经皮肉毒杆菌毒素组合物制造技术

用于给患者经皮给药神经毒素的药用组合物，该组合物包括诸如肉毒杆菌毒素的神经毒素，和促进剂，它能促进神经毒素通过患者皮肤的吸收，并且不会消除与神经毒素相关的生物活性。所述药用组合物通常涂在患者身体外部，并且可以在经皮贴剂中提供。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及含有神经毒素的药用组合物。具体地讲，本专利技术涉及含有诸如肉毒杆菌毒素的梭菌神经毒素的组合物，用于给患者经皮外部使用。背景肉毒杆菌毒素梭菌属具有超过127个种，这些种是按照它们的形态学和功能分类的。厌氧性的，格兰氏阳性肉毒杆菌能产生有效的多肽神经毒素——肉毒杆菌毒素，它能够在人类和动物身体上导致被称为肉毒中毒的神经瘫痪疾病。发现肉毒杆菌的孢子存在于土壤中，并且能够在家庭式罐头工厂的没有适当消毒和密封的食品容器中生长，它是导致很多肉毒中毒的病例的原因。肉毒中毒的作用，通常在食用了受到肉毒杆菌培养物或孢子感染的食品18-36小时之后出现。所述肉毒杆菌毒素能明显通过肠道的衬里而又不会被减毒，并且侵害外周运动神经元。肉毒杆菌毒素中毒的症状，可以从行走、吞咽、和语言困难发展到呼吸肌的瘫痪和死亡。A型肉毒杆菌毒素是人类已知的最致命的天然生物学制剂。大约50皮克的市售A型肉毒杆菌毒素(纯化的神经毒素复合物)1是小鼠的LD50剂量(即1个单位)。一个单位的BOTOX含有大约50皮克(大约56attomoles)的A型肉毒杆菌毒素复合物。有趣的是，以摩尔为单位计算，A型肉毒杆菌毒素比白喉的毒性强大约18亿倍，比氰化钠的毒性强大约6亿倍，比眼镜蛇毒素的毒性强大约三千万倍，比霍乱的毒性强大约一千二百万倍。Singh，Critical Aspects of Bacterial Protein Toxins，pages 63-84(chapter 4)of Natural Toxins II，edited by B.R.Singh等，Plenum Press，New York(1976)(其中，所说的相当于1U的0.3ng的A型肉毒杆菌毒素的LD50是校正过的，因为以下事实大约0.05ng的BOTOX相当于1个单位)。将一个单位(U)的肉毒杆菌毒素定义为在腹膜内注射到重量分别为18-20克的雌性Swiss Webster小鼠体内之后的LD50。(1购自Allergan，Inc.，ofIrvine，California，商标为BOTOX，100个单位/瓶)业已鉴定了七种肉毒杆菌神经毒素，它们分别是肉毒杆菌神经毒素血清型A，B，C1，D，E，F和G，它们分别是通过用类型专一性抗体的中和区分的。肉毒杆菌毒素的不同的血清型根据它们所影响的动物的物种以及它们所引起的瘫痪的严重性和持续时间而变化。肉毒杆菌毒素明显以高亲和力与胆碱能运动神经元结合，被转运到神经元中，并且抑制乙酰胆碱的释放。无论血清型如何，毒素中毒作用的分子机制似乎是类似的，并且包括至少三个步骤或阶段。在所述过程的第一个步骤中，所述毒素通过重链，H链，和细胞表面受体之间的专一性相互作用与目标神经元的突触前膜结合；对于每一种类型的肉毒杆菌毒素和破伤风毒素来说，它们的受体被认为是不同的。H链的羧基末端片段5Hc对于将所述毒素导向细胞表面来说是似乎是重要的。在第二个步骤中，毒素通过中毒细胞的细胞质膜。所述毒素首先通过受体介导的内吞作用被所述细胞吞噬，并且形成含有所述毒素的核内体。所述毒素随后从核内体中逃出，进入所述细胞的细胞质。该步骤被认为是通过H链的氨基末端片段——HN介导的，它能对大约5.5或更低的pH响应引起所述毒素的构像变化。已知核内体具有质子泵，它能降低核内体内的pH。所述构像改变，暴露出所述毒素内的疏水性残基，这使得所述毒素能将它自身包埋在核内体膜中。然后所述毒素(或者起码是所述轻链)通过核内体膜转运到细胞质中。肉毒杆菌毒素活性机制的最后一个步骤似乎涉及连接重链——H链，和轻链——L链的二硫键的还原。肉毒杆菌和破伤风毒素的完整的毒性包含在全毒素的L链中；所述L链是锌(Zn++)肽键内切酶，它能选择性地裂解含有神经递质的液泡识别并且停靠质膜的细胞质表面所必需的蛋白，以及液泡与质膜融合所必需的蛋白。破伤风神经毒素，B，D，F，和G型肉毒杆菌毒素能导致小突触泡蛋白(又被称为液泡相关的膜蛋白(VAMP))——突触体膜蛋白的降解。大部分存在于突触液泡的细胞质表面上的VAMP由于所述任意一种裂解事件被清除。肉毒杆菌毒素血清型A和E能裂解SNAP-25。肉毒杆菌毒素血清型C1最初被认为能裂解突触融合蛋白，不过，被证实能裂解突触融合蛋白和SNAP-25。每一种肉毒杆菌毒素能专一性裂解不同的键，B型肉毒杆菌毒素(和破伤风毒素)除外，它能裂解相同的键。业已将肉毒杆菌毒素用于治疗以机能亢进的骨骼肌为特征的神经肌肉疾病的临床设置。美国食品和药物管理局业已批准了将A型肉毒杆菌毒素复合物(BOTOX)用于治疗脸痉挛，斜视和半面痉挛，颈肌张力障碍，以及治疗唇瓣皱纹。FDA还批准了将B型肉毒杆菌毒素(MYOBLOCTM)用于治疗颈肌张力障碍。与A型肉毒杆菌毒素相比，非A型肉毒杆菌毒素血清型具有明显更低的效力和/或更短的活性时间。外周肌内A型肉毒杆菌毒素的临床作用通常在注射之后1天或几小时内出现。通过一次肌内注射A型肉毒杆菌毒素所导致的症状减轻的典型的持续时间平均为大约3-4个月。尽管所有的肉毒杆菌毒素血清型表面上都能在神经肌肉接点抑制神经递质乙酰胆碱的释放，它们是通过影响不同的神经分泌蛋白和/或在不同的位点裂解所述蛋白而实现这一目的的。例如，A和E型肉毒杆菌都能裂解25千道尔顿(kD)的突触体相关蛋白(SNAP-25)，不过，它们能靶定该蛋白内的不同的氨基酸序列。B，D，F和G型肉毒杆菌毒素对与液泡相关的蛋白(VAMP，又被称为小突触泡蛋白)起作用，每一种血清型在不同位点裂解该蛋白。最后，业已证实了C1型肉毒杆菌毒素能裂解突触融合蛋白和SNAP-25。在作用机制上的这种差别，可以影响各种肉毒杆菌毒素血清型的相对效力和/或作用的时间。显然，可以从多种不同细胞类型中找到肉毒杆菌毒素的底物。例如，参见Biochem，J1；339(pt1)159-651999，和Mov Disord，10(3)3761995(胰腺胰岛B细胞至少包括SNAP-25和小突触泡蛋白)。所有七种已知的肉毒杆菌毒素血清型的肉毒杆菌毒素蛋白分子的分子量大约为150kD。有趣的是，肉毒杆菌毒素是以包括150kD肉毒杆菌毒素蛋白分子和相关的非毒素蛋白的复合物形式释放的。因此，梭菌能够以900kD，500kD和300kD形式生产A型肉毒杆菌毒素复合物。B和C1型肉毒杆菌毒素显然是以700kD或500kD复合物形式生产的。D型肉毒杆菌毒素是以300kD和500kD复合物形式生产的。最后，E和F型肉毒杆菌毒素仅仅是以300kD复合物形式生产的。所述复合物(即分子量超过大约150kD)被认为包括非毒素血球凝集素蛋白和非毒素和非毒性非血球凝集素蛋白。这两种非毒素蛋白(它们与肉毒杆菌毒素分子一起构成了相关的神经毒素复合物)可以发挥作用，以便提供克服肉毒杆菌毒素分子的变性的稳定性，和在毒素摄入时针对消化性酸的保护作用。另外，还可能的是，肉毒杆菌毒素复合物越大(大于大约150kD的分子量)，肉毒杆菌毒素离开所述肉毒杆菌毒素复合物的肌内注射部位的速度可能越慢。在体外研究中业已证实了肉毒杆菌毒素能抑制钾阳离子诱导的乙酰胆碱和去甲肾上腺素从脑干组织的原代培养物中的释放。另外，业已报导了肉毒杆菌毒素能抑制甘氨酸和谷氨酸在脊椎神经元的原本文档来自技高网...

【技术保护点】
药用组合物，包括：稳定化的肉毒杆菌毒素；和至少一种促进剂，用于通过增强患者皮肤的通透性，促进肉毒杆菌毒素向人类患者体内的经皮输送。

【技术特征摘要】
US 2002-7-11 10/194,8051.药用组合物，包括稳定化的肉毒杆菌毒素；和至少一种促进剂，用于通过增强患者皮肤的通透性，促进肉毒杆菌毒素向人类患者体内的经皮输送。2.如权利要求1的组合物，其中，所述肉毒杆菌毒素选自下列一组A，B，C1，D，E，F和G型肉毒杆菌毒素。3.如权利要求1的组合物，其中，所述肉毒杆菌毒素是A型肉毒杆菌毒素。4.如权利要求1的组合物，其中，所述肉毒杆菌毒素是纯化的肉毒杆菌毒素。5.如权利要求1的组合物，其中，所述组合物包括大约1个单位-大约20,000个单位的肉毒杆菌毒素。6.如权利要求1的组合物，其中，所述组合物包括一定量的肉毒杆菌毒素，以便获得持续1个月至5年的治疗效果。7.如权利要求1的组合物，其中，所述促进剂是醇。8.如权利要求7的组合物，其中，所述醇是多元醇。9.如权利要求1的组合物，其中，所述促进剂包括转化体。10.如权利要求1的组合物，其中，所述组合物包括多种促进剂。11.用于经皮贴剂中的药用组合物，所述药用组合物包括稳定化的肉毒杆菌毒素，它能穿透人类患者皮肤，而又不会大量渗透通过血管，当所述肉毒杆菌毒素与经皮贴剂中的促进剂相互作用时，导致了与来自细胞的分子的胞吐作用相关的疾病的治疗作用。12.如权利要求11的组合物，其中，所述肉毒杆菌毒素是在将经皮贴剂贴在患者皮肤上之前以干燥状态提供在经皮贴剂中的。13.如权利要求11的组合物，其中，所述肉毒杆菌毒素是A型肉毒杆菌毒素。14.如权利要求11的组合物，其中，所述肉毒杆菌毒素是在将所述经皮贴剂贴在患者皮肤上之后与所述促进剂混合的。15.如权利要求14的组合物，其中，所述肉毒杆菌毒素与促进剂混合，所述促进剂是在将所述经皮贴剂贴在患者皮肤上之前涂在患者皮肤上的。16.一种经皮贴剂，包括药用组合物，该组合物包括稳定化的肉毒杆菌毒素；和促进剂，它能促进所述肉毒杆菌毒素以生物活性形式经皮给药到人类患者的皮下目标部位，而又不会使用到患者的循环系统中；和放置在经皮贴剂一侧的黏结剂，以便将所述经皮贴剂可除去地固定在患者皮肤上。17.如权利要求16的经皮经皮贴剂，其中，所述黏结剂放置在装有所述药用组合物的贮库周围。18.如权利要求16的经皮贴剂，它还包括从贴在皮肤上的所述经皮贴剂的一侧延伸出来的多个针头，其中，所述针头延伸通过所述经皮贴剂，以便穿透所述皮肤的角质层，而又不会破坏血管。19.如权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：S多诺万，
申请(专利权)人：阿勒根公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]