病毒外壳蛋白/受体嵌合体及使用方法技术

本发明专利技术涉及含有病毒外壳序列和受体序列的嵌合分子，这些序列彼此之间能够相互作用，形成一种能够结合辅助受体的复合物。这样的嵌合分子因此表现出受体－外壳蛋白复合物特征的功能性质，可以用做试剂，其由于占据了细胞上存在的辅助受体而抑制病毒对细胞的感染。具体来说，嵌合的多肽包括免疫缺陷病毒的外膜多肽，例如ＨＮ、ＳＮ、ＦＩＶ、ＦｅＬ　　Ｖ、ＦＰＶ和疱疹病毒的外膜多肽。适合于在嵌合多肽中使用的受体序列包括例如ＣＤ４　　ＤＩＤ２和ＣＤ４Ｍ９序列。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
专利
本专利技术主要涉及受体配体相互作用，更具体来说，涉及含有病毒外壳多肽和细胞受体多肽序列的嵌合多肽，这些多肽序列彼此结合，模拟病毒蛋白与受体在体内相互作用时自然发生的结构、功能和免疫原性性质。相关技术描述初次感染HIV-1后产生的体液免疫不能够防止AIDS的发展(R.A.Koup等，Nature，370416(1994)；R.A.Koup等，J.Virol.684650-5(1994))。但是，如果一个人在暴露到病毒之前具有高滴度的中和抗体，体液免疫就有可能能够防止感染。这个概念得到了被动免疫研究的大力支持，在该研究中在对黑猩猩使用无细胞的病毒进行攻击的时间附近，给它输入中和的抗V3单克隆抗体或合并的高滴度的中和抗血清(E.A.Emini等，Nature355728-30(1992)；R.Shibata等，Nat.Med.，5204-10(1999))。在两组研究中都获得了保护，表明如果在进行攻击时或其后很短的时间内存在足够滴度的正确的抗体，体液免疫可以具有保护性。其它的研究建议体液免疫可以针对HIV-1起保护作用。例如，使用SCID-hu小鼠系统进行的被动免疫已经表明，特异性针对gp120的CD4结合结构域的人单克隆抗体能够防止感染(M.C.Gauduin等，Nat.Med.，31389-93(1997)；P.W.Parren等，AIDS，9F1-6(1995))。此外已经显示二价CD4-Ig“免疫粘附素”(一种在CD4和人IgG2重链之间形成的嵌合体)的被动转移，在HIV-1黑猩猩攻击系统中能够起保护作用(J.W.Eichberg等，AIDS Res.Hum.Retroviruses，81515-19(1992)；R.H.Ward等，Nature，352434-6(1991))。此外，中和抗体与针对SIV的保护性免疫高度相关(J.L.Heeney等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，9510803-8(1998))。另外，在恒河猴中进行的被动转移研究表明，特异性针对HIV-1DH12分离株的高滴度的黑猩猩抗体，如果使用了足够浓度的抗体，可以在恒河猴中提供针对SHIVDH12的消除性免疫(sterilizing immunity)(R.Shibata等，Nat.Med.，5204-10(1999))。同样，在恒河猴中使用HIVIg、2G12和2F5的被动转移实验证明，针对SHIV-89.6P的攻击，接受组与非接受的对照组相比保护提高了50％(Mascola等，J.Virol.，734009-18(1999))。因此，这些研究支持了一种想法，即引发了持久的、高滴度(或高效)的、具有广泛特异性的中和抗体反应的免疫策略可能是有保护作用的。达到这一目的的一个成功的策略已经被阐述。重组的单体或寡聚体HIV外膜的亚基制剂已被测试能够引发针对较窄范围的分离株的中和反应(J.P.Moore等，AIDS，9S117-136(1995)；Q.J.Sattentau，Curr.Opin.Immunol.，8540-5(1996)；R.Wyatt等，Science，2801884-8(1998))。专利技术概述本专利技术涉及含有一种病毒外壳多肽序列和一种病毒受体多肽序列的嵌合多肽，其中外壳多肽序列和受体多肽序列通过一种间隔区相连。嵌合多肽中的外壳多肽和病毒受体多肽序列能够彼此结合。本专利技术的嵌合多肽可用于诱导免疫反应和产生抗体。此外，通过抵抗病毒感染的被动保护或通过给受试对象施用嵌合多肽产生免疫反应(即抗体或CTL反应)，该嵌合多肽还可用于防止、抑制或改善病毒的感染。在多种不同的实施方案中，嵌合多肽的病毒外壳多肽序列是一种外膜多肽序列(例如全长的gp120或其片段)，来自于一种结合辅助受体多肽的病毒、一种免疫缺陷病毒、包括HIV(例如HIV-1或HIV-2)、SIV、FIV、FeLV、FPV和疱疹病毒。在其它各种实施方案中，病毒受体多肽序列是CD4多肽序列，全长的或其片段，例如D1、D2结构域或其突变体。引入来自利用可选择的辅助受体的病毒的外膜基因能够进一步扩展这些单链分子的潜力，为表达不同辅助受体的不同细胞类型提供保护以防止病毒感染。也提供了具有异源结构域的嵌合多肽。这样的异源结构域给予了独特的官能团，包括标志、粘附素和免疫增强剂。例如，异源结构域可以具有一种氨基酸序列，例如c-myc多肽序列或免疫球蛋白多肽序列(例如重链多肽序列)。在本专利技术中提供了具有编码嵌合多肽的核酸序列的多核苷酸序列。多核苷酸可以包含在表达载体中并用于表达嵌合多肽。在本专利技术中还提供了与本专利技术的嵌合多肽结合的抗体及其功能片段。抗体可用于治疗方法和诊断方法中。这样的抗体可以在体外或体内中和免疫缺陷病毒，也可以例如通过被动保护用于抑制免疫缺陷病毒的感染。这样的抗体可以结合到由病毒外壳多肽序列和病毒受体多肽序列的结合所产生的表位上。例如，这样的表位可以出现在外膜多肽序列上。本专利技术的嵌合多肽、多核苷酸和抗体可用于治疗病毒感染，或用于诱导免疫反应。因此，在本专利技术中提供了在可药用载体中的嵌合多肽、多核苷酸和抗体。生产抗体的方法包括将足够量的本专利技术的嵌合多肽给药到受试对象以产生针对嵌合多肽的抗体。这样的方法也可用于例如抑制或改善受试对象中的病毒感染，或者当抗体施用给接受的受试对象时用于被动保护。在受试对象中抑制病毒感染的方法包括施用有效量的本专利技术的嵌合多肽或编码其的多核苷酸以抑制病毒对细胞的感染。施用的嵌合多肽能够通过与受试对象细胞上的病毒辅助受体结合或产生保护性的免疫反应来防止病毒的感染。嵌合多肽可以被施用足够的量以改善受试对象中病毒的感染。产生免疫反应的方法能够产生抗体反应或CTL反应。产生的抗体能够在体外中和免疫缺陷病毒。抗体也可以结合到由嵌合多肽的两个多肽序列结合而暴露出的表位上。还提供了鉴定能够调节病毒和病毒辅助受体、以及病毒和病毒受体之间的结合或相互作用的试剂的方法。在一个实施方案中，该方法包括将一种含有结合到受体上的病毒外壳蛋白的嵌合多肽与一种辅助受体多肽(例如CCR5或CXCR4多肽序列)，在允许嵌合多肽与辅助受体多肽结合的条件下，在存在和不存在测试试剂的情况下相接触，检测在存在和不存在测试试剂的情况下的结合。在存在测试试剂的情况下结合减少说明该试剂抑制了病毒和病毒辅助受体多肽之间的结合。在另一个实施方案中，该方法包括将一种嵌合多肽在允许嵌合多肽分子内结合的条件下，在存在和不存在测试试剂的情况下相接触，检测嵌合多肽内的分子内结合或相互作用。在存在测试试剂的情况下结合减少说明该试剂抑制了嵌合体内病毒和病毒受体多肽之间的分子内结合或相互作用。试剂可以在嵌合多肽与病毒辅助受体多肽接触之前或之后加入。病毒辅助受体或受体多肽可以出现在完整细胞的表面，可以出现在动物中，例如一个非人类的灵长动物。该方法可以使用一种免疫缺陷病毒，例如HIV、SIV等来进行。测试试剂包括了一种试剂文库，例如肽、有机分子、抗体及其片段、抗病毒剂、病毒辅助受体、功能片段或其模拟肽。还提供了鉴定能够调节(抑制或刺激)病毒对细胞感染的嵌合多肽序列的方法。在一个实施方案中，该方法包括将一种对病毒感染敏感的细胞在存在和不存在本专利技术的嵌合多肽序列的情况下与一种感本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种嵌合多肽，含有：病毒外壳多肽序列和病毒受体多肽序列，其中的外壳多肽序列和受体多肽序列通过氨基酸间隔区相连，该间隔区的长度足够使外壳多肽序列和病毒受体多肽序列彼此结合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：安托尼L德维科，蒂莫西R福茨，罗伯特G图什坎，
申请(专利权)人：马里兰大学生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：US[美国]