和厚朴酚在制备抗肿瘤靶点药物中的用途制造技术

本发明专利技术提供和厚朴酚在制备抗肿瘤靶点药物中的用途，该和厚朴酚英文名为ｈｏｎｏｋｉｏｌ，ＣＡＳ　　ｎｕｍｂｅｒ：３５３５４－７４－６，分子量：２６６．３３，化学命名为：３，５’－ｄｉａｌｌｙｌ－４，２’－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｂｉｐｈｅｎｙｌ，分子式为Ｃ↓［１８］Ｈ↓［１８］Ｏ↓［２］，对人体毒性小，本发明专利技术制备的和厚朴酚药物包括制剂允许的药物赋形剂或载体。本发明专利技术可制备用于针对肿瘤的多个特异性靶点包括ＨＩＦ－１，ＶＥＧＦ，ｉＮＯＳ，ＨＳＰ７０，Ｂｃｌ－ｘＬ，Ｂｉｄ来治疗肿瘤的药物。本发明专利技术的实验证明和厚朴酚可有效抑制肿瘤，且毒性低，可改善目前所用的临床抗肿瘤药物对人体都有较大的毒性的不足，具有制备临床抗肿瘤靶点药的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术属天然化合物的用途，涉及从植物提取的和厚朴酚的新用途，尤其涉及和厚朴酚在制备抗肿瘤多个特异性靶点药物中的用途。
技术介绍
近年来，抗肿瘤药物的研制已从过去的传统的单纯的细胞毒化疗药转向靶向药物。靶向药物的最大优点是比传统化疗药毒性小和疗效好。肿瘤细胞内产生的低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)是近年来被明确的抗肿瘤靶点，原因如下肿瘤细胞产生的HIF-1α有多种作用，使肿瘤细胞不易发生凋亡、在肿瘤细胞的多条细胞信号通路起重要作用导致肿瘤细胞生长旺盛，促进肿瘤转移，可导致肿瘤内血管增生、等，临床表现为预后差。肿瘤细胞产生的血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growthfactor，VEGF)是当前公认的治疗肿瘤的靶点。肿瘤细胞产生VEGF是肿瘤血管生成的关键因子，阻断肿瘤细胞的VEGF表达或功能都可有效地治疗肿瘤。最近，美国的Genetech公司的产品Avastin已进入临床III期试验。Avastin为一个抗血管内皮细胞生长因子的单克隆抗体，若通过临床III期，也将成为第一个抗肿瘤VEGF的靶点药。可诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)是另一治疗肿瘤的靶点。细胞内的一氧化氮(NO)主要由iNOS催化产生。NO在肿瘤的发生发展中的功能可概括为(1)激活多条肿瘤细胞生长相关的细胞通路，使肿瘤细胞恶性生长；(2)使肿瘤细胞抗凋亡；(3)刺激低氧诱导因子-1和血管内皮细胞生长因子的合成；(4)促进肿瘤向恶性程度进化和转移；(5)抑制机体的肿瘤免疫功能。热休克蛋白70(heat shock protein 70，HSP70)与肿瘤细胞的生长密切相关，HSP70在肿瘤细胞中的高表达导致临床肿瘤的治疗和预后不佳。因此研发HSP70的靶向药是当前的一个方向。化疗是治疗肿瘤的一种主要手段，然而肿瘤化疗往往会因肿瘤的抗药性而失败。肿瘤化疗失败的原因之一是肿瘤细胞产生抗细胞凋亡的特性，如在肿瘤细胞内抗凋亡因子如Bcl-xL表达增加，而促凋亡因子如Bid表达减小，使得肿瘤细胞内的凋亡调控失去平衡。因此，当前的抗肿瘤药物的研究方向之一是通过调控肿瘤细胞内的凋亡来治疗肿瘤。和厚朴酚是从植物厚朴中提取的一种天然化合物。其化学结构如下 和厚朴酚在对其抗血栓、抗焦虑等体内实验时，证明能被胃肠道吸收，并具有体内滞留时间较长、没有明显毒副作用等特点。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供和厚朴酚在制备抗肿瘤靶点药物中的用途，该和厚朴酚英文名为honokiol，CAS number35354-74-6，分子量266.33，化学命名为3，5’-diallyl-4，2’-dihydroxybiphenyl，分子式为C18H18O2，对人体毒性小，本专利技术所述的肿瘤靶点是指低氧诱导因子-1(HIF-1)，血管内皮细胞生长因子(VEGF)，一氧化氮合成酶(iNOS)，热休克蛋白质70(HSP70)，调控细胞凋亡的因子如Bcl-2家族成员和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)家族成员。本专利技术所述的和厚朴酚与制剂允许的药物赋形剂或载体制成的制剂形式主要包括液体制剂、颗粒剂、片剂、冲剂、胶丸、胶囊、滴丸剂或注射剂。本专利技术的有益效果有(1)提出了和厚朴酚的新用途；(2)由于HIF-1，VEGF，iNOS，HSP70，Bcl-xL，Bid，caspase这些因子在肿瘤细胞生长、血管的生成、肿瘤转移等方面起至关重要的作用，因此和厚朴酚具有肿瘤靶点药的应用前景；(3)和厚朴酚可引起肿瘤细胞凋亡，具有制备临床抗肿瘤药的应用前景；(4)和厚朴酚毒性低，而目前所用的临床抗肿瘤药物对人体都有较大的毒性，因此可解决长期困绕抗肿瘤药毒性大的问题；(5)本专利技术用体内外实验证明和厚朴酚可有效抑制肿瘤。附图说明图1A为和厚朴酚对人结肠上皮癌细胞系RKO细胞内低氧诱导因子-1mRNA含量的影响。图1B为和厚朴酚对RKO细胞内低氧诱导因子-1mRNA含量影响的直方图。图2A为和厚朴酚对RKO细胞内低氧诱导因子-1蛋白质含量的影响。图2B为和厚朴酚对RKO细胞内低氧诱导因子-1蛋白质含量影响的直方图。图3A为和厚朴酚对RKO细胞内血管生长因子mRNA含量影响。图3B为和厚朴酚对RKO细胞内血管生长因子mRNA含量影响的直方图。图4为和厚朴酚对RKO细胞内血管生长因子蛋白质含量的影响。图5A为和厚朴酚对RKO细胞内一氧化氮合成酶的蛋白质含量的影响。图5B为和厚朴酚对RKO细胞内一氧化氮合成酶的蛋白质含量影响的直方图。图6A为和厚朴酚对RKO细胞内热休克蛋白70的mRNA含量的影响。图6B为和厚朴酚对RKO细胞内热休克蛋白70的mRNA含量影响的直方图。图7A为和厚朴酚对RKO细胞内热休克蛋白70的蛋白质含量的影响。图7B为和厚朴酚对RKO细胞内热休克蛋白70的蛋白质含量影响的直方图。图8为和厚朴酚对RKO细胞内Bcl-2和Bax的mRNA水平的影响。图9为和厚朴酚对RKO细胞内Bcl-xL和Bid的mRNA水平的影响。图8为和厚朴酚对RKO细胞内Bcl-2和Bax的蛋白质水平的影响。图9为和厚朴酚对RKO细胞内Bcl-xL和Bid的蛋白质水平的影响。图12为和厚朴酚对RKO细胞内caspase-3的表达的影响。图13为和厚朴酚对RKO细胞内caspase-7的表达的影响。图14为和厚朴酚对RKO细胞内caspase-9的表达的影响。图15为和厚朴酚作用于RKO细胞后，细胞内DNA呈梯带的电泳图。图16为和厚朴酚对荷人大肠癌RKO细胞异种移植物的Balb/C裸鼠的治疗作用。具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述。实施例1和厚朴酚对肿瘤细胞内低氧诱导因子-1(HIF-1)mRNA的抑制(1)实验材料细胞株大肠癌细胞株RKO来源于美国American Type CultureCollection(ATCC)公司。试剂和厚朴酚，中国药品与生物制品鉴定所；逆转录试剂盒(Promage，美国)，逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)试剂盒，热稳定DNA合成酶(Taq酶上海生工)。仪器培养瓶，培养板，二氧化碳培养箱，PCR仪，FCM仪。(2)实验方法细胞培养分组根据不同和厚朴酚浓度分为5组，分别以1、2、3、4、5表示。1组为对照；2组加氯化钴(CoCl2)(150μM)；3组CoCl2(150μM)+和厚朴酚0.1μg/ml；4组CoCl2(150μM)+和厚朴酚0.5μg/ml；5组CoCl2(150μM)+和厚朴酚1μg/ml。药物诱导RKO细胞2×104每孔接种于24孔板，每组3个复孔；用含10％小牛血清的RPIM1640培养基稀释和厚朴酚储存液(5mg/ml)，充分混匀，配成所需浓度，并以此更换细胞培养液；药物作用1小时后加入CoCl2(对照组除外)，使其终浓度为150μM，继续培养3小时。收集细胞，提取RNA或蛋白质，做相应的RT-PCR。RT-PCR收集细胞，弃去培养液，冰生理盐水洗3次后用RNA提取试剂Trizol(每孔400ul)提取细胞RNA(按Trizol试剂说明进行)。RNA逆转录成cDNA按逆转录试剂盒方案进本文档来自技高网...

【技术保护点】
和厚朴酚在制备抗肿瘤靶点药物中的用途，和厚朴酚，英文名为ｈｏｎｏｋｉｏｌ，ＣＡＳｎｕｍｂｅｒ：３５３５４－７４－６，分子量：２６６．３３，化学命名为：３，５’－ｄｉａｌｌｙｌ－４，２’－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｂｉｐｈｅｎｙｌ，分子式为Ｃ↓［ １８］Ｈ↓［１８］Ｏ↓［２］，肿瘤靶点是指低氧诱导因子－１、血管内皮细胞生长因子、氧化氮合成酶、热休克蛋白质－７０、细胞凋亡的相关蛋白。

【技术特征摘要】
1.和厚朴酚在制备抗肿瘤靶点药物中的用途，和厚朴酚，英文名为honokiol，CAS number35354-74-6，分子量266.33，化学命名为3，5’-diallyl-4，2’-dihydroxybiphenyl，分子式为C18H18O2，肿瘤靶点是指低氧诱导因子-1、血管内皮细胞生长因子、氧化氮合成酶、热休克蛋白质-70、细胞凋亡的相关蛋白。2.根据权利要求1所述的和厚朴酚在制备抗肿瘤靶点药物中的用途，其特征是在制备针对肿瘤细胞内低氧诱导因子-1来治疗肿瘤的药物中的应用。3.根据权利要求2所述的和厚朴酚在制备抗肿瘤靶点药物中的用途，其特征是在制备抑制肿瘤细胞内低氧诱导因子-1α的合成及其积聚的抗肿瘤药物中的用途。4.根据权利要求1所述的和厚朴酚在制备抗肿瘤靶点药物中的用途，其特征是在制备针对肿瘤细胞的血管内皮细胞生长因子来治疗肿瘤的药物中的用途。5.根据权利要求4所述的和厚朴酚在制备抗肿瘤靶点药物中的用途，其特征是在制备抑制肿瘤细胞内的血管内皮细胞生长因子的合成的抗肿瘤药物中的用途。6.根据权利要求1所述的和厚朴酚在制备抗肿瘤靶点药物中的用途，其特征是在制备针对肿瘤细胞的一氧化氮合成酶来治疗肿瘤的药物中的应用。7.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡汛，陈菲，徐栋，潘锵荣，顾影，王弢，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]