一种用于卷烟接装纸生物学评价的Ames试验方法技术

本发明专利技术涉及一种用于卷烟接装纸生物学评价的Ames试验方法，属烟草技术领域。本发明专利技术的方法为：采用人工唾液作为接装纸浸提液；量取一定面积的接装纸，剪成1cm×6cm的条状，置于具有磨口塞的50～250mL锥形瓶中；按照装纸面积/浸提液比例为24～36cm2/mL向锥形瓶中注入浸提液，盖好塞子；将该锥形瓶置于37±1℃的水浴震荡器中震荡浸提5～180min，制备样品原液；以10μL，50μL，250μL，500μL，1000μL的剂量将样品原液掺入平板，分别计数TA?97、TA?98、TA?100、TA?102的回复突变菌落数；再根据鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验结果评价卷烟接装纸的安全性。本发明专利技术的优点在于：能有效模拟接装纸与口腔接触的实际状况制备样品，用于Ames试验的样品原液剂量范围合适，方法实用、简便。

Ames test method for biological evaluation of cigarette tipping paper

The invention relates to a Ames test method for biological evaluation of cigarette tipping paper, which belongs to the technical field of tobacco. The method of the invention is: using artificial saliva as tipping paper extract; measured area of tipping paper, cut into 1cm * 6cm strip, is placed in the ground plug 50 ~ 250mL conical flask; according to the loading area / extraction ratio was 24 ~ 36cm2/mL to inject the flask leaching extract, cover plug; the conical flask is placed on the 37 + 1 DEG C water bath extraction in shock oscillator 5 ~ 180min, preparation of sample solution; at 10 L, 50 L, 250 L, 500 L, 1000 L dose will be incorporated into the sample solution were flat, count TA? 97, TA? 98, TA? 100, TA? 102 reverse mutation; according to the Ames test results of safety assessment of cigarette tipping paper. The invention has the advantages that the actual condition of the contact between the received paper and the oral cavity can be effectively simulated, and the sample prepared for the Ames test is suitable for the dosage range of the raw liquid, and the method is practical and simple.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，属烟草

技术介绍
卷烟接装纸虽不参加燃烧，但是却直接与消费者口腔接触。目前，对卷烟接装纸的 关注主要集中于对其物理指标、微生物指标、重金属和品质指标的规范。随着减害降 焦的不断深入，新型卷烟接装纸不断出现，需要深入开展卷烟接装纸安全性研究，从而为卷 烟材料监管提供基础数据和理论支撑。用于卷烟接装纸生物学评价的样品制备方法，虽然不是安全性评价工作的核心， 但却是所有分析检测工作最初的一步。准确模拟实际暴露条件，制备卷烟接装纸在人工唾 液中的迁移样品是影响后续安全性评价客观性、准确性及可靠性的关键因素和基本前提。迄今为止，在国内外未见模拟卷烟接装纸与口腔接触的实际状况，进行接装纸生 物学评价的Ames试验方法的公开报道。参考文献中华人民共和国烟草行业标准YC 170-2002《烟用接装纸原纸》.中华人民共和国烟草行业标准YC 171-2002《烟用接装纸》.宋瑜冰，宗永立，马骥，李鹏，张杰，彭书海.一种测定无烟气烟草制品中非极 性或弱极性香味成分释放率的方法.专利申请号200910227274. 3.中华人民共和国国家标准GB/T 16886. 15-2003/IS0 10993-15 :2000《医疗器械生物学评价第15部分金属与合金降解产物的定性与定量》.毛友安，李军，古君品，刘巍，钟科军，魏万之.模拟人体口腔对吸烟过程中主 流烟气吸收的装置.专利申请号200910226704. X.李雪梅，曾晓鹰，崔杨，杨叶昆，者为，段焰青，耿永勤，王明峰.一种全烟气捕 集及其PH值测定的方法·专利申请号201010123588. 1.专利
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种简便、实用的用于卷烟接装纸生物学评价的Ames试 验方法。本专利技术的，包括样品原液制备 及Ames试验，具体步骤如下a.采用中华人民共和国国家标准GB/T 16886. 15-2003/IS0 10993-15:2000《医疗器械生物学评价第15部分金属与合金降解产物的定性与定量》规定的人工唾液作为卷 烟接装纸的浸提液；b.量取一定面积的卷烟接装纸(如量取卷烟接装纸600cmX6Cm，相当于500支 卷烟的接装纸用量；量取300cmX6cm，相当于250支卷烟的接装纸用量；量取卷烟接装纸 240cmX6cm，相当于200支卷烟的接装纸用量；量取卷烟接装纸120cmX6cm，相当于100支3卷烟的接装纸用量；量取60cmX 6cm，相当于50支卷烟的接装纸用量)，剪成IcmX 6cm的条 状，置于具有磨口塞的50 250mL锥形瓶中备用；c.按照装纸面积/浸提液比例为M 36cm2/mL向锥形瓶中注入浸提液，当卷烟 接装纸全部浸入后盖好塞子；d.模拟实际暴露条件，设置浸提温度为37士 1°C ；e.将该锥形瓶置于37士 1°C的水浴震荡器中震荡浸提5 180min，得到样品原 液；f.将e步骤得到的样品原液进行鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验，即分别按 10 μ L，50 μ L, 250 μ L, 500 μ L, 1000 μ L 掺入平板，分别计数 TA 97、TA 98、TA 100、TA 102四个菌种在剂量下的回复突变菌落数；g.根据Ames试验结果判别卷烟接装纸材料是否具有致突变作用，用于评价卷烟 接装纸的安全性。本专利技术的优点在于能有效模拟抽吸卷烟时接装纸与口腔接触的实际状况制备样 品，所选择的用于Ames试验的样品原液剂量范围合适，方法实用、简便。附图说明附图为用于卷烟接装纸生物学评价的Ames试验方法工艺流程图。 具体实施例方式下面将结合具体实施例对本专利技术做详细描述，但并不限制本专利技术。实例一用于HH卷烟接装纸评价1实验部分1. 1试验材料及其制备参照中华人民共和国国家标准GB/T 16886. 15-2003/IS0 10993-15 :2000《医疗器械生物学评价第15部分金属与合金降解产物的定性与定量》规定的人工唾液制备方法， 配制与口腔接触的卷烟接装纸的浸提液。量取HH卷烟接装纸600cmX6cm(相当于500支卷烟的接装纸用量)，剪成约 IcmX 6cm细条状，置于具磨口塞的250mL锥形瓶中。往装有HH卷烟接装纸的锥形瓶中注入 配制好的人工唾液IOOmL,致使接装纸条全部浸入(接装纸面积/浸提液的比例为36cm2/ mL，相当于用ImL浸提液浸提5支卷烟的接装纸)，盖好塞子。模拟实际暴露条件，设置浸提 温度为37士 VC ；根据中华人民共和国烟草行业标准《烟用接装纸原纸》(YC 170-2002)及 《烟用接装纸》(YC 171-2002)中规定的褪色浸泡时间，设置浸提时间为池。将该锥形瓶置 于37士 1°C的水浴震荡器中震荡浸提2h (震荡速度200r/min)，制备接装纸样品原液。1. 2试验菌株组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌(SalmonellaTyphimurium)TA 97,TA 98,TA 100、 TA 102由上海市疾病预防控制中心提供。试验前，菌株鉴定符合要求，菌种贮存于-196°C 液氮内。增菌方法置于37 士 1°C恒温摇床(100次/min)培养IOh备用。1. 3 S-9 混合液大鼠肝勻浆(S-9)制备的S-9混合液根据中华人民共和国国家标准 GB15193. 4-2003《鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验》自制。储存于_196°C液氮内。1. 4对照物阴性对照蒸馏水(自发回变)；溶剂对照人工唾液；阳性对照2-氨基芴 (10 μ g/0. ImL/ Μ),1,8- 二羟基蒽醌(50 μ g/0. ImL/ M )，敌克松(50 μ g/0. ImL/ 皿)，叠 氮钠(1.5 μ g/0. ImL/皿)。1. 5试验方法采用中华人民共和国国家标准GB 15193.4-2003《鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微 粒体酶试验》的平板掺入法对HH接装纸样品原液进行Ames试验，选用TA97、TA98、TA 100、 TA 102四个菌种，向融化并保温在45°C的2. OmL顶层培养基试管中依次加入0. ImL增菌 液，0. 5mL S-9混合液(或不加S-9混合液)和经0. 22 μ m —次性过滤器过滤的HH卷烟接 装纸样品原液(原液掺入剂量分别为10 μ L，50 μ L，250 μ L，500 μ L，1000 μ L)混勻，迅速倾 入底层培养基上，使其均勻分布，待上层培养基凝固后，将平板翻转，每一浓度每一个菌株3 皿，37°C培养48h，计数每皿回变菌落数。受试样品的回复突变菌落数(又切)增加，超过阴 性对照组2倍，有剂量-反应关系；或某一剂量超过阴性对照组2倍以上，呈现能重复并有 统计学意义时记为阳性。2 结果由表1知，无论在-S-9和+S-9的情况下，HH卷烟接装纸样品原液在受试剂量范 围(10 1000 μ L/皿)内未引起测试菌株回变菌落数的明显增加，而阳性对照组引起测试 菌株的回变菌落数明显增加，并超过自发回变和溶剂对照的2倍以上，表明HH卷烟接装纸 样品原液在试验添加剂量范围内细菌回复突变试验结果为阴性。表IHH卷烟接装纸样品原液Ames试验检测结果权利要求1. ，其特征在于用于卷烟接装纸生 物学评价的Ames试验方法的具体步骤如下a.采用医疗器械生物学评价本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于卷烟接装纸生物学评价的Ａｍｅｓ试验方法，其特征在于用于卷烟接装纸生物学评价的Ａｍｅｓ试验方法的具体步骤如下：ａ．采用医疗器械生物学评价研究中常用的人工唾液作为卷烟接装纸的浸提液；ｂ．量取一定面积的卷烟接装纸，剪成１ｃｍ×６ｃｍ的条状，置于具有磨口塞的５０～２５０ｍＬ锥形瓶中备用；ｃ．按照接装纸面积／浸提液比例为２４～３６ｃｍ↑［２］／ｍＬ向装有接装纸的锥形瓶中注入浸提液，接装纸全部浸入后盖好塞子；ｄ．模拟实际暴露条件，设置浸提温度为３７±１℃；ｅ．将该锥形瓶置于３７±１℃的水浴震荡器中震荡浸提５～１８０ｍｉｎ，得到样品原液；ｆ．将ｅ步骤得到的样品原液进行鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验，即：分别按１０μＬ，５０μＬ，２５０μＬ，５００μＬ，１０００μＬ掺入平板，分别计数ＴＡ９７、ＴＡ９８、ＴＡ１００、ＴＡ１０２四个菌种在剂量下的回复突变菌落数；ｇ．根据Ａｍｅｓ试验结果评价卷烟接装纸的安全性。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：魏玉玲，夭建华，李雪梅，米其利，徐济仓，耿永勤，倪红梅，缪明明，
申请(专利权)人：云南烟草科学研究院，
类型：发明
国别省市：53