用于治疗病毒感染和异常细胞增殖的修饰核苷类化合物制造技术

本发明专利技术公开了用于治疗宿主，包括动物，尤其是人中黄病毒科（包括ＢＶＤＶ和ＨＣＶ）、正粘病毒科（包括甲型和乙型流感病毒）或副粘病毒科（包括ＲＳＶ）感染或涉及异常细胞增殖的病症的组合物和方法，所述组合物和方法使用的是通式（Ｉ）－（ＸＸＩＩＩ）核苷或其可药用盐或前药。本发明专利技术还提供了使用实时聚合酶链反应（“ＴＲ－ＰＣＲ”）来定量测定宿主中病毒负载量，特别是ＢＶＤＶ、ＨＣＶ或西尼罗河病毒的病毒负载量的有效方法。此外，本发明专利技术还公开了可发出与样本中存在的病毒量成比例的荧光的探针分子。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术包括用于治疗黄病毒科(Flaviviridae)、正粘病毒科(Orthomyxoviridae)、副粘病毒科(Paramyxoviridae)感染和异常细胞增殖的化合物和方法。本申请要求下列美国临时申请的优先权其中一件申请号为60/241,488，于2000年10月18日提交；另一件申请号为60/282,156，于2001年4月6日提交。
技术介绍
黄病毒科黄病毒科是一组正单链RNA病毒，其基因组大小为9-15kb。它们是约40-50nm的有包膜病毒。国际病毒分类学委员会给出了黄病毒科分类的概述。黄病毒科由3个属组成。1.黄病毒属.该属包括登革热病毒群(登革热病毒、1型登革热病毒、2型登革热病毒、3型登革热病毒、4型登革热病毒)、日本脑炎病毒群(Alfuy病毒、日本脑炎病毒α、Kookaburra病毒、Koutango病毒、Kunjin病毒、澳洲墨莱溪谷(Murray Valley)脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、Stratford病毒、Usutu病毒、西尼罗河病毒)、Modoc病毒群、Rio Bravo病毒群(Apoi病毒、Rio Brovo病毒、Saboya病毒)、恩塔亚病毒群、蜱传脑炎群(蜱传脑炎病毒)、Tyuleniy病毒群、乌干达S病毒群和黄热病病毒群。除了这些主要群以外，还有某些未分类的其他黄病毒。2.Hepaciviruses.该属仅含有一类病毒，即丙型肝炎病毒(HCV)，其由多种分枝、型和亚型组成。3.瘟病毒属.该属包括牛病毒性腹泻病毒-2(BVDV-2)、1型瘟病毒(包括BVDV)、2型瘟病毒(包括猪霍乱病毒)和3型瘟病毒(包括Border病病毒)。人类中最重要的黄病毒科病毒感染之一是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的。这是病毒性肝炎的第二号主要原因，据估计全球有一亿七千万携带者(世界卫生组织；丙型肝炎全球流行，WeeklyEpidemiological Record，1997，72，341)，其中在美国有三百九十万(疾病控制中心；未公布的数据，http://www.cdc.gov/ncidod/diseases/hepatitis/heptab3.htm)。黄病毒科病毒的基因组结构具有很多共有特征。丙型肝炎病毒(HCV)基因组经常被用作模型。HCV是小的有包膜的病毒，在核壳内具有~9.6kb的正单链RNA基因组。该基因组含有一个开放读框(ORF)，其编码刚好3000个以上氨基酸的多蛋白，该蛋白裂解以产生成熟的结构和非结构病毒蛋白。ORF的旁侧是长度为几百个核苷酸的5′和3′未翻译区域(NTRs)，该区域对于RNA翻译和复制很重要。翻译的多蛋白含有结构核(C)和在N-末端的包膜蛋白(E1、E2、p7)，之后是非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)。成熟的结构蛋白是通过被宿主信号肽酶裂解而产生的(参见Hijikata，M.等人.Proc.Nat.Acad.Sci.，USA，1991，88，5547；Hussy，P.等人.Virology，1996，224，93；Lin，C.等人.J.Virol.，1994，68，5063；Mizushima，H.等人.J.Virol.，1994，68，2731；Mizushima，H.等人.J.Virol.，1994，68，6215；Santolini，E.等人.J.Virol.，1994，68，3631；Selby，M.J.等人.Virology，1994，204，114和Grakoui，A.等人.Proc.Nat.Acad.Sci.，USA，1993，90，10538)。NS2与NS3之间的连接被NS2/NS3蛋白酶自催化地裂解(参见Hijikata，M.等人.J.Virol.，1993，67，4665和Bartenschlager，R.等人.J.Virol.，1994，68，5045)，而剩余的4个连接被与NS4A复合的NS3的N-末端丝氨酸蛋白酶域裂解(参见Failla，C.等人.J.Virol.，1994，68，3753；Lin，C.等人.J.Virol.，1994，68，8147；Tanji，Y.等人.J.Virol.，1995，69，1575和Tai，C.L.等人.J.Virol.，1996，70，8477)。NS3蛋白还含有NTP-依赖性解旋酶活性，其在复制期间解开双螺旋RNA。NS5B蛋白具有RNA-依赖性RNA聚合酶(RDRP)活性(参见Behrens，S.E.等人.EMBO J.，1996，15，12；Lohmann，V.等人.J.Virol.，1997，71，8416-8428和Lohmann，V.等人.Virology，1998，249，108)，这是病毒复制所必需的(Ferrari，E.等人.J.Virol.，1999，73，1649)。在此需要强调的是，与HBV或HIV不同，没有DNA参与HCV的复制。最近，用鸟苷5′-一磷酸(GMP)、5′-二磷酸(GDP)、5′-三磷酸(GTP)以及2′-脱氧和2′，3′-二脱氧鸟苷的5′-三磷酸(分别是dGTP和ddGTP)进行了使用NS5B-HCV-RDRP的底物特异性的体外实验。该作者声称，HCV-RDRP对核糖核苷5′-三磷酸有严格的特异性，并需要2′-和3′-OH基团(Lohmann；Virology，108)。他们的实验表明，存在2′-和3′-取代基是核苷5′-三磷酸与HCV-RDRP相互作用以及起底物或抑制剂作用的必要条件。已经鉴定出的具有抗丙型肝炎黄病毒活性的抗病毒剂的实例包括1.干扰素和利巴韦林(Battaglia，A.M.等人.Ann.Pharmacother.2000，34，487；Berenguer，M.等人.Antivir.Ther.1998，3(Suppl.3)，125)；2.基于底物的NS3蛋白酶抑制剂(Attwood等人.PCT WO 98/22496，1998；Attwood等人.Antiviral Chemistry and Chemotherapy1999，10，259；Attwood等人.德国专利公开DE 19914474；Tung等人.PCT WO98/17679)，包括α-酮基酰胺类和肼基脲类，以及末端是亲电体例如硼酸或膦酸酯的抑制剂(Llinas Brunet等人.PCT WO 99/07734)；3.非基于底物的抑制剂例如2，4，6-三羟基-3-硝基-苯甲酰胺衍生物(Sudo K.等人.，Biochemical and Biophysical ResearchCommunications，1997，238，643和Sudo K.等人.Antiviral Chemistryand Chemotherapy1998，9，186)，包括RD3-4082和RD3-4078，前者在酰胺上被具有14个碳的链取代，后者具有对苯氧基苯基；4.在用NS3/4A融合蛋白和NS5A/5B底物进行的反相HPLC测定中表现出相关抑制作用的噻唑烷衍生物(Sudo K.等人，Antiviral Research1996，32，9)，尤其是具有被长烷基链取代的稠合肉桂酰基部分的化合物RD-1-6250、RD4 6205和RD4 6本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗或预防表现出黄病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或异常细胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式（Ⅰ）或（Ⅱ）化合物：　　　　＊＊＊　　　　或其β－Ｌ对映体或其可药用盐，其中　　　　每个Ｄ是氢、烷基、酰基、一磷酸、二磷酸、三磷酸、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磷脂或氨基酸；　　　　每个Ｗ↑［１］和Ｗ↑［２］独立地为ＣＨ或Ｎ；　　　　每个Ｘ↑［１］和Ｘ↑［２］独立地为氢、卤素（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ或Ｉ）、ＮＨ↓［２］、ＮＨＲ↑［４］、ＮＲ↑［４］Ｒ↑［４］′、ＮＨＯＲ↑［４］、ＮＲ↑［４］ＮＲ↑［４］′Ｒ↑［４］″、ＯＨ、ＯＲ↑［４］、ＳＨ或ＳＲ↑［４］；　　　　每个Ｙ↑［１］是Ｏ、Ｓ或Ｓｅ；　　　　每个Ｚ是ＣＨ↓［２］或ＮＨ；　　　　每个Ｒ↑［１］和Ｒ↑［１］′独立地为氢、低级烷基、低级链烯基、低级炔基、芳基、烷基芳基、卤素（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ或Ｉ）、ＮＨ↓［２］、ＮＨＲ↑［５］、ＮＲ↑［５］Ｒ↑［５］′、ＮＨＯＲ↑［５］、ＮＲ↑［５］ＮＨＲ↑［５］′、ＮＲ↑［５］ＮＲ↑［５］′Ｒ↑［５］″、ＯＨ、ＯＲ↑［５］、ＳＨ、ＳＲ↑［５］、ＮＯ↓［２］、ＮＯ、ＣＨ↓［２］ＯＨ、ＣＨ↓［２］ＯＲ↑［５］、ＣＯ↓［２］Ｈ、ＣＯ↓［２］Ｒ↑［５］、ＣＯＮＨ↓［２］、ＣＯＮＨＲ↑［５］、ＣＯＮＲ↑［５］Ｒ↑［５］′或ＣＮ；　　　　每个Ｒ↑［２］和Ｒ↑［２］′独立地为氢或卤素（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ或Ｉ）、ＯＨ、ＳＨ、ＯＣＨ↓［３］、ＳＣＨ↓［３］、ＮＨ↓［２］、ＮＨＣＨ↓［３］、ＣＨ＝ＣＨ↓［２］、ＣＮ、ＣＨ↓［２］ＮＨ↓［２］、ＣＨ↓［２］ＯＨ、ＣＯ↓［２］Ｈ；　　　　每个Ｒ↑［３］和Ｒ↑［３］′独立地为氢或卤素（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ或Ｉ）、ＯＨ、ＳＨ、ＯＣＨ↓［３］、ＳＣＨ↓［３］、ＮＨ↓［２］、ＮＨＣＨ↓［３］、ＣＨ↓［３］、Ｃ↓［２］Ｈ↓［５］、ＣＨ＝ＣＨ↓［２］、ＣＮ、ＣＨ↓［２］ＮＨ↓［２］、ＣＨ↓［２］ＯＨ、ＣＯ↓［２］Ｈ；　　　　每个Ｒ↑［４］、Ｒ↑［４］′、Ｒ↑［４］″、Ｒ↑［５］、Ｒ↑［５］′和Ｒ↑［５］″独立地为氢、低级烷基、低级链烯基、芳基或芳基烷基例如未取代或取代的苯基或苄基；　　　　条件是：对于通式（Ⅰ）或（Ⅱ）的核苷，Ｒ↑［２］和Ｒ↑［２］′当中至少有一个是氢，且Ｒ↑［３］和Ｒ↑［３］′当中至少有一个是氢。...

【技术特征摘要】
US 2000-10-18 60/241,488;US 2001-4-6 60/2821561.一种治疗或预防表现出黄病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或异常细胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(I)或(II)化合物 或其β-L对映体或其可药用盐，其中每个D是氢、烷基、酰基、一磷酸、二磷酸、三磷酸、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磷脂或氨基酸；每个W1和W2独立地为CH或N；每个X1和X2独立地为氢、卤素(F、Cl、Br或I)、NH2、NHR4、NR4R4′、NHOR4、NR4NR4′R4″、OH、OR4、SH或SR4；每个Y1是O、S或Se；每个Z是CH2或NH；每个R1和R1′独立地为氢、低级烷基、低级链烯基、低级炔基、芳基、烷基芳基、卤素(F、Cl、Br或I)、NH2、NHR5、NR5R5′、NHOR5、NR5NHR5′、NR5NR5′R5″、OH、OR5、SH、SR5、NO2、NO、CH2OH、CH2OR5、CO2H、CO2R5、CONH2、CONHR5、CONR5R5′或CN；每个R2和R2′独立地为氢或卤素(F、Cl、Br或I)、OH、SH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、CH＝CH2、CN、CH2NH2、CH2OH、CO2H；每个R3和R3′独立地为氢或卤素(F、Cl、Br或I)、OH、SH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、CH3、C2H5、CH＝CH2、CN、CH2NH2、CH2OH、CO2H；每个R4、R4′、R4″、R5、R5′和R5″独立地为氢、低级烷基、低级链烯基、芳基或芳基烷基例如未取代或取代的苯基或苄基；条件是对于通式(I)或(II)的核苷，R2和R2′当中至少有一个是氢，且R3和R3′当中至少有一个是氢。2.权利要求1的方法，其中式(I-a)的β-D核苷选自一种下列化合物或其β-L对映体或其可药用盐X1Y1R1R1′R2R2′R3R3′NH2O H H OHH H OHNH2O H H OHH H INH2O H H OHH H ClNH2O H H OHH H BrNH2O H H OHH H S-CNNH2O H H OHH H N3NH2O H H H Cl H OHNH2O H H H Br H OHNH2O H H H OH BrHNH2O H H H OH H HNH2O H H H OH O-Ms HNH2O H H H OH O-Ts HNH2O H H O-Ms H H OHNH2O H H ClH H OHNH2O D D OHH H OHNH2O F H OHH H OHNH2O F H H OH H OHNH2O F H H OH H HNH2O F H H OH ClHNH2O F H H OH BrHX1Y1R1R1′R2R2′R3R3′NH2O F H H Cl H OHNH2O F H H OH O-TsHNH2O F H H OH O-MsHNH2O ClH H OH O-MsHNH2O BrH H OH O-MsHNH2O BrH H OH O-TsHNH2O BrH H OH Cl HNH2O BrH H OH H OHNH2O BrH OHHH OHNH2O I H H OH O-MsHNH2O I H H OH Br HNH2O I H H OH O-TsHNH2O I H H Cl H OHNH2O I H BrHH OHNH2O OHH OHHH OHNH2O NH2H H OH H OHNH2O CH3H H OH Cl HNH2NHH H OHHH OHNH2S H H H Se-苯基 H HNH-(2-Ph-Et) O H H OHHH OHNH-COCH3O H H OHHH OHNH-NH2O H H OHHH OHNH-NH2O F H OHHH OHNH-NH2O CH3H H OH H OHNH-OH O H H H OH H OHNH-OH O F H H OH H OHNH-OH O Br H H OH H OHNH-OH O I H H OH H OHNH-OH O H H OHHH OHOH O OH H OHHH OHOH O NH2H H OH H OHX1Y1R1R1′R2R2′R3R3′OHO F H OHH H OHOHO F H H O-TsH OHOHO F H H O-MsH O-MsOHO F H H OH H OHOHO F H H OH H O-TsOHO F H H H H OHO-Et O H H H O-BzH O-BzS-CH3O H H H F H OHSHO H H H OH H OHSHO F H H OH H OHN3O H H H H H HNH-(2-Ph-Et) O H H H OH H OHOHO OHH H OH H OHOHO H H H OH H H3.权利要求1的方法，其中式(I-b)的β-D核苷选自一种下列化合物或其β-L对映体或其可药用盐X1X2W1R2R2′R3R3′OH NH2N H OH H OHOH NH2CHF H H OHNH-环己基 H CHH H H HNH2H CHH OH H FNH2H CHH H H HNH2NH2N H OH H OHNH2NH2CHH OH H OHCl H CHF H H HCl I CHH O-AcH O-AcCl H CHH OH H OHNH2H CHH OH H HX1X2W1R2R2′R3R3′ClHCHH OH H H4.权利要求1的方法，其中式(II-a)的β-D核苷选自一种下列化合物或其β-L对映体或其可药用盐X1Y1R1R1′R2R3NH-Bz-(m-NO2)O F H H HNH-Bz-(o-NO2)O F H H HNH2O F H F H5.权利要求1的方法，其中式(II-b)的β-D核苷选自一种下列化合物或其β-L对映体或其可药用盐X1X2W1R2R3Cl H CHF HOH H CHH HNH2F CHH HNH2F CHF HNH2H CHH HOH NH2CHH HOH H CHH H6.一种治疗或预防表现出黄病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或异常细胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(V)或(VII)化合物 或其β-L对映体或其可药用盐，其中每个D、W1、W2、X1、X2、Y1、Z、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定义同前，条件是对于通式(V)或(VI)的核苷，R2和R2′当中至少有一个是氢，且R3和R3′当中至少有一个是氢。7.权利要求6的方法，其中式(V-a)的β-D核苷选自一种下列化合物或其β-L对映体或其可药用盐X1Y1R1R1′R2R2′R3R3′NH2O F H H OH H OHOH H CH3H H H H HOH O H H H H H HNH2O H H H OH H OHNH2O H H H H H HOH O F H H OH H OHNH2O I H H H H HNH2O I H H OH H OHNH2O ClH H OH H OH8.权利要求6的方法，其中式(VII-a)的β-D核苷选自一种下列化合物或其β-L对映体或其可药用盐X1Y1R1R1′R2R2′R3R3′NH2O H H H OH H OHNH2O F H H OH H OHNH-OH O H H H OH H OH9.权利要求6的方法，其中式(VII-b)的β-D核苷选自下述化合物或其β-L对映体或其可药用盐X1X2W1R2R2′R3R3′NH2H CHH OH H OH10.一种治疗或预防表现出黄病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或异常细胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(XI)化合物 或其β-L对映体或其可药用盐，其中每个D、W1、W2、X1、X2、Y1、Z、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定义同前，每个Z1和Z2独立地为O、S、NR6或Se；每个R6是氢、低级烷基或低级酰基。11.权利要求10的方法，其中式(XI-a)的β-D核苷选自一种下列化合物或其β-L对映体或其可药用盐X1Y1Z1Z2R1R1′NH2O O O H HNH2O O S F HNH2O O O F H12.权利要求10的方法，其中式(XI-b)的β-D核苷选自一种下列化合物或其β-L对映体或其可药用盐X1X2W1Z1Z2Cl H CHO SCl NH2CHO SNH2F CHO SOH H CHO O13.一种治疗或预防表现出黄病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或异常细胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(XIII)化合物 或其β-L对映体或其可药用盐，其中每个D、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定义同前；每个Y2是O、S、NH或NR7；每个Y3是O、S、NH或NR8；每个X3是OR9或SR9；且每个R7、R8和R9是氢、C1-C6低级烷基、芳基烷基或芳基；条件是对于通式(XIII-d)核苷，R2和R2′当中至少有一个是氢，且R3和R3′当中至少有一个是氢。14.权利要求13的方法，其中式(XIII-a)的β-D核苷选自一种下列化合物或其β-L对映体或其可药用盐Y2Y3R1R1′R2R2′R3R3′O O F H H OH H OH15.权利要求13的方法，其中式(XIII-c)的β-D核苷选自一种下列化合物或其β-L对映体或其可药用盐Y2Y3R1R1′R3R3′O O F H H OHO O F H H O-MsNHO H H H O-MsY2Y3R1R1′R3R3′NHO H H H O-AcNHO H H H OHNHO F H H OHNHO F H H O-Ac16.权利要求13的方法，其中式(XIII-d)的β-D核苷选自下述化合物或其β-L对映体或其可药用盐Y2X3R1R1′R2R2′R3R3′OO-CH3H H H O-AcH O-Ac17.一种治疗或预防表现出黄病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或异常细胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(XIV)化合物 或其β-L对映体或其可药用盐，其中每个D、X1、Y1、Z1、R1、R2、R2′、R3和R3′的定义同前，每个L1是氢、Cl或Br；每个L2是OH、OCH3、OC2H5、OC3H7、OCF3、OAc或OBz；每个Z3可以是O或CH2。18.权利要求17的方法，其中式(XIV)的β-D核苷选自一种下列化合物或其β-L对映体或其可药用盐X1Y1R1R1′R2R2′R3R3′L1L2NH2O NH-OH OH ...

【专利技术属性】
技术研发人员：L斯图伊维尔，渡边恭一，
申请(专利权)人：法玛塞特有限公司，
类型：发明
国别省市：BB[巴巴多斯]