兰《海 洋与淡水研究》，2011，45 (1):1-13 (New Zealand Journal of Marine and Freshwater Research, 2011，45 (1):1-13.)。该菌株的分离菌DNA序列长度及登录号如下表分离菌DNA序列长度及登录号权利要求1.一种半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗的制备方法，其特征在于它以美人鱼发光杆菌 STl iPhotobacteriunidaniseIae STl)为免疫原，以黄芪浸出液为佐剂；其具体步骤如下(1)将美人鱼发光杆菌STliPho tobac teriumdamseIae STl)菌株接种在普通营养琼 脂肉汤培养基上，28°C培养Mh，加入终浓度0. 3%的甲醛灭活48h，得灭活菌体；(2)取黄芪用蒸馏水浸泡30-60min后煎煮，过滤，浓缩至终浓度为原药lg/mL，得黄芪 浸出液；(3)将灭活菌体与得黄芪浸出液混合，制得水剂型黄芪佐剂半滑舌鳎美人鱼发光杆菌 疫苗；疫苗中病原美人鱼发光杆菌免疫原为1. 17X IO11ceIlsAiL,黄芪浸出液为lg/mL。2.一种如权利要求1所述的制备方法所制得的半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗的使用 方法，其特征在于它采用浸泡免疫的方法，先将半滑舌鳎在充气条件下用质量浓度为8% 的NaCl溶液浸泡5min，然后按体积比1 :5用水稀释半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗得半滑 舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗溶液，再将半滑舌鳎放于半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗溶液中充 气浸泡lh，一周后按前述方法加强免疫1次。3.—种如权利要求1所述的制备方法所制得的半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗的使用 方法，其特征在于它采用注射免疫的方法，取体长为15-20cm的半滑舌鳎按0. 2mL/尾的免 疫剂量进行初次注射免疫，后每隔一周按前述免疫剂量加强免疫1次，共免疫4次。4.一种如权利要求1所述的制备方法所制得的半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗的使用 方法，其特征在于它采用口服免疫方法，将硬颗粒饲料用半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗浸 泡后投喂，每天半滑舌鳎摄入灭活菌体量为1. 17X107cellS/g体重，连续投喂一周，隔周后 再按前述方法进行加强免疫一周。全文摘要本专利技术是一种半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗的制备方法，其特征在于将美人鱼发光杆菌ST1菌株接种在普通营养琼脂肉汤培养基上，28℃培养24h，加入终浓度0.3%的甲醛28℃灭活48h，得灭活菌体；取黄芪用蒸馏水浸泡后煎煮，过滤，浓缩得黄芪浸出液；将灭活菌体与得黄芪浸出液混合制得半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗。本专利技术疫苗能使半滑舌鳎产生良好的免疫应答，增强半滑舌鳎对病原美人鱼发光杆菌的免疫力，提高半滑舌鳎养殖的成活率，增加半滑舌鳎养殖的产量，提高半滑舌鳎养殖生产的经济效益。从根本上解决了目前半滑舌鳎养殖生产过程中易发生美人鱼发光杆菌所致疾病的问题。本专利技术还公开了一种半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗的使用方法。文档编号A61P31/04GK102139103SQ201110086569公开日2011年8月3日 申请日期2011年4月7日 优先权日2011年4月7日专利技术者张晓君, 阎斌伦 申请人:淮海工学院本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗的制备方法，其特征在于：它以美人鱼发光杆菌ＳＴ１（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｄａｍｓｅｌａｅ ＳＴ１）为免疫原，以黄芪浸出液为佐剂；其具体步骤如下：（１）将美人鱼发光杆菌ＳＴ１（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｄａｍｓｅｌａｅ ＳＴ１）菌株接种在普通营养琼脂肉汤培养基上，２８℃培养２４ｈ，加入终浓度０．３％的甲醛２８℃灭活４８ｈ，得灭活菌体；（２）取黄芪用蒸馏水浸泡３０－６０ｍｉｎ后煎煮，过滤，浓缩至终浓度为原药１ｇ／ｍＬ，得黄芪浸出液；（３）将灭活菌体与得黄芪浸出液混合，制得水剂型黄芪佐剂半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗；疫苗中病原美人鱼发光杆菌免疫原为１．１７×１０１１ｃｅｌｌｓ／ｍＬ，黄芪浸出液为１ｇ／ｍＬ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张晓君，阎斌伦，
申请(专利权)人：淮海工学院，
类型：发明
国别省市：32
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