改变个体的瘦体重和骨特性的组合物和方法技术

本发明专利技术涉及降低个体身体脂肪比例、增加瘦体重（“ＬＢＭ”）、增加骨密度或改善骨愈合速率或上述全部的方法。总的说来，本发明专利技术的实施方案可通过将编码ＧＨＲＨ的异源核酸序列或其功能性生物等价物送递入个体的细胞中，并当修饰的细胞在个体中时使得编码的基因发生表达而实现。例如，当将这种核酸序列送递入个体的特定细胞中时，可获得组织特异性组成型表达。此外，ＧＨＲＨ或其功能性生物等价物基因的外部调节可利用诱导型启动子来实现，该诱导型启动子是由给予个体的分子开关分子调节的。送递ＧＨＲＨ或其功能性生物等价物的组成型或诱导型核酸编码序列的优选方法为直接用体内电穿孔方法送递入个体的细胞中。个体身体脂肪比例的降低和瘦体重（“ＬＢＭ”）的增加或上述两者是通过将如在此处所述的ＧＨＲＨ或其功能性生物等价物作为重组蛋白质送递入个体中而实现的。此外，也实现了骨密度的增加和骨愈合速率的改善。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
改变个体的瘦体重和骨特性的组合物和方法相关申请本申请要求于2001年10月25日提交的名为“增加体重、降低身体脂肪比例、增加骨密度和改善骨愈合速率”的美国临时专利申请第60/357,808的优先权，将其全部内容在此处引入作为参考。背景本专利技术涉及质粒介导的基因补充的组合物和方法。本专利技术涉及在动物个体中降低身体脂肪比例和增加瘦体重(“LBM”)的方法。总的说来，本专利技术的实施方案可通过将编码GHRH或其功能性生物等价物的核酸表达构建体送递入个体的组织中，并使得编码的基因在个体中表达而实现。例如，当将这种核酸序列送递入个体的特定细胞中时，可获得组织特异性的组成型表达。此外，GHRH或其功能性生物等价物基因的外部调节可利用诱导型启动子来实现，该诱导型启动子是由给予个体的分子开关分子调节的。送递GHRH或其功能性生物等价物的组成型或诱导型核酸编码序列的优选方法为直接用体内电穿孔方法送递入个体的细胞中。此外，本专利技术也涉及在动物个体中增加骨密度和改善骨愈合速率的方法。更特定地，本专利技术涉及体内和离体方法，该方法用于将编码生长激素释放激素“GHRH”或其功能性生物等价物的异源核酸序列送本文档来自技高网...

【技术保护点】
降低个体的身体脂肪比例的方法，该方法包含：向个体细胞中送递核酸表达构建体，该构建体编码生长激素释放激素（“ＧＨＲＨ”）或其功能性生物等价物。

【技术特征摘要】
US 2001-10-26 60/357,8081.降低个体的身体脂肪比例的方法，该方法包含向个体细胞中送递核酸表达构建体，该构建体编码生长激素释放激素(“GHRH”)或其功能性生物等价物。2.权利要求1的方法，其中通过电穿孔将核酸表达构建体向个体细胞中送递。3.权利要求1的方法，其中个体细胞是体细胞、干细胞或生殖细胞。4.权利要求1的方法，其中核酸表达构建体包含SeqID No11、SeqID No12、SeqID No13、SeqID No14、SeqID No17、SeqID No18、SeqID No19、SeqID No20或SeqID No21。5.权利要求1的方法，其中核酸表达构建体进一步包含转染促进多肽。6.权利要求5的方法，其中该转染促进多肽包含带电荷的多肽。7.权利要求5的方法，其中该转染促进多肽包含聚-L-谷氨酸。8.权利要求1的方法，其中核酸表达构建体向个体细胞中的送递起始了编码的GHRH或其功能性生物等价物的表达。9.权利要求8的方法，其中编码的GHRH或其功能性生物等价物在个体的组织特异性细胞中表达。10.权利要求9的方法，其中个体的组织特异性细胞包含肌细胞。11.权利要求8的方法，其中编码的GHRH是生物活性的多肽；而编码的GHRH功能性生物等价物是与GHRH多肽比较时已改造而含有不同的氨基酸序列但同时具有相似或改善的生物活性的多肽。12.权利要求8的方法，其中编码的GHRH或其功能性生物等价物具有式(SeqID No6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中该式具有如下特征X1是氨基酸酪氨酸(“Y”)或组氨酸(“H”)的D-或L-异构体；X2是氨基酸丙氨酸(“A”)、缬氨酸(“V”)或异亮氨酸(“I”)的D-或L-异构体；X3是氨基酸丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-异构体；X4是氨基酸甲硫氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-异构体；X5是氨基酸丝氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-异构体；或其组合。13.权利要求12的方法，其中编码的GHRH或其功能性生物等价物在个体中促进生长激素(“GH”)分泌。14.权利要求1的方法，其中编码的GHRH或其功能性生物等价物促进个体生长激素(“GH”)分泌。15.降低个体的身体脂肪比例的方法，该方法包含以下步骤(a)向个体的细胞中送递第一个核酸表达构建体、第二个核酸表达构建体和分子开关；其中第一个核酸表达构建体编码生长激素释放激素(“GHRH”)或其功能性生物等价物；且其中第二个核酸表达构建体具有调节蛋白质的编码区；及(b)将分子开关分子送递入个体中，其中分子开关分子控制调节蛋白质的活化。16.权利要求15的方法，其中通过电穿孔将第一个核酸表达构建体向个体的细胞中送递。17.权利要求15的方法，其中通过电穿孔将第二个核酸表达构建体向个体的细胞中送递。18.权利要求15的方法，其中第一个核酸表达构建体编码包含SeqID No1、SeqID No2、SeqID No3或SeqID No4序列的多肽。19.权利要求15的方法，其中第一个核酸表达构建体进一步包含转染促进多肽。20.权利要求19的方法，其中该转染促进多肽包含带电荷的多肽。21.权利要求19的方法，其中该转染促进多肽包含聚-L-谷氨酸。22.权利要求15的方法，其中第二个核酸表达构建体向个体细胞中的送递起始了编码的调节蛋白质的表达。23.权利要求22的方法，其中编码的调节蛋白质在个体细胞中表达，但为无活性的。24.权利要求23的方法，其中分子开关向个体细胞中的送递活化了调节蛋白质，且分子开关包含米非司酮或其功能性等价物。25.权利要求24的方法，其中活性的调节蛋白质起始了在第一个核酸序列上编码的GHRH或其功能性生物等价物的表达。26.权利要求25的方法，其中编码的GHRH是生物活性多肽；而编码的GHRH功能性生物等价物是与GHRH多肽比较时已改造而含有不同的氨基酸序列但同时具有相似或改善的生物活性的多肽。27.权利要求25的方法，其中编码的GHRH或其功能性生物等价物具有式(SeqID No6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中该式具有如下特征X1是氨基酸酪氨酸(“Y”)或组氨酸(“H”)的D-或L-异构体；X2是氨基酸丙氨酸(“A”)、缬氨酸(“V”)或异亮氨酸(“I”)的D-或L-异构体；X3是氨基酸丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-异构体；X4是氨基酸甲硫氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-异构体；X5是氨基酸丝氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-异构体；或其组合。28.权利要求27的方法，其中编码的GHRH或其功能性生物等价物促进个体生长激素(“GH”)分泌。29.权利要求15的方法，其中编码的GHRH或其功能性生物等价物在个体中促进生长激素(“GH”)分泌。30.权利要求15的方法，其中第一个核酸表达构建体包含SeqIDNo26。31.权利要求15的方法，其中第二个核酸表达构建体包含SeqIDNo27。32.降低个体的身体脂肪比例的方法，该方法包含以下步骤向个体送递重组生长激素释放激素(“GHRH”)或其功能性生物等价物。33.权利要求32的方法，其中重组GHRH是生物活性多肽；而GHRH的重组功能性生物等价物是与GHRH多肽比较时已改造而含有不同的氨基酸序列但同时具有相似或改善的生物活性的多肽。34.权利要求32的方法，其中重组GHRH或其功能性生物等价物具有式(SeqID No6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中该式具有如下特征X1是氨基酸酪氨酸(“Y”)或组氨酸(“H”)的D-或L-异构体；X2是氨基酸丙氨酸(“A”)、缬氨酸(“V”)或异亮氨酸(“I”)的D-或L-异构体；X3是氨基酸丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-异构体；X4是氨基酸甲硫氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-异构体；X5是氨基酸丝氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-异构体；或其组合。35.权利要求32的方法，其中重组GHRH或其功能性生物等价物在个体中促进生长激素(“GH”)分泌。36.权利要求32的方法，其中重组GHRH或其功能性生物等价物在个体中促进生长激素(“GH”)分泌。37.增加个体的瘦体重的方法，该方法包含以下步骤向个体细胞中送递核酸表达构建体，该构建体编码生长激素释放激素(“GHRH”)或其功能性生物等价物。38.权利要求37的方法，其中通过电穿孔将核酸表达构建体向个体细胞中送递。39.权利要求37的方法，其中个体细胞是体细胞、干细胞或生殖细胞。40.权利要求37的方法，其中核酸表达构建体包含SeqID No11、SeqID No12、SeqID No13、SeqID No14、SeqID No17、SeqID No18、SeqID No19、SeqID No20或SeqID No21。41.权利要求37的方法，其中核酸表达构建体进一步包含转染促进多肽。42.权利要求41的方法，其中转染促进多肽包含带电荷的多肽。43.权利要求41的方法，其中转染促进多肽包含聚-L-谷氨酸。44.权利要求37的方法，其中核酸表达构建体向个体细胞中的送递起始了编码的GHRH或其功能性生物等价物的表达。45.权利要求44的方法，其中编码的GHRH或其功能性生物等价物在个体的组织特异性细胞中表达。46.权利要求45的方法，其中个体的组织特异性细胞包含肌细胞。47.权利要求44的方法，其中编码的GHRH是生物活性多肽；而编码的GHRH功能性生物等价物是与GHRH多肽比较时已改造而含有不同的氨基酸序列但同时具有相似或改善的生物活性的多肽。48.权利要求44的方法，其中编码的GHRH或其功能性生物等价物具有式(SeqID No6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中该式具有如下特征X1是氨基酸酪氨酸(“Y”)或组氨酸(“H”)的D-或L-异构体；X2是氨基酸丙氨酸(“A”)、缬氨酸(“V”)或异亮氨酸(“I”)的D-或L-异构体；X3是氨基酸丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-异构体；X4是氨基酸甲硫氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-异构体；X5是氨基酸丝氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-异构体；或其组合。49.权利要求48的方法，其中编码的GHRH或其功能性生物等价物在个体中促进生长激素(“GH”)分泌。50.权利要求37的方法，其中编码的GHRH或其功能性生物等价物在个体中促进生长激素(“GH”)分泌。51.增加个体的瘦体重的方法，该方法包含以下步骤(a)向个体的细胞中送递第一个核酸表达构建体、第二个核酸表达构建体和分子开关；其中第一个核酸表达构建体编码生长激素释放激素(“GHRH”)或其功能性生物等价物；且其中第二个核酸表达构建体具有调节蛋白质的编码区；及(b)将分子开关分子送递入个体中，其中分子开关分子控制调节蛋白质的活化。52.权利要求51的方法，其中通过电穿孔将第一个核酸表达构建体向个体细胞中送递。53.权利要求51的方法，其中通过电穿孔将第二个核酸表达构建体向个体的细胞中送递。54.权利要求51的方法，其中第一个核酸表达构建体编码包含SeqID No1、SeqID No2、SeqID No3或SeqID No4序列的多肽。55.权利要求51的方法，其中第一个核酸表达构建体进一步包含转染促进多肽。56.权利要求55的方法，其中转染促进多肽包含带电荷的多肽。57.权利要求55的方法，其中转染促进多肽包含聚-L-谷氨酸。58.权利要求51的方法，其中第二个核酸表达构建体向个体细胞中的送递起始了编码的调节蛋白质的表达。59.权利要求58的方法，其中编码的调节蛋白质在个体细胞中表达，但为无活性的。60.权利要求59的方法，其中分子开关向个体细胞中的送递活化了调节蛋白质，且分子开关包含米非司酮或其功能性等价物。61.权利要求60的方法，其中活化的调节蛋白质起始了在第一个核酸序列上编码的GHRH或其功能性生物等价物的表达。62.权利要求51的方法，其中编码的GHRH是生物活性多肽；而编码的GHRH功能性生物等价物是与GHRH多肽比较时已改造而含有不同的氨基酸序列但同时具有相似或改善的生物活性的多肽。63.权利要求51的方法，其中编码的GHRH或其功能性生物等价物具有式(SeqID No6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中该式具有如下特征X1是氨基酸酪氨酸(“Y”)或组氨酸(“H”)的D-或L-异构体；X2是氨基酸丙氨酸(“A”)、缬氨酸(“V”)或异亮氨酸(“I”)的D-或L-异构体；X3是氨基酸丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-异构体；X4是氨基酸甲硫氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-异构体；X5是氨基酸丝氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-异构体；或其组合。64.权利要求63的方法，其中编码的GHRH或其功能性生物等价物在个体中促进生长激素(“GH”)分泌。65.权利要求51的方法，其中编码的GHRH或其功能性生物等价物在个体中促进生长激素(“GH”)分泌。66.权利要求51的方法，其中第一个核酸表达构建体包含SeqIDNo26。67.权利要求51的方法，其中第二个核酸表达构建体包含SeqIDNo27。68.增加个体的瘦体重的方法，该方法包含以下步骤向个体送递重组生长激素释放激素(“GHRH”)或其功能性生物等价物。69.权利要求68的方法，其中重组GHRH是生物活性多肽；而GHRH的重组功能性生物等价物是与GHRH多肽比较时已改造而含有不同的氨基酸序列但同时具有相似或改善的生物活性的多肽。70.权利要求68的方法，其中重组GHRH或其功能性生物等价物具有式(SeqID No6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中该式具有如下特征X1是氨基酸酪氨酸(“Y”)或组氨酸(“H”)的D-或L-异构体；X2是氨基酸丙氨酸(“A”)、缬氨酸(“V”)或异亮氨酸(“I”)的D-或L-异构体；X3是氨基酸丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-异构体；X4是氨基酸甲硫氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-异构体；X5是氨基酸丝氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-异构体；或其组合。71.权利要求70的方法，其中重组GHRH或其功能性生物等价物在个体中促进生长激素(“GH”)分泌。72.权利要求68的方法，其中重组GHRH或其功能性生物等价物在个体中促进生长激素(“GH”)分泌。73.增加个体的骨密度的方法，该方法包含向个体细胞中送递核酸表达构建体，该构建体编码生长激素释放激素(“GHRH”)或其功能性生物等价物。74.权利要求73的方法，其中通过电穿孔将核酸表达构建体向个体细胞中送递。75.权利要求73的方法，其中个体细胞是体细胞、干细胞或生殖细胞。76.权利要求73的方法，其中核酸表达构建体包含SeqID No11、SeqID No12、SeqID No13、SeqID No14、SeqID No17、SeqID No18、SeqID No19、SeqID No20或SeqID No21。77.权利要求73的方法，其中核酸表达构建体进一步包含转染促进多肽。78.权利要求73的方法，其中转染促进多肽包含带电荷的多肽。79.权利要求73的方法，其中转染促进多肽包含聚-L-谷氨酸。80.权利要求73的方法，其中核酸表达构建体向个体细胞中的送递起始了编码的GHRH或其功能性生物等价物的表达。81.权利要求80的方法，其中编码的GHRH或其功能性生物等价物在个体的组织特异性细胞中表达。82.权利要求81的方法，其中个体的组织特异性细胞包含肌细胞。83.权利要求80的方法，其中编码的GHRH是生物活性多肽；而编码的GHRH功能性生物等价物是与GHRH多肽比较时已改造而含有不同的氨基酸序列但同时具有相似或改善的生物活性的多肽。84.权利要求80的方法，其中编码的GHRH或其功能性生物等价物具有式(SeqID No6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中该式具有如下特征X1是氨基酸酪氨酸(“Y”)或组氨酸(“H”)的D-或L-异构体；X2是氨基酸丙氨酸(“A”)、缬氨酸(“V”)或异亮氨酸(“I”)的D-或L-异构体；X3是氨基酸丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-异构体；X4是氨基酸甲硫氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-异构体；X5是氨基酸丝氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-异构体；或其组合。85.权利要求84的方法，其中编码的GHRH或其功能性生物等价物在个体中促进生长激素(“GH”)分泌。86.权利要求73的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：R德拉格伊埃克里，RJ施沃茨，
申请(专利权)人：贝勒医学院，
类型：发明
国别省市：US[美国]