ＥＰＡ和ＤＨＡ在制备二级预防神经性疾患的药物中的用途制造技术

本发明专利技术涉及ｎ－３ＰＵＦＡ　　ＥＰＡ和／或ＤＨＡ在制备预防有脑部供血动脉粥样硬化症状的患者大脑损害的口服药物中的应用。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及n-3PUFA二十碳五烯酸(EPA)和/或二十二碳六烯酸(DHA)对于脑部供血动脉有动脉粥样硬化症状的患者在预防继发性神经性疾病，特别是中风中的应用。流行病学证据显示食用鱼或鱼油中的长链n-3多不饱和脂肪酸(PUFA)，特别是EPA和DHA，可预防西方人的心血管疾病。长链n-3 PUFA可迅速降低血浆中甘油三酯(TAG)的浓度，降低食后脂血反应值。动物模型证明食用鱼油可降低动脉粥样硬化，这可能是由于类脂降低，生长因子的生成减少，炎症减少，或者是上述几种原因结合的结果。正如EP-B-1 152 755说明书和权利要求中所述，二级预防研究表明长链n-3 PUFA对心肌梗塞(MI)患者产生了显著的效果。N-3 PUFA尤其可有效地减少猝死，(EP-B-1 152 755)，猝死是缺乏类脂的显著降低时产生的效果。据推测，这种效应是由于n-3 PUFA的抗凝血和抗心律失常作用产生的。相反，我们认为有可能是n-3 PUFA的抗炎作用有助于动脉粥样硬化斑块的稳定。相反的，有迹象显示从植物油例如葵瓜子油中获得的n-6 PUFA亚油酸有利于炎症，这种情况下增加摄取亚油酸将促进斑块的不稳定。据专利技术人所知没有任何研究公开了n-6或n-3 PUFA对斑块的稳定性作用。Rapp等人(Arterioscler.Thromb.1991，II，903-911)进行了一项研究，其中患者经过动脉内膜切除手术，在手术前一段时间内服用高剂量的鱼油(48-64g/天)，研究人员发现这些患者手术切除的斑块中的n-3 PUFA，二十碳五烯酸(EPA；205n-3)和二十二碳六烯酸(DHA；226n-3)远远高于对照患者移除斑块中三种物质的水平。然而，Rapp等人没有说明斑块的结构细节。我们现在发现，如本专利技术所述，给脑部供血动脉有动脉粥样硬化症状的患者施用适当剂量的鱼油不但会使低密度脂蛋白(LDL)中的EPA和DHA和动脉粥样硬化斑块类脂相结合，而且引人注目的是，提高了动脉粥样硬化斑块的稳定性。更特别地，我们发现患者经口服鱼油后产生更多的有良好形状纤维帽的斑块，而不是细炎症帽，此外巨噬细胞没有严重的侵润斑块。众所周知，动脉粥样硬化斑块易于受损的特性包括一个细的纤维帽和数目增加的炎症细胞，如巨噬细胞。已知颈动脉斑块中的巨噬细胞和神经性疾病发病率上升有关，如中风和暂时性缺血损伤。因此，鱼油的口服给药提供了一种有效、安全的方法有助于预防神经性疾病，尤其是脑部供血动脉有动脉粥样硬化症状的患者的中风。因此，本专利技术涉及EPA和/或DHA在制备口服药剂中的应用，用于预防脑部供血动脉有动脉粥样硬化症状患者的脑损伤。在一个优选的具体实施方式中，口服药剂用于预防患有脑血管意外、一过性黑矇和/或暂时性缺血损伤症状患者的中风。我们将详细说明实现本专利技术的实验研究。患者和方法研究计划指定做颈动脉内膜剥离手术的患者，即有脑部供血动脉有深度动脉粥样硬化症状，同意参与实验的随机分组，进行双盲法试验，施用三种类型的油胶囊中的一种。对照油是80∶20混合的棕榈油和大豆油；混合物中脂肪酸组分接近于成年人UK饮食的平均值。另一种油是葵花子油和包含EPA/DHA的鱼油。油中脂肪酸组分如表1。每粒胶囊包含1g油和1mg维生素E。患者服用6粒胶囊/天直到进行手术；建议患者每顿饭时服用两粒胶囊，每天三次。因此，长链n-3 PUFA的量为1.4g/天。亚油酸服用量为3.6g/天，这表示这种脂肪酸的吸收有40％的增加。表1.研究用胶囊中的脂肪酸组分 样本含量根据Rapp等人.，(Arteriscler.Thromb.1991 11，903-11)所述的斑块磷脂(PL)的脂肪酸组分进行计算，在本研究中考虑使用十到十五倍的低EPA+DHA剂量。在此基础上计算50样品含量需要增加一倍的斑块磷脂中的EPA，达到P＜0.05。考虑到有20％的遗漏，本项研究选用了188名患者。研究开始时，空腹时采集的静脉血样本加入至EDTA中。患者开始如上所述服用胶囊，记录7天食物重量的日记。整个研究阶段，患者继续药物疗法，并且建议他们不要改变饮食。有规律地与患者接触提高了顺应性，顺应性根据回收的胶囊和测量LDL类脂部分的脂肪酸组分评估。不能够遵从(n＝5)的患者退出该项研究。每个治疗小组中，回收的胶囊计算得到顺应性＞85％，此外，服用鱼油的实验组中超过90％的患者血浆LDL类脂部分中EPA的比例增加超过0.5g/100g总脂肪酸。观察的结果表明每个治疗组中顺应性至少为85-90％。患者开始接受研究后大约7到190天进行移除颈动脉斑块的手术。7天内进行手术的患者退出该研究。进行手术前一天早晨，再采集一次空腹静脉血样本。手术时聚集颈动脉斑块并进行清洗。从颈总动脉开端切割成2mm宽的切片。进行生化学分析的切片用液态氮冷冻。用于显微解剖的切片浸入甲醛然后植入石蜡中。用于免疫组织化学的切片在最适切割温度下冷冻于包埋剂(Agar Scientific，Stansted，UK)中，在-70℃冷藏。惯常营养素摄入量分析用FOODBASE(脑化学学会，London，UK)修饰方法对食物日记进行惯常营养素摄入量的分析，这已被确认用于测量脂肪酸摄入量。血脂和脂蛋白血浆总胆固醇和三酰基甘油(TAG)浓缩物可由商业可获得的的比色测定法(Sigma Chemical Co.，Poole，UK)确定。低密度脂蛋白(LDL)通过两步密度梯度法从血浆中制备，将1.7mL血浆(加入固态溴化钾调节密度为1.24g/mL)加入3.3mL磷酸盐缓冲生理盐水中，在封闭管中离心2小时，转速100,000rpm，温度15℃，在Beckman超速离心机的Beckman TLA-100.4转子中。纯化的LDL-70℃冷藏用于分析脂肪酸组分。脂肪酸组分分析测定PL的脂肪酸组分，胆固醇酯(CE)和LDL的TAG部分，以及接近于颈动脉斑块分岔的冷冻部分。萃取类脂，薄层色谱法分离类脂馏分，每个馏分中的脂肪酸组分用气相色谱法测定，如Thies等人(Am.J.Clin.Nutr.2001，73，539-48)所述。颈动脉斑块形态学植入石蜡的部分用苏木精和曙红染色。接近分岔的部分用美国心脏病协会(Stary等人.，Circulation，1995，92，1355-74)公布的标准和Virmani等人.(Arterioscler.Thromb.Vase.Biol.200020，1262-75)提出的这种系统的修饰分类。由心血管病理学家随机顺序检查这些部分，他们不知道任何患者的信息。美国心脏病协会(AHA)分类包括六级，或者说类别，分别为第I类(初级损害)；第II类(早期损害或脂肪纹)；第III类(中级损害或早期动脉粥样化)；第IV类(动脉粥样化或动脉粥样化斑块)；第V类(纤维动脉粥样化或纤维化损害)；第VI类(伴有表面缺陷的损害和/或出血和/或血栓沉积)。由Virmani等人.提出的修饰分类包括根据严重程度进行一系列等级描述，如病理性内膜加厚(细胞外类脂积聚区域的子宫平滑肌细胞，但无坏死或血栓)；纤维帽动脉粥样化(良好形状的坏死核，覆有纤维帽；无血栓)；细纤维帽动脉粥样化(巨噬细胞浸润的细纤维帽和伴有少量平滑肌细胞的淋巴细胞和潜在的坏死核，无血栓)；糜烂(腔血栓症)；本文档来自技高网...

【技术保护点】
二十碳五烯酸（ＥＰＡ），二十二碳六烯酸（ＤＨＡ），或ＥＰＡ和ＤＨＡ的混合物，或其药物上可接受的盐或衍生物，在制备预防有脑部供血动脉粥样硬化损伤症状的患者大脑损伤的口服药物中的应用。

【技术特征摘要】
GB 2002-5-3 0210212.7;GB 2003-4-2 0307625.41.二十碳五烯酸(EPA)，二十二碳六烯酸(DHA)，或EPA和DHA的混合物，或其药物上可接受的盐或衍生物，在制备预防有脑部供血动脉粥样硬化损伤症状的患者大脑损伤的口服药物中的应用。2.根据权利要求1的发明，其使用的是EPA和DHA的混合物。3.根据权利要求2的发明，其中所述混合物中EPA和DHA的比例是1∶2-2∶1。4.根据权利要求3的发明，其中所述比例约为3∶2。5.如前述任一项权利要求的发明，其中EPA和/或DHA是其乙酯。6.根据权利要求2或5任一项的发明，其中所述药...

【专利技术属性】
技术研发人员：P考尔德，R格林布尔，P加拉格尔，C希尔曼，
申请(专利权)人：派普生物保健品公司，
类型：发明
国别省市：NO[挪威]