一种弧菌BS02的培养基及其制备方法。涉及微生物培养基，提供一种适合于培养弧菌BS02，可显著提高其细胞生物量和杀藻活性物质产量的培养基。将胰蛋白胨、酵母粉、葡萄糖、NaCl、MgSO4·7H2O、KCl、K2HPO4·3H2O、CaCl2·2H2O、Fe2(SO4)3加入蒸馏水中定容至1L，灭菌后即得弧菌BS02的培养基。以LB培养基为基础培养基，考察了培养基组分和添加量对弧菌BS02摇瓶培养的影响，并利用Plackett-Burman(PB)设计法和响应面优化设计法对培养基进行优化，开发出了一个适合高密度培养弧菌BS02的复合培养基。
Culture medium for Vibrio BS02 and preparation method thereof
Culture medium for Vibrio BS02 and preparation method thereof. The invention relates to a culture medium for microorganisms, and provides a culture medium suitable for culturing Vibrio BS02, which can significantly increase the cell biomass and the production of the algae killing active substances. The peptone, yeast powder, glucose, NaCl, MgSO4, 7H2O, KCl, K2HPO4, 3H2O, CaCl2, 2H2O and Fe2 (SO4) 3 were added into distilled water and fixed to 1L. After sterilization, the culture medium of Vibrio BS02 was obtained. As basic medium LB, investigated the effect of medium composition and amount of Vibrio BS02 in shake flask, and the use of Plackett-Burman (PB) design method and response surface optimization design were conducted to optimize the culture medium, developed a culture of Vibrio BS02 suitable for high density composite medium.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物培养基，尤其涉及一种弧菌BS02的培养基及其制备方法。
技术介绍
随着现代工业化的快速发展和人口的增多，大量的工农业废水和生活污水不经任何处理直接排放到海洋中，引起海洋水体富营养化加剧，赤潮频繁发生(1、Hallegraeff GM. A reviewof harmful algal blooms and their apparent global increase. Phycologia. 1993,32 :79-99)。有害赤潮已成为全球性的海洋灾害，严重制约了沿海经济的发展，破坏海洋生态环境和威胁人类健康，因而如何有效的防治赤潮成为当前国内外急需解决的难题。在海洋生态系统中，微生物在海洋生物多样性、海洋生物丰度及海洋循环系统中占据重要的地位。海洋微生物在赤潮生消的过程中所扮演的重要角色也越来越受到相关研究人员的关注。研究报道较多的是杀藻细菌通过分泌胞外杀藻活性物质杀藻，细菌可以通过分泌胞外物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、抗生素、羟胺和含氮化合物等杀死藻细胞 (2、Amaro AM, Fuentes MS, Ogalde SR, et al.Identification and characterization of potentially algal-lytic marinebacteria strongly associated with the toxic dinoflagellate Alexandrium catenella. J EukaryotMicrobiol,2005,52 (3) 191-200)。目前，利用杀藻细菌控制赤潮的研究还处于起步阶段，而且赤潮灾害具有复杂性和多样性的特点，必须在了解杀藻细菌的杀藻机制的基础上进一步优化其发酵条件，从而生产高效的杀藻剂。目前，对大规模发酵生产杀藻物质进行杀藻正处于初始阶段，因此须对杀藻微生物的发酵条件进行优化，以及对该培养条件进行放大，从而达到工业生产应用级别，为今后应用微生物杀藻打下一个坚实的基础。微生物发酵是一个极其复杂的生物过程，涉及到许多相互影响的因素，产物生物合成水平除受微生物内部代谢机理、调控机制等影响外，适宜的培养基配方成为微生物发酵的关键因素，而一般的培养基种类多且各成分的相互作用复杂，因此，培养基的优化工作显得尤为重要。目前比较成熟的优化培养基的方法有Plackett-Burman(PB) 设计法、单因素法、正交设计法、均勻设计法、响应面优化设计法等。人们努力寻找一种试验次数少、周期短，求得的回归方程精度高、能研究因素间交互作用的回归分析方法。 Plackett-Burman(PB)设计法和响应面优化设计法能减少实验的次数，很好的拟合因素与响应间的全局函数关系，有助于快速建模，缩短优化时间和提高应用可信度。Plackett-Burman (PB)设计法是一种两水平的试验设计方法，它试图用最少试验次数达到使因素的主效果得到尽可能精确的估计，适用于从众多的考察因素中快速有效地筛选出最为重要的几个因素，供进一步研究用(3、Xia Li, Tongcheng Xu, Xiaohang Ma et al. Optimiz ationof culture conditions for production of cis-epoxysuccinic acid hydrolase using response surfacemethodology. Bioresource Technology. 2008,99,35391-5396)。PB方法主要通过对每个因子取两水平来进行分析，通过比较各个因子两水平的差异与整体的差异来确定因子的显著性。筛选试验设计不能区分主效应与交互作用的影响，但对显著影响的因子可以确定出来，从而达到筛选的目的，避免在后期的优化试验中由于因子数太多或部分因子不显著而浪费试验资源。响应曲面分析法(response surface analysis, RSA)是一种寻找多因素系统中最佳条件的数学统计方法，是数学方法和统计方法结合的产物，它可以用来对人们受多个变量影响的响应问题进行数学建模与统计分析， 并可以将该响应进行优化，其目的是优化这个响应，确定系统的最优进行条件或确定因素空间中满足进行规范的区域。响应面优化设计法目前已成为降低成本、优化加工条件的一种有效方法，广泛地应用于农业、生物、食品、化学等领域(4、李铭，杨亚力，杨顺楷.响应面法优化固定粘红酵母细胞条件及生物转化制L-苯丙氨酸.应用与环境生物学报.2010， 16(2) =279-284)。其中最常用的是Box-Behnken设计法(BBD)和中心组合设计法(Central composite design, CCD)。其中，与中心复合试验相比，Box-Behnken试验设计不存在轴向点，因而在实际操作时其水平设置不会超出安全操作范围，并且在因素数相同时比中心复合设计所需的试验次数少。Box-Behnken设计法可以进行因素数在3 7个范围内的试验， 试验次数一般为15 62次。通过将上述主要适用范围不同的优化设计进行合理的联用可大大加快目标最优值的获得。目前较为常用的是Plackett-Burman(PB)设计法和响应面优化设计法的联用，可通过摇瓶验试先用PB设计法从多种培养基中确定重要因素，然后用响应面优化设计法得到个重要因素的最佳水平值(5、褚以文.微生物培养基优化方法及其OPTI优化软件.国外医药抗生素分册，1999，2(K2) :58-66) 0这两种方法的联用能减少实验的次数，很好的拟合因素与响应间的全局函数关系，有助于快速建模，缩短优化时间和提高应用可信度。其基本思路为通过Plackett-Burman (PB)法筛选出主要的影响因素，然后通过最陡爬坡实验快速寻找最优区域，然后利用区域中心点进行中心组合设计法(CCD)或 Box-Behnken设计法(BBD)建立回归方程，最后对方程求极值得到最优组合。周海鸥等人应用PB设计法对影响桑黄发酵的培养基组成进行筛选，再采用中心组合设计法(CCD)或 Box-Behnken设计法(BBD)结合响应面对影响菌丝得率的关键因素最佳水平进行了深入研究，并通过二次方程回归求解得到最优化条件。朱会霞等人(6、朱会霞，孙金旭.Nisin液体发酵工艺条件的响应面分析优化.中国乳品工业.2009，37 (8) 31-34)应用PB设计法对影响乳链菌肽液体发酵培养基组分进行了筛选，然后采用最陡爬坡实验逼近3个关键因素的最大响应区域，找到了最优化的水平。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种适合于培养弧菌BS02 (Vibrio sp. BS02)，可显著提高其细胞生物量和杀藻活性物质产量的弧菌BS02的培养基。本专利技术的另一目的在于提供弧菌BS02(Vibrio sp. BS02)的培养基的制备方法。所述弧菌BS02 (Vibrio sp. BS02)已于2010年09月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为中国武汉，武汉大学(邮编430072)，保藏中心保藏编号为CCTCC N0 M2010217。所述弧菌BS02 (Vibrio sp. BS02)是一种杀藻菌。4所述弧菌BS02的培本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种弧菌ＢＳ０２的培养基，其特征在于所述弧菌ＢＳ０２已于２０１０年０９月０３日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏中心保藏编号为ＣＣＴＣＣ ＮＯ：Ｍ２０１０２１７；所述弧菌ＢＳ０２的培养基的组成是在１Ｌ的蒸馏水中含有：胰蛋白胨１．５～２．７ｇ；酵母粉 ０．７５～２．２５ｇ；葡萄糖 ０．５～１．０ｇ；ＮａＣｌ ２０～３０ｇ，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０．１～０．３ｇ；ＫＣｌ１～３ｇ；ＫＢｒ ０．１～０．５ｇ；Ｋ２ＨＰＯ４·３Ｈ２Ｏ ０．０７～０．２１ｇ；ＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ ０．２５～１．０ｇ；Ｆｅ２（ＳＯ４）３ ０．０２～０．０４ｇ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郑天凌，安新丽，傅丽君，田蕴，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：92
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