抗肿瘤化合物及其治疗用途制造技术

本发明专利技术公开了亚芳基２－吲哚酮衍生物用于治疗涉及Ｍｅｔ、ＰＤＧＦ－Ｒ、ＦＧＦ－Ｒ１、ＦＧＦ－Ｒ３和Ｋｉｔ酪氨酸激酶或Ｒｅｔ家族癌蛋白的肿瘤的用途。本发明专利技术还提供了包含亚芳基２－吲哚酮衍生物的药物组合物以及在分别的容器中含有所述衍生物和抗癌或抗肿瘤剂的药盒。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化合物(E)-1，3-二氢-5，6-二甲氧基-3-[(4-羟苯基)亚甲基]-2H-吲哚-2-酮在治疗涉及Met、PDGF-R、FGF-R1、FGF-R3和Kit酪氨酸激酶或Ret癌蛋白的肿瘤中的用途。
技术介绍
RET/PTC癌基因涉及于人乳头状甲状腺肿瘤的转化过程中且产生于具有不同供体基因的原-RET的酪氨酸激酶域的重排。该基因重排的产物表现出独立于配体的赖氨酸激酶活性，并且集中在细胞质中。Ret/ptc1是RET/PTC1癌基因的产物，其产生于具有H4/D10S170基因的原-RET酪氨酸激酶域的重排。Int.J.Cancer 85，384-390(2000)报道了亚芳基2-吲哚酮化合物对Ret/ptc1癌蛋白酪氨酸激酶活性的抑制。指出1，3-二氢-5，6-二甲氧基-3-[(4-羟苯基)亚甲基]-2H-吲哚-2-酮衍生物(以下为“化合物1”)在回复RET/PTC1癌基因转化的NIH3T3细胞的形态学表型方面特别有效。在同一文献中，提议将亚芳基2-吲哚酮化合物对酪氨酸激酶的抑制作用用于研究Ret信号传导并用于在与Ret-和Ret/ptcs-相关的疾病中控制细胞增殖。
技术实现思路
已经发现化合物1能有效地抑制在肿瘤发生、发展和向远端器官扩散中起重要作用的酪氨酸激酶，而不是抑制Ret/ptc1。具体而言，已经显示化合物1可完全抑制Ret/MEN2A(突变C634R和C634W)、Ret/MEN2B(突变M918T)、Met、PDGF-R、FGF-R1、FGF-R3和Kit(c-Kit和突变A559)酪氨酸激酶的自磷酸化作用、降低它们的表达(下调)并回复由此转化的细胞表型。因此，本专利技术的目的是化合物(E)-1，3-二氢-5，6-二甲氧基-3-[(4-羟苯基)亚甲基]-2H-吲哚-2-酮或其与可药用碱的盐在细胞转化的初始阶段或肿瘤增殖和扩散的后续阶段中治疗肿瘤的用途，所述肿瘤涉及Met、PDGF-R、FGF-R1、FGF-R3和Kit酪氨酸激酶中至少之一或涉及Ret癌蛋白家族、包括载有与MEN2-相关突变的Ret受体中至少之一。本专利技术还涉及化合物1的任何立体异构体或互变异构形式的用途。抑制失调的组成型活性Ret受体可用于治疗散发性髓样甲状腺癌(MTC)和与MEN2相关的疾病，包括MTC、嗜铬细胞瘤、甲状旁腺增生和肠神经节瘤。抑制Met可用于对抗上皮源性肿瘤的浸润/转移性表型。对于Met-活化的改变，化合物1在治疗肾脏肿瘤中也具有明确的疗效。抑制Kit可用于治疗胃肠间质肿瘤、小细胞肺癌、精原细胞瘤和血液恶性肿瘤如肥大细胞病和急性髓性白血病。PDGF-R活化的失控以及其牵涉入自分泌环支持化合物1在对常规疗法不响应的肿瘤如神经胶质瘤和隆凸性皮肤纤维肉瘤中的治疗用途。另外，PDGF-R涉及肿瘤血管形成和血管发展，由此支持化合物1在控制实体瘤中新血管形成中的用途。化合物1可用于治疗表达高水平的FGF-R1和最终涉及于自分泌环中的各个bFGF配体的黑素瘤和神经胶质瘤。由于该受体在血管形成过程中起重要作用，故通过化合物1抑制该受体可用于控制肿瘤血管形成。抑制FGF-R3可用于治疗多发性骨髓瘤、膀胱癌和子宫颈癌。对于治疗应用，RPI-1及其盐可用可药用的载体和赋形剂进行配制。化合物1的苯酚官能团可通过用适宜的有机或无机碱处理而成盐。药物组合物可通过口服、胃肠外、舌下或透皮途径、优选以片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉末剂、糖浆剂、溶液剂、混悬剂、栓剂、控释形式施用。该组合物可采用常规技术、使用本领域已知的成分进行制备。活性成分的量可根据疾病的严重程度、患者年龄、施用类型和途径而改变，然而通常使用的量为0.1至1000mg/Kg、优选5至300mg/Kg、更优选20至200mg/Kg，单或多剂、每天一次或多次使用。专利技术详述载有可引起组成型酪氨酸激酶活性的氨基酸取代基的Ret癌蛋白涉及散发性MTC和遗传性2型多发性内分泌腺瘤形成综合征(MEN2A、MEN2B和家族性MTC)，所有这些疾病均以存在MTC为特征(Jhiang S.M.等人，Oncogene 19，5590，2000)。然而在散发性MTC中，RET突变是体细胞性的，在MEN2患者中，RET突变存在于种系水平。这些突变引起受体的组成型活化，而没有改变其在细胞膜上的定位。在本研究中所用的Ret癌蛋白涉及Cys634(指Ret/MEN2AC634R和Ret/MEN2AC634W)或Met918(指Ret/MEN2BM918T)，并且分别代表了在MEN2A和MNE2B中表达频率最高的Ret癌蛋白。已经在RET/MEN2A(C634R)基因转染的鼠细胞(NIH3T3MEN2A(C634R)细胞)和分别以表达Ret/MEN2A(C634W)和Ret/MEN2B(M918T)为特征的人髓样甲状腺癌细胞系TT和MZ-CRC-1中证明了化合物1的抑制效应(图1、2)。在这些细胞系中观察到癌蛋白酪氨酸磷酸化和表达减少(图1C和2A)。化合物1对Ret/MEN2A和Ret/MEN2B受体自磷酸化的抑制作用与抗增殖作用有关(图1B和2B)。NIH3T3MEN2A(C634R)转染子在暴露于化合物1后回复了它们的转化表型(图1A)。在异种移植了TT肿瘤的裸鼠中已经观察到显著的剂量依赖性抗肿瘤活性口服施用每日剂量50-100mg/Kg(每日两次)后，化合物1的治疗达到80％肿瘤重量抑制(TWI)，而没有产生毒性(图3)。考虑到MTC的攻击性和常规治疗对其无疗效，故所证实的化合物1在控制MTC细胞增殖中的药理学和生物化学效应尤其重要。Met，即肝细胞生长因子受体是以肿瘤发展和转移性生长为特征的浸润过程中所涉及的蛋白酪氨酸激酶(Maulik G.等人，Cytok.Growth FactorRev.13，41，2000)。改变如突变、过度表达或牵涉入自分泌环是激酶组成型活化失控的原因。Met激酶活性失控涉及于多种上皮源性肿瘤的浸袭力。在乳头状甲状腺癌中，Met被频繁地过度表达。图4中所示结果表明在用化合物1处理的乳头状甲状腺癌细胞系TPC-1中，Met自磷酸化作用呈剂量依赖性抑制。在经处理的细胞中，Met蛋白质水平也有所降低。其它涉及自分泌环或新血管形成过程的受体酪氨酸激酶如PDGF-R(Rosenkranz S.和Kazlauskas A.Growth Factors 16，201，1999)和FGF-R1(Powers C.J.等人，Endocr.Rel.Cancer 7，165，2000)在癌生长中起重要作用。在对常规疗法没有响应的肿瘤如神经胶质瘤和黑素瘤中，观察到这些受体的活化失调。图5和6中所示结果表明化合物1对由自分泌刺激(图5A)或由外源性配体(图5B和6A)诱导的受体自磷酸化作用的剂量依赖性抑制。这些效应与受体表达降低有关。化合物1的浓度高于15μM可完全抑制PDGF-R的磷酸化作用。FGF-R3受体酪氨酸激酶的活化突变如染色体异位或点突变导致组成型活性FGF-R3受体失调，其已涉及多发性骨髓瘤和膀胱癌和子宫颈癌(Powers C.J.等人，Endocr.Rel.Cancer 7，165，2000)。化合物1下调在NIH3T3转染子中外源性表达的FGF-R3的酪氨酸自磷酸化本文档来自技高网...

【技术保护点】
化合物１，３－二氢－５，６－二甲氧基－３－［（４－羟苯基）亚甲基］－２Ｈ－吲哚－２－酮或其无毒盐或异构体在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途，所述肿瘤涉及选自Ｍｅｔ、ＰＤＧＦ－Ｒ、ＦＧＦ－Ｒ１、ＦＧＦ－Ｒ３、Ｋｉｔ的酪氨酸激酶或Ｒｅｔ家族癌蛋白。

【技术特征摘要】
IT 2002-7-23 MI02A0016201.化合物1，3-二氢-5，6-二甲氧基-3-[(4-羟苯基)亚甲基]-2H-吲哚-2-酮或其无毒盐或异构体在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途，所述肿瘤涉及选自Met、PDGF-R、FGF-R1、FGF-R3、Kit的酪氨酸激酶或Ret家族癌蛋白。2.根据权利要求1中所述的用途，其中的药物用于治疗表达载有活化的序列突变的RET癌蛋白的肿瘤。3.根据权利要求2中所述的用途，其中RET癌蛋白包括与MEN2相关的突变。4.根据权利要求3中所述的用途，其中活化的序列突变为RET/MEN2A(C634R)、RET/MEN2A(C634W)和RET/MEN2B(M918T)。5.根据权利要求2-4中所述的用途，其中的药物用于治疗髓样甲状腺癌、嗜铬细胞瘤、甲状旁腺增生和肠神经节瘤。6.根据权利要求1中所述的用途，其中的药物用于治疗带有Met活化改变的肿瘤。7.根据权利要求6中所述的用途，其中所述肿瘤源于上皮。8.根据权利要求7中所述的用途，其中的药物用于治疗肾脏肿瘤。9.根据权利要求1中所述的用途，其中的药物用于治疗表达组成型活化Kit的肿瘤。10.根据权利要求9中所述的用途，其中Kit在序列突变或牵涉入自分泌环后被组成型活化。11.根据权利要求9中所述的用途，其中的药物用于治疗胃肠间质肿瘤、小细胞肺癌、白血病或精原细胞瘤。12.根据权利要求1中所述的用途，其中的药物用于治疗涉及PDGF-R的活化失控的肿瘤。13.根据权利要求12中所述的用途，其中所述肿瘤为神经胶质瘤和隆凸性皮肤纤维肉瘤。14.根据权利要求1中所述的用途，其中的药物用于治疗...

【专利技术属性】
技术研发人员：C兰齐，G卡西内利，G库库鲁，MA皮耶罗蒂，F祖尼诺，E门塔，
申请(专利权)人：欧洲细胞医疗有限责任公司，国家肿瘤治疗研究中心，
类型：发明
国别省市：IT[意大利]