本发明专利技术公开了一组抑制肿瘤生长及血管生成的寡聚核酸组合物及其应用。本发明专利技术提供的寡聚核酸组合的主要成分是一种双链RNA，其中：所述双链RNA的第一条链的核苷酸序列如序列表中序列1所示；第二条链的核苷酸序列与所述第一条链的反向互补链具有63.6％以上的同源性。本发明专利技术提供的寡聚核酸组合作为新型小核酸类的抗肿瘤药物，组合中所有的寡聚核酸成分均为化学合成并修饰的寡聚核酸，其特点是不易被降解，有较长的效应半衰期，能用于体外实验，更能用于体内治疗。部分寡聚核酸组合较单一成分有好的抗肿瘤效果。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抑制肿瘤生长及血管生成的的寡聚核酸组合物及其应用。
技术介绍
微小核酸(miRNA)是一类非编码小核酸，在体内广泛表达，调节机体重要的生理 与病理过程。微小核酸与肿瘤的发生、发展和预后密切相关。近年来的研究发现，miRNA在 肿瘤组织和与正常组织间的表达明显不同。miRNA既可以作为原癌基因促进肿瘤的发生发 展，又能作为抑癌基因抑制肿瘤的发生发展，根据miRNA调节肿瘤发生发展的不同机理，将 它们组成不同的配方或将它们与其它抗肿瘤的小干扰RNA(SiRNA)组成不同的配方，将比 单一的miRNA更能有效地治疗肿瘤性疾病。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种寡聚核酸。本专利技术提供的寡聚核酸是一种双链RNA，其中所述双链RNA的第一条链的核苷 酸序列如序列表中序列1所示；第二条链的核苷酸序列与所述第一条链的反向互补链具有 63. 6%以上的同源性。序列1从左至右方向为5’ -3，。上述第二条链的核苷酸序列可以如序列表中序列2或3所示。序列2和3从左至 右方向为3’ -5’。上述寡聚核酸经过如1)或2、修饰得到的寡聚核酸1)对所述寡聚核酸的连接核苷酸的磷酸二酯键进行修饰，优选将所述磷酸二酯键 的氧用硫取代；2)对所述寡聚核酸的核糖的2’_0H的修饰，优选将所述2’_0H用甲氧基或氟取代 或者对所述2’ -OH进行脱氧修饰。表达出上述的寡聚核酸的DNA也属于本专利技术的保护范围之内。本专利技术的另一目的在于提供一种抑制肿瘤生长的药物组合物。本专利技术提供的抑制肿瘤生长的药物组合物的活性成分是寡聚核酸组合物，可以是 如下a)或b)或c)a)由VEGF-siRNA或其修饰体与上述的寡聚核酸组成；b)由PTN-siRNA或其修饰体与上述的寡聚核酸组成；c)由VEGF-siRNA或其修饰体、PTN-siRNA或其修饰体与上述的寡聚核酸组成；所述VEGF-siRNA是双链核苷酸，所述VEGF-siRNA的第一条链的核苷酸序列如序 列表中序列4所示，所述VEGF-siRNA的第二条链的核苷酸序列如序列表中序列5所示；序 列4从左至右方向为5’ _3’，序列5从左至右方向为3’ -5’。所述PTN-siRNA是双链核苷酸，所述PTN-siRNA的第一条链的核苷酸序列如序列 表中序列6所示，所述PTN-siRNA的第二条链的核苷酸序列如序列表中序列7所示；序列6 从左至右方向为5’ -3’，序列7从左至右方向为3’ -5’。所述VEGF-SiRNA的修饰体是经过如下1)或幻修饰得到的物质1)对所述VEGF-siRNA的连接核苷酸的磷酸二酯键进行修饰，优选将所述磷酸二 酯键的氧用硫取代；2)对所述VEGF-siRNA的核糖的2’ -OH的修饰，优选将所述2’ -OH用甲氧基或氟 取代或者对所述2’ -OH进行脱氧修饰；所述PTN-siRNA的修饰体是经过如下1)或幻修饰得到的物质1)对所述PTN-siRNA的连接核苷酸的磷酸二酯键进行修饰，优选将所述磷酸二酯 键的氧用硫取代；2)对所述PTN-siRNA的核糖的2’_0H的修饰，优选将所述2’_0H用甲氧基或氟取 代或者对所述2’ -OH进行脱氧修饰。其中，活性成分a)中，权利要求1-3中任一所述的寡聚核酸与所述VEGF-siRNA或 其修饰体的质量比是(0.5-2) (0.5-2)，优选是1 1;活性成分b)中，权利要求1-3中任一所述的寡聚核酸与所述PTN-siRNA或其修饰 体的质量比是(0.5-2) (0.5-2)，优选是1 1;活性成分c)中，权利要求1-3中任一所述的寡聚核酸与所述VEGF-s iRNA或其修 饰体、PTN-siRNA或其修饰体的质量比是(0. 5-2) (0.5-2) (0.5-2)，优选是1 1 1。上述药物组合物包含上述寡聚核酸分子中的至少一种以及至少一种药学上可接 受的载体。本文所用的“药学上可接受的载体”应当与本专利技术药物组合物中的双链RNA分 子相容。在一个优选实施例中，所述“药学上可接受的载体”是指体内转染试剂，如聚乙烯 亚胺(PEI)，jetPEI (线性聚乙烯亚胺)，脂质体，转铁蛋白，叶酸等。上述的寡聚核酸在制备抑制肿瘤生长的试剂或在制备抑制肿瘤细胞周期蛋白Dl 表达的试剂中的应用也属于本专利技术的保护范围之内。进一步讲，上述试剂可以是上述抑制肿瘤生长的药物组合物。具体地讲，上述肿瘤是肠癌、鼻咽癌、宫颈癌、肝癌、乳腺癌或肺癌。所述寡聚核酸为化学合成，可以进行2'氟代O' _F)、2'甲氧基O' -(Me)At 代(PS)和2'脱氧⑶-deoxy)化学修饰。用化学合成并修饰的上述寡聚核酸分子转染鼻咽癌细胞株CNE、肠癌细胞株 HCT116、乳腺癌细胞株MCF7、宫颈癌细胞株Hela、肝癌细胞株H印G2等肿瘤细胞的实验结果 表明所述寡聚核酸miR-210能有效抑制上述肿瘤细胞的增殖。siPTN也能抑制上述肿瘤细 胞的增殖。siVEGF和siPTN均能抑制肿瘤血管生成。所述寡聚核酸miR-210抑制CCNDl的表达；siVEGF抑制VEGF的表达，而siPTN抑 制PTN的表达。通过上述三种不同的寡聚核酸分子的组合，实现抑制肿瘤的生长和血管生 成的效果。将肿瘤细胞接种于裸鼠，形成肿瘤后用所述寡聚核酸治疗的实验证明所述寡聚核 酸组合能在体内有效抑制肿瘤的生长。作为新型小核酸类的抗肿瘤药物，化学合成并修饰的所述寡聚核酸不易被降解， 有较长的效应半衰期，能用于体外实验，更能用于体内治疗。附图说明图IA为MTT法检测2’ -0Me-miR-210抑制鼻咽癌CNE细胞增殖的柱形图，图IB 为MTT法检测2’ -OMe-siPTN抑制Hela细胞增殖的柱形图。图2为RT-PCR检测2’ -0Me_miR-210#抑制肿瘤细胞CCNDl的表达。图3为RT-PCR检测2 ‘ -OMe-siVEGF抑制肿瘤细胞VEGF的表达。图4为RT-PCR检测2 ‘ -OMe-siPTN抑制肿瘤细胞的PTN表达，泳道1_4分 别为未转染的细胞，转染随机序列的阴性对照(NC)，转染2' -0Me-siPTN24小时，转染 2' -OMe-siPTN 48 小时。图5为2' -OMe寡聚核酸组合治疗鼻咽癌移植瘤5次以后的瘤体积折线图。图6为2' -OMe寡聚核酸组合加治疗鼻咽癌移植瘤6次以后的瘤重柱形图。图7为2' -OMe寡聚核酸组合治疗鼻咽癌移植瘤6次以后肿瘤效果图。具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明，但本专利技术并不限于以下实施例。下述实施例中，如无特殊说明，均为常规方法。实施例1、寡聚核酸的制备本专利技术中所述寡聚核酸序列正义链为5’ -CUGUGCGUGUGACAGCGG CUGA-3' (SEQID No. 1)；反义链为 3' -UUGACACGCACACUGUCGCCGA-5‘序列 (SEQ ID No. 2)或 3，-CACACGCCACCCGUCCCCGACG-5，(SEQ ID No. 3)。 本发 明中 VEGF-siRNA 正义链为 5，-GGAGUACCCUGAUGAGAUCTT-3，(SEQ ID No. 4)； 反义链为 3' -TTCCUCAUGGGACUACUCUAG-5' (SEQ ID No.5) 本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种抑制肿瘤生长的组合物，其活性成分是如下ａ）或ｂ）或ｃ）：ａ）由ＶＥＧＦ－ｓｉＲＮＡ或其修饰体与权利要求３－５中任一所述的寡聚核酸组成；ｂ）由ＰＴＮ－ｓｉＲＮＡ或其修饰体与权利要求３－５中任一所述的寡聚核酸组成；ｃ）由ＶＥＧＦ－ｓｉＲＮＡ或其修饰体、ＰＴＮ－ｓｉＲＮＡ或其修饰体与权利要求７－９中任一所述的寡聚核酸组成；所述ＶＥＧＦ－ｓｉＲＮＡ是双链核苷酸，其第一条链的核苷酸序列如序列表中序列４所示，第二条链的核苷酸序列如序列表中序列５所示；所述ＰＴＮ－ｓｉＲＮＡ是双链核苷酸，其第一条链的核苷酸序列如序列表中序列６所示，第二条链的核苷酸序列如序列表中序列７所示；所述ＶＥＧＦ－ｓｉＲＮＡ的修饰体是经过如下１）或２）修饰得到的物质：１）对所述ＶＥＧＦ－ｓｉＲＮＡ的连接核苷酸的磷酸二酯键进行修饰，优选将所述磷酸二酯键的氧用硫取代；２）对所述ＶＥＧＦ－ｓｉＲＮＡ的核糖的２’－ＯＨ的修饰，优选将所述２’－ＯＨ用甲氧基或氟取代或者对所述２’－ＯＨ进行脱氧修饰；所述ＰＴＮ－ｓｉＲＮＡ的修饰体是经过如下１）或２）修饰得到的物质：１）对所述ＰＴＮ－ｓｉＲＮＡ的连接核苷酸的磷酸二酯键进行修饰，优选将所述磷酸二酯键的氧用硫取代；２）对所述ＰＴＮ－ｓｉＲＮＡ的核糖的２’－ＯＨ的修饰，优选将所述２’－ＯＨ用甲氧基或氟取代或者对所述２’－ＯＨ进行脱氧修饰。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张雅鸥，李建娜，谢伟东，何杰，徐乃寒，张佩琢，
申请(专利权)人：清华大学深圳研究生院，上海吉玛制药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：94
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