一种牛肝菌提取物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种牛肝菌提取物及其制备方法，主要是将牛肝菌在３０～４０℃下烘干、粉碎、过６０～２００目筛，然后在０～４℃下用磷酸缓冲液进行提取，再在０℃～４℃、１００００～１２０００ｒｐｍ下离心２０～３０ｍｉｎ；收集上清液，即为牛肝菌提取物。本发明专利技术为防治烟草花叶病毒提供了一种有效方法，本发明专利技术牛肝菌提取物对烟草花叶病毒的抑制率可达６７．４９～９２．５１％；本发明专利技术属于天然提取物，对人无害，属于环境友好型；本发明专利技术生产方法简单、成本低。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物提取物，具体地说涉及一种牛肝菌提取物及其制备方法， 以及该提取物在防治植物病害上的应用。
技术介绍
植物病毒病害是仅次于真菌病害的植物病害，在农业生产上造成严重的危害。据估计，全世界每年因植物病毒病害造成的损失超过150亿美元，其中烟 草花叶病毒病(Tobacco mosaic virus)的危害每年造成的损失达1亿多美元(吴云峰.世界农业，1995， (5): 35 36)。目前，对于烟草花叶病毒病害的 还没有有效的防治方法。因此，寻找安全而又具抗病毒活性的生物源抗病毒活 性物质或抗病基因是当前植物病毒病防治领域的研究热点。在19世纪70年代，人们就发现多种担子菌子实体、食用菌深层发酵液和 固体培养物水浸液对植物病毒有抑制作用(王晶英等.中国食用菌，1997， 16(2): 6-7.高木康至等.日植病报，1977,43: 211-214.王先彬等.微生物学报，1986， 26(4): 363-365)。在食用菌中也发现多种活性成分，如大约30 50的食用 菌种类中含有凝集素，还发现食用菌含有抗植物病毒蛋白(王贺祥等.中国食 用菌，1997， 16(1): 3-4)，研究报道从榆黄蘑(/^earotsci^ri/2叩L/eats)(付 鸣佳等.中国病毒学，2002， 17(4): 350-353)、金针恭(/^纖z/h.朋ye化戸)(付鸣佳等.福建农林大学学报(自然科学版)，2003， 2(1): 84-88)、杏鲍菇 (Z^ei/roZ^erj7^j'力(付鸣佳等.微生物学报，2003， 43(1): 29-34.)、 杨树菇G^rocy/be朋gen'ta)(孙慧等.生物化学与生物物理学报，2001 ， 33 (3): 351-354)、灰花树(6W/b2a /Yo/^oca)(陈宁等.生物化学与生物物理学报， 2004, 31(3): 283-286)、毛头鬼伞(6bprim/s caraat〃s)(吴丽萍等.中国病 毒学，2004， 19(1): 54-57)等多种食用菌中分离到具有抗TMV活性的蛋白质。 鸡油菌(C朋t力areJ7ws /hj./20J Peck)、蘑燕C^arz'c;is c棚/ estrz's1 L:Fr.)、香 蔬[Ze/ 加ec/oofes (Berk.)Sing.]、 平燕(尸/wtj7w51)、 茶树燕[y^roc76e & (Br ig.)Sing.]、 鸡腿燕(6b/7ri/ 〃51 co鹏、 真姬燕(外; 57.z;^7y51 鹏i7z ores)、金针范(^a顺Wi'77a 1^/wz^ es)8种食用菌提取物在体外都具有 钝化病毒(TMV)及抑制病毒(TMV)侵染的作用；除鸡油菌(C朋t力are7hs肌'/7or Peck)外，其它7种食用菌提取物对TMV有不同程度的防治作用(马学萍等，云 南农业大学学报，2007， 22 (2) :1-2)。因此，筛选能抑制植物病毒的大型真菌 以及分离出其中抗病毒的活性物质成分可能是防治植物病毒病害的有效途径。牛肝菌含有丰富的矿质元素及适合的氨基酸组分，有降血脂及抗氧化作用； 含有较多具有抗癌作用的多糖类物质，还有补血、润肠、养发的功效。但其在 植物病害防治方面的作用未见有报道。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种牛肝菌提取物，该提取物可用于防治烟草花叶病主雄 母寺。本专利技术的第二个目的是提供上述牛肝菌提取物的制备方法。 本专利技术的第三个目的是提供上述牛肝菌提取物的用途。实现本专利技术目的技术方案如下一种牛肝菌提取物，按照如下方法制备(1) 将牛肝菌在30 4(TC下烘干、粉碎、过60 200目筛，得牛肝菌干粉；(2) 在0 4。C下，按照重量体积比为l: 10 20的比例向步骤(1)所得 牛肝菌干粉中加入磷酸缓冲液，震荡混匀，得混合液；所述的磷酸缓冲液为20 30,1/L, pH7. 0 8.0;(3) 将步骤(2)所得混合液在0 4。C、10000 12000rpm下离心20 30min; 弃沉淀，收集上清液，即为牛肝菌提取物。上述牛肝菌提取物中所述的牛肝菌是指黑牛肝菌(^^^ 或黄牛 肝菌(5。Jeto sw/7.一50等。上述牛肝菌提取物步骤(1)中所述的粉碎可用组织捣碎机进行。上述牛肝菌提取物可置于-2crc冷冻保存备用。上述牛肝菌提取物的制备方法，包括如下步骤(1) 将牛肝菌在30 4(TC下烘干、粉碎、过60 200目筛；得牛肝菌千粉；(2) 在0 4X:下，按照重量体积比为1:10 20的比例向步骤(1)所得 的牛肝菌干粉中加入磷酸缓冲液，震荡混匀，得混合液；所述的磷酸缓冲液为 20 30mmol/L、 pH7. 0 8. 0;(3) 将步骤(2)所得混合液在0 4。C、10000 12000rpm下离心20 30min; 弃沉淀，收集上清液，即得牛肝菌提取物。上述制备方法中所述的牛肝菌是指黑牛肝菌(A^e&s se/^As)或黄牛肝菌 (So/efiAs si/ri t/ es)等。上述制备方法步骤(1)中所述的粉碎可用组织捣碎机进行。 上述牛肝菌提取物在防治烟草花叶病毒上的应用。其具体的用法如下 将上述牛肝菌提取物用水稀释到蛋白浓度为10.00 40.0(mg/ml，然后用 稀释液对长到8 10片真叶的烟草进行整株喷雾即可。上述牛肝菌提取物在促进大白菜芽生长上的应用。具体方法如下将牛肝菌提取物用水稀释到蛋白浓度为10.00 40.0(Hig/ml，然后用稀释的牛肝菌提 取物将大白菜种子浸种6 8小时即可。本专利技术具有的优点和有益效果(1)本专利技术为防治烟草花叶病毒提供了一 种新途径，本专利技术对烟草花叶病毒的抑制率可达92.51%; (2)本专利技术可促进大 白菜芽的生长；(3)本专利技术属于天然提取物，不会造成环境污染，对人无害， 属于环境友好型；(4)本专利技术生产方法简单、成本低。 具体实施例方式实施例l黑牛肝菌提取物的制备(1) 将市售黑牛肝菌在4(TC烘干，称取10g，用组织捣碎机打碎，过60 目筛，得黑牛肝菌干粉；(2) 在4 r:下向步骤(1)所得黑牛肝菌干粉加100ml磷酸缓冲液(pH8. 0， 25mmol/L )，震荡混匀，操作均在冰上进行，得混合液；(3) 将步骤(2)所得的混合液在4。C、 12000rpm下离心20min;弃沉淀， 收集上清液，即得黑牛肝菌提取物90ml， -20。C冷冻保存备用。用BCA蛋白浓度试剂盒(美国Pierce公司)检测黑牛肝菌提取物的蛋白浓 度，测定方法按照试剂盒的说明书进行，结果上述黑牛肝菌提取物的蛋白浓度 为7. 9507mg/ml。实施例2黄牛肝菌提取物的制备(1) 将市售黄牛肝菌在4(TC烘干，称取10g，用组织捣碎机打碎，过60 目筛，得干粉；(2) 在4'C下向步骤(1)所得黄牛肝菌干粉中加入100ml磷酸缓冲液 (PH8.0， 25mmol/L)，震荡混匀，操作在冰上进行，得混合液；(3) 将步骤(2)所得的混合液在4。C、 12000rpm下离心20min;弃沉淀， 收集上清液，即得黄牛肝菌提取物90ml， -2(TC冷冻保存备用。用BCA蛋白浓度试剂盒(美国Pierce公司)检测黄牛肝菌提取物的蛋白浓 度，测定本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种牛肝菌提取物，按照如下方法制备：　（１）将牛肝菌在３０～４０℃下烘干、粉碎、过６０～２００目筛，得牛肝菌干粉；　（２）在０～４℃下，按照重量体积比为１∶１０～２０的比例向步骤（１）所得牛肝菌干粉中加入磷酸缓冲液，震荡混匀，得混合液；所述的磷酸缓冲液为２０～３０ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．０～８．０；　（３）将步骤（２）所得混合液在０～４℃、１００００～１２０００ｒｐｍ下离心２０～３０ｍｉｎ；弃沉淀，收集上清液，即为牛肝菌提取物。

【技术特征摘要】
1、一种牛肝菌提取物，按照如下方法制备(1)将牛肝菌在30～40℃下烘干、粉碎、过60～200目筛，得牛肝菌干粉；(2)在0～4℃下，按照重量体积比为1∶10～20的比例向步骤(1)所得牛肝菌干粉中加入磷酸缓冲液，震荡混匀，得混合液；所述的磷酸缓冲液为20～30mmol/L，pH7.0～8.0；(3)将步骤(2)所得混合液在0～4℃、10000～12000rpm下离心20～30min；弃沉淀，收集上清液，即为牛肝菌提取物。2 、按照权利要求1所述的牛肝菌提取物，其特征在于所述的牛肝菌是指 黑牛肝菌或黄牛肝菌。3 、权利要求1所述的牛肝菌提取物的制备方法，包括如下步骤(1) 将牛肝菌在30...

【专利技术属性】
技术研发人员：严红，李兴红，赵素芳，周莹，黄金宝，林秀敏，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]