本发明专利技术涉及生物制药，特别是涉及针对抗耐药菌、病毒的人溶菌酶药物及其制法、应用。人溶菌酶栓剂，含有活性３００Ｕ～３００万Ｕ／ｍｌ人溶菌酶。本发明专利技术基因重组人溶菌酶安全无毒副作用，来源丰富，有很好的药用前景，制备工艺简单，做成栓剂给药药物不受胃肠ｐＨ或酶的破坏而失去活性；对胃粘膜有刺激性的药物可用直肠给药，可免受刺激；药物直肠吸收，不像口服药物受肝脏首过作用破坏；直肠吸收比口服干扰因素少；对不能或者不愿吞服片、丸及胶囊的病人，尤其是婴儿和儿童可用此法给药；对伴有呕吐的患者的治疗为一有效途径；制备方法成熟，简单。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物制药，特别是涉及针对抗耐药菌、病毒的人溶菌酶药物及其制法、应用。
技术介绍
21世纪的今天，耐药菌的发展令人触目惊心。所谓耐药菌就是细菌对药物产生抗性，是细菌多次与药物接触后，对药物的敏感性减小甚至消失，致使药物对细菌的敏感性降低甚至无效。其中耐药菌包括金黄色葡萄球菌MRSA、表皮葡萄球菌MRSE、肺炎链球菌、溶血性链球菌、肠球菌属、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、丙酸杆菌、淋病双球菌、枸橼酸杆菌、沙雷氏菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单孢菌、白色念珠菌等。主要是对下列药品产生耐药性克拉霉素、罗红霉素、阿莫西林、万古霉素、德可霉素、广谱青霉素、甲氧西啉类、头孢类、青霉素钠、青霉素钾、磺胺类。具体的耐药标准是(抑菌圈直径mm) 从细菌的耐药发展史可以看出，在某种新的抗生素出现以后，就有一批耐药菌株出现。开发一种新的抗生素一般需要10年左右的时间，而一代耐药菌的产生只要2年的时间，抗生素的研制速度远远赶不上耐药菌的发展速度。目前急需开发一种针对不同耐药菌株均有效的“超级抗生素”用于临床治疗。如中国专利03110824.5所公开了人溶菌酶针对抗耐药菌的用途，但是针对某些疾病是否有更合理有效的剂型，以及在制备治疗更多种疾病的开发上仍有很大空白。
技术实现思路
本专利技术的目的提供一种人溶菌酶栓剂，针对抗耐药菌包括对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌引起的抗耐药性，胃肠免受刺激，直接作用于患处，使用方便，效果好。本专利技术为实现上述目的所采用的技术方案是人溶菌酶栓剂，含有活性300U～300万U/mL人溶菌酶。所述人溶菌酶包括基因工程表达的重组人溶菌酶、基因工程表达人溶菌酶的氨基端带有(谷氨酸-丙氨酸)2或(谷氨酸-丙氨酸)3修饰的人溶菌酶、基因工程表达或化学合成突变体重组人溶菌酶。本专利技术栓剂制备工艺流程为配方原料药物准备→配方药物分别制备→配方药物混合制备→倒入栓剂模具→冷却固化成型→含量及其它质量测定→成品包装。(在符合GMP要求的制药工厂，按制药规程完成)。具体的制法如下第一步、基因重组人溶菌酶的制备基因重组人溶菌酶以配制200毫升培养基为准，用磷酸6毫升、硫酸镁3克，硫酸钾4克，氢氧化钾1克，硫酸钙1.5克，加蒸馏水至200毫升，高压灭菌后接种甘油管种子，摇床转数为每分钟250转，培养温度为20-35℃，在恒温床上培养36-48小时。进行种子罐培养，最后进行生产罐培养。将发酵表达完成的培养液进行提取纯化，对提取纯化的蛋白浓缩液进行冻干，测蛋白测活性保存。第二步、栓剂制备将纯度95％的基因重组人溶菌酶制得300U～300万U/mL，磷酸盐缓冲液10～20mM(pH6.5～7.5)，75～85％丙二醇、万分之五吐温80，明胶15％，称取明胶，加磷酸盐缓冲液10～20mM(pH6.5～7.5)适量，浸泡20分钟，使其变软，将多余的液体倒出，称取丙二醇加入，置水浴上加热溶化蒸发，无液体后取下，冷却50℃以下，加入重组人溶菌酶和万分之五吐温80，搅拌均匀，接近凝固时，倒入栓剂模具中，冷却、固化、成型，产品活性含量及其它质量测定，成品包装。本专利技术栓剂在制备针对抗耐药菌包括对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌引起的抗耐药性的药物中的应用。涉及人溶菌酶栓剂在制备预防或治疗由耐药白色念珠菌引起的阴道炎的药物中的应用。涉及人溶菌酶栓剂在制备预防或治疗由II型疱疹病毒引起的子宫颈炎的药物中的应用。涉及人溶菌酶栓剂在制备预防或治疗由耐药淋病双球菌引起的尿道炎的药中的应用。涉及人溶菌酶栓剂在制备治疗由细菌、病毒、和自身免疫异常引起的溃疡性结肠炎的药中的应用。本专利技术基因重组人溶菌酶安全无毒副作用，来源丰富，有很好的药用前景，制备工艺简单，做成栓剂给药有如下特点①药物不受胃肠pH或酶的破坏而失去活性；②对胃粘膜有刺激性的药物可用直肠给药，可免受刺激；③药物直肠吸收，不象口服药物受肝脏首过作用破坏；④直肠吸收比口服干扰因素少；⑤对不能或者不愿吞服片、丸及胶囊的病人，尤其是婴儿和儿童可用此法给药；⑥对伴有呕吐的患者的治疗为一有效途径；⑦制备方法成熟，简单。为了更好地理解本专利技术的实质，下面将用基因重组人溶菌酶的药理试验及结果来说明其在制药领域中的新用途。基因重组人溶菌酶以配制200毫升培养基为准，用磷酸6毫升、硫酸镁3克，硫酸钾4克，氢氧化钾1克，硫酸钙1.5克，加蒸馏水至200毫升，高压灭菌后接种甘油管种子，摇床转数为每分钟250转，培养温度为20-35℃，在恒温床上培养36-48小时。进行种子罐培养，最后进行生产罐培养。将发酵表达完成的培养液进行提取纯化，对提取纯化的蛋白浓缩液进行冻干，测蛋白测活性保存。将合格的基因重组人溶菌酶制得30000U/ml备用；将纯度95％的基因重组人溶菌酶制得300U～300万U/mL，磷酸盐缓冲液10～20mM(pH6.5～7.5)，75～85％丙二醇、 万分之五吐温80，明胶15％，制成栓剂(在符合GMP要求的制药工厂，按制药规程完成)。一、对动物的模型试验A、基因重组人溶菌酶(HLZ)体内外抗菌作用评价(1)体外抗菌作用受试药品及试剂1、人溶菌酶(Human Lysozyme HLZ)活性单位30000单位/mL，由大连奇龙生物技术研究所提供。2、对照溶菌酶(contral Lysozyme，CLZ)白色粉未，活性单位50000单位/mg，美国SIGMA公司产品，批号L6876。3、克拉霉素效价948μ/mg，中国药品生物制品检定所标准品，批号4、罗红霉素效价878μ/mg，中国药品生物制品检定所标准品，批号5、注射用阿莫西林哈尔滨制药厂产品，批号010504。6、琼脂糖(B10WEST AGAROSE) 7、三羟甲基氨基甲烷(Tris)成都化学试验厂，批号010211试验菌株所用菌株均为2001.4~2002.4月于四川、北京地区收集的临床分离致病菌。经本室用API方法重新鉴定后用于试验。质控菌株金黄色葡萄球菌ATCC25923大肠埃希菌ATCC25922铜绿假单孢菌ATCC27853培养基4、Tris-HCl缓冲液0.1M Tris 100ml，0.1M HCl 70ml，High Water 800ml，测PH值，用HCl溶液调至PH7.2，加High Water至1000ml。2、Tris-HCl琼脂培养基在Tris-Cl缓冲液中加入琼脂糖116℃无菌后使用。3、M-H培养基中国药品生物制品检定所产品，M-H肉汤培养基称取25g加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，高压灭菌，116℃20分钟。M-H固体培养基称取36g，加1000ml蒸馏水，高压灭菌，116℃20分钟，用于革兰阳性、阴性需氧菌的药敏试验。4、血培养基，即在M-H培养基中加5-10％脱纤维兔血配制而成，用于肠球菌、链球菌的药敏试验。试验方法体外抗菌活性(MIC)测定采用琼脂二倍稀释法测定受试药物对试验菌株的最低抑菌浓度(MIC)。将受试药物用灭菌蒸馏水溶解，适当稀释。分别取1ml药液加9ml融化的Tris-HCl琼脂糖固体培养基混匀，以二倍稀释，制备系列含药平皿。每皿所含药物终浓度分别为4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03……0.001mg/ml；用多点接种仪(Denley A400，Englan本文档来自技高网...
【技术保护点】
人溶菌酶栓剂，含有活性３００Ｕ～３００万Ｕ／ｍｌ人溶菌酶。
【技术特征摘要】
1.人溶菌酶栓剂，含有活性300U～300万U/ml人溶菌酶。2.据权利要求1所述的人溶菌酶栓剂，其特征是由纯度95％的基因重组人溶菌酶制得300U～300万U/mL，磷酸盐缓冲液10～20mM(pH6.5～7.5)，75～85％丙二醇、万分之五吐温80，明胶15％，制成栓剂。3.根据权利要求1所述的人溶菌酶，其特征是人溶菌酶包括基因工程表达的重组人溶菌酶、基因工程表达人溶菌酶的氨基端带有(谷氨酸-丙氨酸)2或(谷氨酸-丙氨酸)3修饰的人溶菌酶、基因工程表达或化学合成突变体重组人溶菌酶。4.根据权利要求1、2或3所述的人溶菌酶栓剂的制法，其特征是将纯度95％的基因重组人溶菌酶制得300U～300万U/mL，磷酸盐缓冲液10～20mM(pH6.5～7.5)，75～85％丙二醇、万分之五吐温80，明胶15％，称取明胶，加磷酸盐缓冲液10～20mM(pH6.5～7.5)适量，浸泡20分...
【专利技术属性】
技术研发人员：安米，
申请(专利权)人：安米，
类型：发明
国别省市：91[中国|大连]
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