酶的混合物、高通量酶筛选板及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种酶的混合物，包含酶和缓冲盐。本发明专利技术还公开了高通量酶筛选板，该筛选板为孔板，其孔中放置有酶的混合物，该混合物包含酶和缓冲盐。本发明专利技术还公开了酶的混合物及高通量酶筛选板的应用。本发明专利技术酶的混合物，使酶催化反应的操作更加便利、高效。本发明专利技术的高通量酶筛选板，可以高效、便捷地针对某一底物进行高通量酶筛选，大大提高了效率，节约了成本。

Mixtures of enzymes, high throughput enzyme screening plates, and applications thereof

The invention discloses a mixture of enzymes, comprising enzymes and buffer salts. The present invention also discloses a high throughput enzyme screening plate, which is an orifice plate with a mixture of enzymes in the pores, comprising an enzyme and a buffer salt. The invention also discloses an enzyme mixture and the application of a high throughput enzyme screening plate. The enzyme mixture of the invention makes the operation of the enzyme catalysis reaction more convenient and efficient. The high throughput enzyme screening plate of the invention can efficiently and conveniently carry out high throughput enzyme screening for a substrate, thereby greatly improving the efficiency and saving the cost.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及酶工程
，尤其涉及一种酶的混合物、高通量酶筛选板及其应用。
技术介绍
化学工业的发展为人类带来了巨大的变革与利益，但同时也为人类的健康、社区安全以及生态环境带来了危害。随着全球性环境污染问题的日益加剧和能源、资源急剧减少，公众环境意识逐步提高，绿色化学逐渐成为21世纪的主题。基于绿色化学的准则，生物转化成为当前国际公认最绿色的化学转化技术之一。 生物转化具有一些化学方法无可比拟的优点，例如专一性强，选择性好，反应条件温和，环境友好。将生物转化应用于大规模工业生产，不但缓解环境问题，成本也会降低，产生显著的经济效益。酶催化生物转化是一种高选择性反应，不同种类的酶可作用于不同构型和不同种类的特定底物，从而达到定向转化的目的。正是由于酶的这一特点，针对某一底物就要进行酶的筛选。酶的筛选是决定一个项目成败的关键，但同时也是比较费时费力的工作，如能高效地进行酶的筛选，将大大提高效率，同时也会相应降低成本。已有研究人员对此关注，例如，Yazbeck等将酶预先放置于96孔板中做成预制板，然后保存，待使用时再自行加入缓冲液等其他辅助试剂及底物(Adv. Synth. Catal. 2003，；345(4) =524-532) ；Codeix公司也推出了酶筛选板，同时分别将缓冲液等各种辅助试剂配好，在使用时按该公司提供的比例进行混合。这些努力虽然一定程度上改善了酶筛选的效率，但操作不简便，仍然不能高效地进行酶筛选。酶催化反应过程中加入缓冲液是为了给酶提供一个适宜pH值的酸碱缓冲体系， 使酶发挥最大的作用，防止过酸或过碱而影响酶的活性。在传统工艺中，酶在用于催化反应之前的储存阶段，为了酶的稳定和保持活性，酶通常独立封装，直到催化反应时，再配制所需缓冲液和其它辅助试剂与酶混合。然而，现配制缓冲液和辅助试剂给酶催化反应的操作带来不便，尤其是进行高通量酶筛选时，由于近百个不同活性的酶所需的缓冲液及辅助试剂的种类及量都不同，分别给这些酶添加缓冲液及辅助试剂是一件十分繁琐和耗时的工作，使得酶筛选效率非常低下。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种酶的混合物，该酶的混合物使酶催化反应的操作更加便利、高效。此外，还要提供一种高通量酶筛选板，该酶筛选板可以高效、便捷地针对某一底物进行高通量酶筛选。为了解决上述技术问题，本专利技术通过如下技术方案实现在本专利技术的一个方面，提供了一种酶的混合物，包含酶和缓冲盐。所述酶的浓度为0. lg/Ι 50g/l，所述缓冲盐的pH值为5. 0 9. 0，其浓度为 IOmM 500mM。所述酶包括酮还原酶、水解酶、或转氨酶等各种用于生物转化的酶类；所述缓冲盐包括磷酸、Tri-HCl或其他常用缓冲盐类。对于氧化还原酶、转移酶、或某些裂解酶等，在催化相应反应时，需要NAD(P)+、 NAD (P) H或PLP等辅酶的参与。而这些辅酶参加反应后，如果没有辅酶再生系统使之再生， 一旦辅酶完全被消耗，酶反应就会停止，因此，还需要加入辅酶再生系统，如葡萄糖脱氢酶 (GDH)和D-葡萄糖、或甲酸脱氢酶(FDH)和甲酸铵等。优选的，对于氧化还原酶、转移酶、或某些裂解酶等，所述酶的混合物还包含辅酶和辅酶再生系统。辅酶的浓度为0. Olg/Ι 2. Og/Ι，所述辅酶再生系统的浓度为0. 5g/l 100g/l。在本专利技术的另一方面，提供了一种高通量酶筛选板，该筛选板为孔板，所述筛选板的孔中放置有酶的混合物，该混合物包含酶和缓冲盐。所述酶的浓度为0. lg/Ι 50g/l，所述缓冲盐的pH值为5. 0 9. 0，其浓度为 IOmM 500mM。优选的，对于筛选氧化还原酶、转移酶、或某些裂解酶等，所述酶的混合物还包含辅酶和辅酶再生系统。辅酶的浓度为0. Olg/Ι 2. Og/Ι，所述辅酶再生系统的浓度为0. 5g/ 1 100g/l。在本专利技术的另一方面，还提供了一种上述高通量酶筛选板的制备方法，包括以下步骤分别配制实验缓冲液和各酶浓缩液；将实验缓冲液与各浓缩液按比例混合；将上述混合液分装至筛选板的各孔；去除筛选板孔中混合液的水分后，低温保存。对于需要辅酶和辅酶再生系统的酶筛选板，在将实验缓冲液与各浓缩液按比例混合之前，还包括步骤分别配制辅酶和辅酶再生系统的浓缩液。在本专利技术的另一方面，还提供了一种上述酶的混合物在制备催化反应的酶产品中的应用。在本专利技术的另一方面，还提供了一种上述高通量酶筛选板在制备筛选酶的产品中的应用。本专利技术酶的混合物，使酶催化反应的操作更加便利、高效。本专利技术的高通量酶筛选板，可以高效、便捷地针对某一底物进行高通量酶筛选，大大提高了效率，节约了成本。本专利技术高通量酶筛选板，具有适用性广，稳定性好，使用方法简便、经济等特点，可广泛应用于科研、医药、精细化工等多个行业。具体实施例方式为了使酶催化反应的操作更加便利、高效，本专利技术研制出一种酶的混合物，该混合物包含酶和缓冲盐。其中，酶的浓度为0. lg/Ι 50g/l，缓冲盐的PH值为5. 0 9. 0，缓冲盐的浓度为IOmM 500mM。对于氧化还原酶、转移酶、或某些裂解酶等，酶的混合物还包含辅酶和辅酶再生系统。辅酶的浓度为0. Olg/Ι 2. Og/Ι，辅酶再生系统的浓度为0. 5g/l 100g/l。辅酶包括NAD(P)+、NAD(P)H或PLP等，辅酶再生系统包括葡萄糖脱氢酶(⑶H)和 D-葡萄糖、或甲酸脱氢酶(FDH)和甲酸铵等。本专利技术还提供了一种高通量酶筛选板，该筛选板为孔板，孔中放置有酶的混合物， 该混合物包含酶和缓冲盐。酶的浓度为0. lg/Ι 50g/l，缓冲盐的pH值为5. 0 9. 0，缓冲盐的浓度为IOmM 500mM。对于筛选氧化还原酶、转移酶、或某些裂解酶等，酶的混合物还包含辅酶和辅酶再生系统。辅酶的浓度为0. Olg/Ι 2. Og/Ι，辅酶再生系统的浓度为0. 5g/ 1 100g/l。本专利技术高通量酶筛选板的制备方法，包括以下步骤分别配制实验缓冲液和各酶浓缩液；将实验缓冲液与各浓缩液按比例混合；将上述混合液分装至筛选板的各孔；在不损害酶活的前提下去除筛选板孔中混合液的水分后，低温保存。对于需要辅酶和辅酶再生系统的酶筛选板，在将实验缓冲液与各浓缩液按比例混合之前，还包括步骤分别配制辅酶和辅酶再生系统的浓缩液。在实际生产过程中，去除筛选板孔中混合液的水分后，还要进行包装、贴标签步骤，然后低温保存。本专利技术高通量酶筛选板的使用方法如下(以反应规模为0. 1ml，加入底物浓度为 lg/Ι为例)1.在酶筛选板各孔中加入90 μ 1去离子水，建议在使用之前加，以免筛选板中的辅酶变坏；2.制备底物母液，将10mg底物溶于Iml去离子水中，如果底物不溶于水，可将底物溶于有机溶剂中(例如，DMS0、甲醇、乙腈、异丙醇等)；3.将10 μ 1底物母液分别加入到酶筛选板各孔中开始筛选反应；4.将酶筛选板放置于恒温并有一定搅拌速度的培养箱或摇床中反应M 72小时；5.根据已建立的分析方法终止反应，如用于正相HPLC或气相GC分析，加入0. Iml 乙酸乙酯或MTBE ；如用于反相HPLC分析，则加入0. Iml乙腈。震荡后离心，将有机相或乙腈水溶液取出，分析转化率及选择性。 下面通过实施例对本专利技术作进一步详细的说明。实施例本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种酶的混合物，其特征在于，包含酶和缓冲盐。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邱贵森，苏金环，
申请(专利权)人：尚科生物医药上海有限公司，
类型：发明
国别省市：31