一种火焰兰的杂交育种和无菌播种方法技术

本发明专利技术公开了一种火焰兰的无菌播种和杂交育种的方法。它是选择具明显特性、观赏价值高的兰科植物作为杂交母本，以火焰兰作为父本，进行杂交，授粉成功得到的果实在基本成熟而未开裂时，在种子萌发培养基上进行无菌播种，种子萌发后再转移到壮苗培养基上培养，形成的试管苗经过自然光照下炼苗10～20天后出瓶栽培，成苗的移栽成活率可达90％以上。本发明专利技术具有杂交成功率高的特点，特别是对一些与火焰兰杂交亲本花期不遇的具明显特性、观赏价值高的兰科植物为杂交亲本时十分有效。本发明专利技术采用独特的培养基和培养方法，使得火焰兰杂交种子的萌发率高、成苗快、种苗品质好。本发明专利技术具有操作性强，育种效率和应用价值高等优点。

Cross breeding and aseptic seeding method of Renanthera

The invention discloses a method of aseptic seeding and breeding of renanthera. It is the choice with obvious characteristics, high ornamental value of orchids as hybrid female parent, with Renanthera as male parent for hybridization, and successfully obtained in unpollinated fruit mature cracking, in seed germination medium for aseptic sowing, seed germination and seedling and then transferred to the culture medium, the formation of plantlets under natural light after 10 ~ 20 days after seedling cultivation into the bottle, the survival rate of plantlets reached above 90%. The invention has the characteristics of high success rate, especially for some parents and Renanthera flowering period with obvious characteristics, very effective with high ornamental value of orchid plants to be parents. The invention adopts the unique culture medium and culture method, makes Renanthera hybrid seeds high germination rate and seedling fast, good seedling quality. The invention has the advantages of strong operability, high breeding efficiency and high application value.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物的杂交育种方法，具体涉及。
技术介绍
火焰兰属(Reanathera)植物全世界约有21种，为附生或半附生植物，分布于东 南亚至喜马拉雅地区，包括华南地区，我国原产3种，其中火焰兰(Ren. Coccinea)产于广 东，海南地区，植株高大生长健旺，云南火焰兰(Ren. imschootiana)和中华火焰兰(Ren. sinica)产于云南。火焰兰生长健旺，花色艳丽，花数众多，远观如火焰般绚丽，具有很高的 园艺应用价值和育种价值，是国际花卉市场上十分流行的高档花卉，在世界上具有大量的 爱好者。而且由于其生长环境为热带、亚热带，适合在华南地区栽培，未来有希望在华南地 区建立其育种和生产基地，形成类似蝴蝶兰、石斛兰的产业。火焰兰已成为世界上濒危的植 物物种之一，所有野生种类均被列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》(CITES)附录中而 被禁止贸易。火焰兰杂交种比原生种花型花姿更为优美，生长势和抗逆性强，在花色上比原生 种更为艳丽多彩，也能在国际市场上进行交易，现已成为世界火焰兰产业的主流产品，但我 国火焰兰的杂交育种工作还刚刚起步，火焰兰产业具有广阔的市场前景。火焰兰虽具有很高的杂交亲和性，但在与其他兰科植物杂交时存在花期不遇问 题，同时由于花期不遇而无法进行一些远缘杂交，此外已报道的其他植物的花粉低温保存 时常发生霉变问题而导致花粉保存失败。火焰兰杂交种子由于其种胚发育不完全，自然状 态下萌发率极低，需要无菌播种才能进行种苗生产。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种火焰兰的杂交育种的方法和萌发率高、成苗快、种苗品 质好的无菌播种的方法。本专利技术选择具明显特性、观赏价值高的兰科植物作为杂交母本，以火焰兰作为父 本，进行杂交，授粉成功得到的果实在基本成熟而未开裂时，在种子萌发培养基上进行无菌 播种，种子萌发后再转移到壮苗培养基上培养，形成的试管苗经过自然光照下炼苗10 20 天后出瓶栽培，成苗的移栽成活率可达90%以上，从而实现了本专利技术的目的。本专利技术的火焰兰的杂交育种和无菌播种的方法，其特征在于，包括以下步骤(1)人工授粉以兰科植物作为母本，以火焰兰作为父本，采集父本的花粉授于 母本的柱头上，并进行套袋处理，防止外来花粉的干扰；(2)无菌播种当母本结出的杂交蒴果发育基本成熟而果实未开裂时，将该果 实搽抹干净，依次用体积分数为70 75%酒精溶液浸泡2 3分钟后，置于质量分数为 0. 0. 2%的升汞溶液中消毒20 30分钟，再用无菌水冲冼4 5次，吸干果实表面 的水分，切开果实，将粉末状种子接种到种子萌发培养基上培养，种子萌发先形成原球茎，随后长成小苗，所述的种子萌发培养基为每升含花宝1号1 3. 0g，蛋白胨0. 5 2. 0g，椰 子汁100 150mL,蔗糖20 30g,琼脂6 7g，活性炭0. 5 1. Og,肌醇80 120mg,甘氨 酸1. 5 2. 5mg,盐酸硫胺素0. 05 0. 2mg,盐酸吡哆醇0. 4 0. 8mg,烟酸0. 4 0. 8mg, 余量为水，pH 5. 4 5. 8 ；自种子接种到种子萌发培养基上培养，一般30 90天种子萌发 形成原球茎，90 180天进一步形成小苗，种子萌发率60 90%，成苗率55 90% ；(3)壮苗培养将无菌播种获得的小苗接种到壮苗培养基上培养，120 180天时 能形成健壮的植株，所述的壮苗培养基为每升含花宝1号1 3. 0g，蛋白胨0. 5 2. Og,萘 乙酸0.5 l.Omg、香蕉勻浆50 100g，椰子汁50 IOOmL,蔗糖15 20g，琼脂6 7g， 活性炭0. 5 2. Og,肌醇80 120mg，甘氨酸1. 5 2. 5mg,盐酸硫胺素0. 05 0. 2mg,盐 酸吡哆醇0. 4 0. 8mg,烟酸0. 4 0. 8mg,余量为水，pH 5. 4 5. 8 ；(4)试管苗移栽当小苗长成的植株5 8cm高时，将培养瓶转移到自然光下炼 苗10 20天，然后将其取出，洗净根部的培养基，移入兰石木屑树皮按体积比为2 3 1 2 1 2的混合基质中培养；常规管理，保持适当的通风和足够的湿度，移栽的 成活率可达90%以上；上述步骤⑵和(3)中的培养条件为培养温度M ^°C，光照度1500 20001x，光照12 16小时/天。在所述的人工授粉步骤，当母本和父本花期相同时，在母本花朵展开后2 4天， 取父本的花粉直接授于母本的柱头上。在所述的人工授粉步骤，当母本和父本的花期不遇时，在父本火焰兰的盛花期采 集花粉块，采集时机选择在火焰兰花朵花瓣刚展开时，采集时间选择在上午8 9时，采集 花粉置于无菌的塑料管中，密封置于4°C避光保存，当母本开花时，将低温保存的父本花粉 在15 35°C的条件下解冻20 30min，再往放置花粉的塑料管中加入无菌水进行浸泡回 湿花粉20 30min，然后将有生活力的花粉授于母本柱头上。按照上述方法进行火焰兰的 花粉的保存，火焰兰花粉的保存时间可达3 10个月。花粉生活力的测试可采用氯化三苯 四氮唑染色法测定花粉生活力，确认花粉有活力后将其授于母本的柱头上。采用的上述洁 净低温保存的具有生活力的火焰兰花粉、授粉前对花粉进行解冻和回湿处理等技术解决了 花粉保存时的霉变问题以及不同花期的品种和植株的杂交授粉阻碍，从而为火焰兰新品种 选育打下基础。所述的采集花粉置于无菌的塑料管中，密封置于4°C避光保存，优选，步骤为应 用无菌的牙签轻轻挑掉花的药帽，再用无菌牙签将花粉块粘连在牙签尖上并迅速将花粉块 放至洁净无菌的Iml离心管中，每管放入1朵花的花粉块，将放置了花粉块的离心管再用一 无菌的玻璃瓶集中装起来，并密封好，置于4°C避光保存。不同火焰兰杂交种果实在授粉后的成熟期不同，但大部分火焰兰杂交种子在授粉 后4个月时就能萌发，到5 6个月时达到萌发高峰，然后下降，但与兰属杂交的火焰兰杂 种的果实发育成熟需要10 12个月时间。一般火焰兰杂交种子最佳的萌发期是在果实发 育基本成熟而果实未开裂时。在步骤O)的无菌播种步骤，优选将种子萌发先形成的原球茎接种到分化培养基 上，使原球茎在分化培养基上形成小苗，所述的分化培养基是在种子萌发培养基的基础上 每升添加6-卞基腺嘌呤5. Omg,培养条件为培养温度M ，光照度1500 20001x，光照12 16小时/天。所述的母本兰科植物优选为五唇兰(Doritis pulcherrima)、小花万代兰 (Vandacoerulescens)或彩心建兰(Cymbidium ensifolium)。步骤( 和C3)培养基中使用的花宝1号可从市场上购得。本专利技术具有杂交成功率高的特点，特别是对一些与火焰兰杂交亲本花期不遇的具 明显特性、观赏价值高的兰科植物为杂交亲本时十分有效。本专利技术采用独特的培养基和培 养方法，使得火焰兰杂交种子的萌发率高、成苗快、种苗品质好。本专利技术具有操作性强，育种 效率和应用价值高等优点。具体实施例方式以下是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制。实施例中使用的花宝1号(HYPONeX 1)为美国生产，台湾台和园艺企业股份有限 股份有限公司分装产品。实施例1 五唇兰(Doritis pulcherrima)禾口云南火焰兰(Ren本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种火焰兰的杂交育种和无菌播种的方法，其特征在于，包括以下步骤：（１）：人工授粉：以兰科植物作为母本，以火焰兰作为父本，采集父本的花粉授于母本的柱头上，并进行套袋处理；（２）：无菌播种：当母本结出的杂交蒴果发育基本成熟而果实未开裂时，将该果实搽抹干净，依次用体积分数为７０～７５％酒精溶液浸泡２～３分钟后，置于质量分数为０．１％～０．２％的升汞溶液中消毒２０～３０分钟，再用无菌水冲冼４～５次，吸干果实表面的水分，切开果实，将粉末状种子接种到种子萌发培养基上培养，种子萌发先形成原球茎，随后长成小苗，所述的种子萌发培养基为每升含花宝１号１～３．０ｇ，蛋白胨０．５～２．０ｇ，椰子汁１００～１５０ｍＬ，蔗糖２０～３０ｇ，琼脂６～７ｇ，活性炭０．５～１．０ｇ，肌醇８０～１２０ｍｇ，甘氨酸１．５～２．５ｍｇ，盐酸硫胺素０．０５～０．２ｍｇ，盐酸吡哆醇０．４～０．８ｍｇ，烟酸０．４～０．８ｍｇ，余量为水，ｐＨ　５．４～５．８；（３）：壮苗培养：将无菌播种获得的小苗接种到壮苗培养基上培养，所述的壮苗培养基为每升含花宝１号１～３．０ｇ，蛋白胨０．５～２．０ｇ，萘乙酸０．５～１．０ｍｇ、香蕉匀浆５０～１００ｇ，椰子汁５０～１００ｍＬ，蔗糖１５～２０ｇ，琼脂６～７ｇ，活性炭０．５～２．０ｇ，肌醇８０～１２０ｍｇ，甘氨酸１．５～２．５ｍｇ，盐酸硫胺素０．０５～０．２ｍｇ，盐酸吡哆醇０．４～０．８ｍｇ，烟酸０．４～０．８ｍｇ，余量为水，ｐＨ　５．４～５．８；（４）：试管苗移栽：当小苗长成的植株５～８ｃｍ高时，将培养瓶转移到自然光下炼苗１０～２０天，然后将其取出，洗净根部的培养基，移入兰石∶木屑∶树皮按体积比为２～３∶１～２∶１～２的混合基质中培养；上述步骤（２）和（３）中的培养条件为：培养温度２４～２８℃，光照度１５００～２０００ｌｘ，光照１２～１６小时／天。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴坤林，曾宋君，陈之林，段俊，张建霞，唐源江，
申请(专利权)人：中国科学院华南植物园，
类型：发明
国别省市：81