The invention provides a method of rapid extraction separation by countercurrent chromatography is the core of the extraction process is as follows: sirolimus, sirolimus - extraction, decolorizing fermentation mycelia, high speed countercurrent chromatography separation, drying. The present invention adopts countercurrent chromatography separation technology to replace the multiple chromatography steps of traditional extraction process, and uses the extraction and counter current combination, a single countercurrent separation to obtain the product of rapamycin with the purity near 90%. Compared with the traditional extraction process of rapamycin is relatively complex, the mycelium of crude extract by high speed countercurrent chromatography separation method has simple and convenient process route, suitable for large-scale amplification, rapid separation from fermentation liquid was prepared with high added value of rapamycin monomer. The invention has the advantages of high yield, simple extraction steps, saving solvent, etc., and can be applied in industrial actual enlargement production.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
,具体涉及一种从发酵液中快速分离提取西罗莫司的方 法。
技术介绍
西罗莫司是含大环三稀内酯类化合物,分子结构如(I),由吸水链霉菌发酵生产, 是一种具有抗真菌、抗增殖和抗肿瘤活性的新型强效免疫抑制剂。权利要求1. ,其步骤如下(1)西罗莫司发酵菌丝体取西罗莫司发酵液进行过滤或离心分离,去除发酵上清液, 得西罗莫司菌丝体;(2)萃取、脱色采用丙酮、甲醇或乙醇溶剂提取菌丝体1-3次,萃取液进一步用乙酸乙 酯进行萃取广3次,用活性炭脱色,减压浓缩后得到西罗莫司粗提物;(3)高速逆流色谱分离高速逆流色谱仪采用上海同田生物技术有限公司生产的 TBE-300A型、TBE-1000A或TBE-5000A型,分离方法为以正己烷-乙酸乙酯_乙醇_水按体 积比例(圹9) -(3飞)44、)- (3^7)混合为两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相, 在流速2 5 mL/min,转速600 1000 r/min,检测波长为观0 nm条件下,取西罗莫司粗提物 5(T250mg溶解于下相中,进样,收集西罗莫司分离峰,得西罗莫司分离样品;(4)干燥将西罗莫司分离样品溶液进行减压浓缩后,冷冻干燥,得到纯度较高的白色 西罗莫司样品粉末。全文摘要本专利技术提出一种以逆流色谱为核心的西罗莫司快速分离提取方法,其提取流程如下西罗莫司发酵菌丝体——萃取、脱色——高速逆流色谱分离——干燥。本专利技术采用逆流色谱分离技术,取代传统提取工艺的多次层析的步骤,采用萃取和逆流相结合,一次逆流分离可以得到纯度接近90%的雷帕霉素产品。相对复杂的雷帕霉素传统提取工艺相比,采用发酵 ...
【技术保护点】
一种从发酵液中分离提取西罗莫司的方法,其步骤如下:(1)西罗莫司发酵菌丝体:取西罗莫司发酵液进行过滤或离心分离,去除发酵上清液,得西罗莫司菌丝体;(2)萃取、脱色:采用丙酮、甲醇或乙醇溶剂提取菌丝体1-3次,萃取液进一步用乙酸乙酯进行萃取1~3次,用活性炭脱色,减压浓缩后得到西罗莫司粗提物;(3)高速逆流色谱分离:高速逆流色谱仪采用上海同田生物技术有限公司生产的TBE-300A型、TBE-1000A或TBE-5000A型,分离方法为以正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水按体积比例(4~9)-(3~6)-(4~8)-(3~7)混合为两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,在流速2~5mL/min,转速600~1000r/min,检测波长为280nm条件下,取西罗莫司粗提物50~250mg溶解于下相中,进样,收集西罗莫司分离峰,得西罗莫司分离样品;(4)干燥:将西罗莫司分离样品溶液进行减压浓缩后,冷冻干燥,得到纯度较高的白色西罗莫司样品粉末。
【技术特征摘要】
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