鼻腔吸入或鼻腔喷雾流感疫苗及其制备方法技术

鼻腔吸入或鼻腔喷雾流感疫苗及其制备方法，包括静水压技术灭活流感全病毒与脂肪乳混合液纳米化或者纳米化静水压技术灭活流感全病毒与纳米化脂肪乳混合液，尺度１０－１２ｎｍ微粒，其比例为１００－３００∶７００－９００。完全保留了流感病毒免疫活性物质血凝素和神经氨酸酶。不含化学灭活剂和裂解剂。用此项技术制备的鼻腔吸入或鼻腔喷雾流感疫苗，具有以下特点：非注射剂，使用方便，可消除婴幼儿童恐惧感和不愿注射的免疫人群；疫苗免疫原性好，抗原保留完全无损，可提高流感疫苗免疫抗体效价一倍以上；一般刺激性小，无不良反应，可以满足所有人群需要；贮存方便，不需要有冷藏链，在常温条件下，可保存一年以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种，属于医药生物疫苗

技术介绍
流感是一种甲、乙、丙三型流感病毒引起的急性呼吸道传染病。本病发病急，传播快，发病率高，具有一定的死亡率，在儿童和老弱患者中死亡率较高，给人类造成严重的社会和经济后果。而且流感病毒经常不断发生抗原变异，出现新的亚种，一般10-15年发生一次世界范围内的大流行；区域性流行春秋常在各地发生。至今人类尚无有效的治疗方法，惟一的方法就是接种流感疫苗进行预防。因此，研制免疫原性好，安全副作用小，使用方便，易接受，稳定性高，能常温保存的流感疫苗具有十分重要的社会和经济效益。制备流感疫苗必须采用WHO推荐毒株结合各国实际情况的甲1、甲3和乙型三价流感病毒来制作全病毒灭活疫苗、裂解疫苗和亚单位疫苗来满足不同人群需要。流感疫苗制作工艺关键技术之一就是灭活病毒，传统工艺是用甲醛灭活，由于甲醛易使病毒粒子表面蛋白抗原受损，往往影响疫苗的免疫原性。同时甲醛又有一定的刺激性和毒副作用，人体接种这种疫苗局部和全身反应都较强。为了解决甲醛灭活存在的问题，本世纪60年代，超速离心和层析技术的应用，使流感病毒纯化操作大大提高，制成了流感全病毒灭活疫苗，也只能应用于成年健康人群，而且有时还出现不良反应，老龄者及有慢性病患者不能使用。本专利技术采用流感病毒静水压技术灭活工艺制备疫苗的方法，就是利用当代高压物理学静水压技术与生物学技术结合的方法，它不仅保留流感全病毒完整结构不被破坏，而且病毒又能完全灭活，同时抗原的免疫原性又不受影响而且还有有所提高，对流感病毒变异快，变种多非常适宜，而且工艺简便，生产周期短，完全取代了化学灭活剂。制备流感疫苗关键技术之二就是裂解病毒制备裂解疫苗和亚原单位疫苗。目前国内外裂解病毒均使化学裂解剂及去污剂，尽量应用现代清除技术处理，但仍有一定的残留化学物质，对人体还会有一些副作用。为了提高流感疫苗的安全性，免疫原及稳定性，本专利技术采用流感病毒纳米技术裂解工艺制造疫苗的方法。就是利用当代高压物理学纳米技术与生物学技术结合的方法，取代化学裂解剂和去污剂，这种方法简便快速，安全可靠。用上述方法制作流感系列疫苗(全病毒灭活疫苗、裂解疫苗和亚单位疫苗)虽然能满足不同人群需要，但都是针剂，必须对人体要进行肌肉注射，不少人对注射感觉得有疼痛感，尤其婴幼儿有一定恐慌性，不愿意接受注射剂预防接种。为了解决这一问题，美国2003年首次推出鼻喷式疫苗，FUMIST感喷，为非注射接种用流感疫苗。由于该疫苗是采用弱化的活流感病毒株，还有一定的副作用，而且只能限于5-49岁的健康人群，其他人群不得使用，应用范围窄。
技术实现思路
本专利技术目的是针对鼻喷式流感疫苗存在的不足，应用用静水压技术灭活和纳米技术裂解流感病毒与脂肪乳结合。提供一种，较好的解决了鼻喷式疫苗存在的问题，可以满足不同人群的需要，而且可在常温下贮存，不降低免疫原性。鼻腔吸入或鼻腔喷雾流感疫苗，包括静水压技术灭活流感全病毒与脂肪乳混合液纳米化或者纳米化静水压技术灭活流感全病毒与纳米化脂肪乳混合液，尺度10-12nm微粒悬液，其配比为100-300∶700-900。鼻腔吸入或鼻腔喷雾流感疫苗制备方法 ①按配比灭活的流感全病毒脂肪乳混合液置于高速搅拌器内，搅拌使其充分混合均匀；②高速搅拌均匀的流感病毒脂肪乳混合液置于纳米对撞机，选定纳米通道，确定压力，时速，流液相互对撞，使流感病毒脂肪乳混合液瞬间裂解为10-12nm微粒，裂解、乳化、分散、催化与合成同步完成，得到微粒悬液。的
技术实现思路
一、脂肪乳组成原料的制备脂肪乳制剂已作为营养支持的能源物质是20世纪医学发展史上重大进步，以其独特的优点在临床医学上得到广泛的应用，尤其在外科治疗方面，近年来在基础研究和临床应用均取得许多进展。脂肪乳剂虽是较理想的供能制剂，并由于其具有的特点。对许多外科疾病患者使用更合适。更利于内脏对氨基酸的摄取和内脏蛋白合成代谢。但全部贯彻脂肪并不能达到节氨目的，中枢神经细胞与红细胞必须依赖CS供能。脂肪酸最后进入三酸循环氧化时需草酰乙酸。后者由碳水化合物产生。因而认为由GS-脂肪双能源供能优于任何单能源已成定论。为了提高现有脂肪乳制剂质量，消除一些副反应，并扩大应用范围。本专利技术者专利技术了纳米技术制备脂肪乳注射液及其制剂的应用，为本专利技术奠定了坚实的基础。脂肪乳作为流感疫苗免疫抗原的载体，既是保护剂兼免疫佐剂，又是很好的稳定剂。因此制备鼻腔吸入或鼻腔喷雾流感疫苗必须先制备好脂肪乳组成原料。1、大豆油的特制精制大豆油的过程分碱炼、水洗、脱色、过滤、灭菌等过程，以除去游离脂肪酸、致热物质、色素等，使所得的精制大豆油达到静脉注射用的要求，其精制工艺流程如下 精制的大豆油为浅黄绿色，其碘价、酸价、皂化价、比重、粘度、折光率、过氧化值等，应符合规定要求。精制后保存在无菌、密闭、充氮的容器中冷藏。2、乳化剂--精制大豆磷脂乳化剂，在静注用脂肪乳剂中是个关键问题。所用乳化剂不仅具有高效的乳化力(乳化后油滴在1pm左右)，在人体内应无毒性，化学性质稳定，不易分解，能耐受高压灭菌及长时间贮存不分解等。乳化剂品种很多，只有蛋黄磷脂、豆磷脂(包括氢化豆磷脂)与普朝立克F-68数种，后者主要与豆磷合用作为辅助乳化剂。蛋黄磷脂自蛋黄中提取精制而得，主要含卵磷脂，尚含少量其他磷脂如脑磷脂，它易水解氧化，稳定性很高。豆磷脂系由豆油中分离出的全豆磷脂中提取精制而得，以卵磷脂成分为主，并含有少量脑磷脂，这种精制品也易被水解或氧化，但较蛋黄磷脂稳定。卵磷脂的结构式如下 卵磷脂分子呈现微柱状，含磷酸根、但碱基的极性端具亲水性，由碳氢链组成的非极性端具亲脂性，有良好的乳化性能，比其他磷脂稳定、毒性小。用全豆磷脂为原料，主要抽提卵磷脂，同时除去致热与降压物质。其精制过程如下加水溶化，加无水硫酸钠 干燥后乙醇提取 活性AI2O3粉状 全豆磷脂—————→析出磷脂———→磷脂乙醇液————→盐析 吸附(除去致热物质及杂质) (除去降压物质)活性炭 通N2 无水丙酮吸附后磷脂醇液—→脱色后磷脂醇液肪—→粘状膦脂肪—→精制大豆磷脂脱色 真空减压蒸馏 脱水、脱油精制的大豆磷脂炎淡黄色粘状半固体，易溶于乙醇和乙醚，不溶于丙酮，暴露在空气中极易氧化，呈深粽色，并水解变性，故应贮存在无水丙酮中。精制大豆磷脂的氮含量、磷含量、酸价、PH值、过氧化值、降压试验、热原试验、安全试验等项目，应符合规定要求。3、药用甘油、吐温和注射用水符合药典要求脂肪乳组成的原料可在市场购得，必须符合药用标准要求，具备检测报告。二、流感全病毒制备与静水压技术灭活1、流感全病毒制备流感全病毒制备，取工作流感病毒毒种，接种8-11日龄鸡胚并于34℃孵化，48-72小时后收获尿囊液，超滤浓缩，超速离心纯化，过柱层析后即为流感全病毒，半成品检定，单价病毒悬液合并贮存于2-8℃冷藏保存备用。2、静水压设备及其工作原理简介静水压是流体静压力的简称。将固体、液体和气体均视为连续介质。在外力作用下，各部分介质通过它们之间的分界面互施大小相等、方向相反的作用力，称作用在单位界面上的力为应力。可以把应力分解成两个分量一个垂直地作用面，称为正应力，常用6表示另一个在作用面内，称切应力，常用T表示。可以证明，介质内任一点的应力状态可以用对称的应力张量来表示，本文档来自技高网...

【技术保护点】
鼻腔吸入或鼻腔喷雾流感疫苗，包括静水压技术灭活流感全病毒与脂肪乳混合液纳米化或者纳米化静水压技术灭活流感全病毒与纳米化脂肪乳混合液，尺度１０－１２ｎｍ微粒悬液，其配比为１００－３００∶７００－９００。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：苟仕金，苟鸿鹰，王成余，王刚，
申请(专利权)人：辽宁天成生物制药研究所，
类型：发明
国别省市：89[中国|沈阳]