“一项铁线莲‘阿拉贝拉’组织培养快繁技术”属于铁线莲“阿拉贝拉”组织培养快繁技术领域。该技术以当年新生枝条带芽茎段为外植体，建立了铁线莲“阿拉贝拉”的再生体系。研究发现，腋芽诱导的最佳培养基是MS+2，4-二氯苯氧乙酸1.0毫克/升+吲哚丁酸0.1毫克/升+蔗糖30克/升，分化率达100％；不定芽增殖的最佳培养基为MS+6-苄基嘌呤0.5毫克/升+吲哚丁酸0.1毫克/升+蔗糖30克/升，增殖系数为3.98；适宜的生根培养基是1/2MS+萘乙酸0.04毫克/升，生根率达89.3％。经过5～7天的开瓶炼苗，以珍珠岩∶泥炭＝1∶3为基质，20天后调查，其移栽成活率达90％。上述发明专利技术技术可应用于铁线莲“阿拉贝拉”的高效快速繁殖，并能实现其工厂化育苗。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及铁线莲‘阿拉贝拉’组织培养快繁技术。
技术介绍
铁线莲‘阿拉贝拉，(Clematis‘Arabella，)隶属于毛茛科(Ranunculaceae)铁 线莲属(Clematis L.),是铁线莲 Clematis ' Integrifolia'与 Clematis iLanujinosa'的杂交品种，原产自英国。该品种植物花型、花序多样，花色丰富，花期长，园艺用途广泛，观赏 价值颇高。‘阿拉贝拉’作为垂直绿化材料，不仅应用于园林领域，而且广泛用于盆栽，切花寸。铁线莲‘阿拉贝拉’观赏价值较高，应用前景广，但却因其种子繁殖困难，推广速度 慢。目前我国还没有研究出它的快繁技术，该品种仍需从国外大量进口，限制了 ‘阿拉贝拉’ 在我国的推广和应用，同时也消耗掉我国大量外汇。所以，研究‘阿拉贝拉’快繁技术极其必要。铁线莲品种丰富，但至今对于铁线莲的组织培养研究并不多，泽仁旺姆利用甘青 铁线莲的种子长出的幼苗进行了不定芽和不定根的生成；张启香找出了 ‘Multi-Blue’的 最佳外植体为茎尖；而张涛诱导出重瓣铁线莲的愈伤，但没有诱导不定芽。本技术利用铁 线莲‘阿拉贝拉’当年新生枝条带芽茎段，进行组织培养，诱导腋芽的发生，促进不定芽的生 成，再诱导其生根。通过人工配制不同营养成分和激素调控，在保留‘阿拉贝拉’母体花色 艳丽，花型大等特点的基础上，形成成千上万小植株，短时间内获得大量试管苗，获得的幼 苗存可放在人工控制的培养室内，可实现一年四季工厂化无性系育苗。因此利用组织培养 技术繁殖铁线莲‘阿拉贝拉’，不仅为推广铁线莲‘阿拉贝拉’提供了一个快速的途径，也为 其工厂化生产提供帮助，应用前景远大。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种可以实现快速和大量繁殖铁线莲‘阿拉贝拉’的组织培 养技术。本专利技术提供的铁线莲‘阿拉贝拉’组织培养快繁技术，包括以下几个步骤1、腋芽诱导将当年新生枝条带芽茎段，接种到诱导培养基，该培养基含有1/4MS、1/2MS、MS常 规基本培养基、2，4_ 二氯苯氧乙酸1. 0毫克/升、吲哚丁酸0. 1毫克/升、蔗糖30克/升。 培养20天后，待培养物诱导出芽原基后，进入以下第2步。2、不定芽增殖将第1步所得的培养物转移到增殖培养基上，增殖培养基含有MS常规基本培养 基、6-苄基嘌呤0. 5-1. 5毫克/升、吲哚丁酸0. 05-0. 15毫克/升、蔗糖20-40克/升。培 养20天左右，待小苗长到常规生根程序所需高度时，进入以下第3步。3、生根将第2步所得的无根小苗齐根取下，转至常规生根培养基中，生根基本培养基含 有1/4MS，1/2MS，MS常规基本培养基、萘乙酸0. 05毫克/升，培养20天左右，待小苗根部长 出短根，即可进行根的伸长，根伸长培养基含有1/2MS常规基本培养基、萘乙酸0-1. 0毫克 /升或吲哚丁酸0. 03-1. 0毫克/升、蔗糖30克/升。35天左右，小苗长出4-5根主根时， 进入以下第4步。4、移栽与炼苗先把封口膜打开，在培养室内炼苗1周左右，取出小苗，洗净小苗根部的琼脂，移 栽到珍珠岩与泥炭以1 3混合的基质内，放入温室大棚进一步炼苗10-15天。其间需要 喷洒1/10MS大量元素营养液以利于缓解蒸腾失水，并补充植物营养。本专利技术利用带腋芽的茎段做外植体进行直接器官的发生，大大提高了组织培养的 快繁速率，同时用基本培养基添加微量激素进行腋芽的诱导，能够快速诱导腋芽，并促使其 伸长。腋芽诱导后，不宜在原培养基上长期培养，否则诱导出的芽容易伸长生长，因此要转 接MS+6-苄基嘌呤0. 5毫克/升+吲哚丁酸0. 1毫克/升+蔗糖30克/升培养基上，以利 于不定芽的分化和伸长。生根阶段，本专利技术采用了先诱导再促进伸长的方法，首先，把伸长 到适合常规生根高度的小苗，转移到1/2MS+萘乙酸0. 03毫克/升培养基中，诱导不定根的 生成，再转移到促进根伸长1/2MS+萘乙酸0. 04毫克/升培养基中，此方法大大提高了根诱 导和伸长的速率。因此采用此专利技术的培养基有如下优点腋芽诱导启动快，芽分化系数高，苗伸长 快、生长一致且健壮，生根率高、根长且壮，生长周期短，基本无畸形苗。四附图说明图12，4_D和IBA诱导产生的腋芽图沈-BA和IBA激素处理后的增殖芽图3NAA诱导产生的根五具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术做进一步说明。实施例1、取材以铁线莲‘阿拉贝拉’当年生嫩枝作为外植体进行培养，要求新生枝生长 健壮，叶片具有母本的优良性状，而且有饱满而未萌发的腋芽。2、材料消毒方法除掉多余的叶片，只保留茎段，用酒精脱脂棉轻轻擦洗去除外植 体上的绒毛，流水冲洗1小时。在无菌条件下，用75%酒精浸泡30秒，0. 升汞处理3-5 分钟，无菌水冲洗5 6次。3、接种在超净工作台内，无菌滤纸吸取残余水分后，将茎段两头切去一小段，以 减少升汞的毒害。然后将其切成1 1.5cm长的茎段，然后接种到外植体诱导培养基。诱 导培养基组成为MS+2，4- 二氯苯氧乙酸1. 0毫克/升+吲哚丁酸0. 1毫克/升+蔗糖30克/升。4、不定芽丛增殖将带腋芽茎段接种到诱导培养基上20天后就可看到腋芽萌发 长高(图1)，然后将其转移到增殖培养基上。增殖培养基组成为MS+6-苄基嘌呤0. 5毫克4/升+吲哚丁酸0. 1毫克/升+蔗糖30克/升。5、生根当分化出的丛生芽(图幻长到常规生根所需高度时，用剪刀单个剪下，接 种到生根培养基中。生根培养基的组成为1/2MS+萘乙酸0. 03毫克/升。为使诱导出的根能更好的伸长生长，将生根小苗转移到根伸长培养基中，根伸长 培养基的组成为1/2MS+萘乙酸0. 04毫克/升(图3)。培养温度及光照条件温度为25士 1°C ；光照为2000勒克斯，16小时/天。6、移栽与炼苗生根小苗生长35天左右后，根系比较发达，一般会长出4-5条主根 时，即可进行移栽。先把封口膜打开，在培养室内炼苗1周左右，取出小苗，洗净小苗根部的琼脂，移 栽到珍珠岩与泥炭以1 3混合的基质内，放入温室大棚进一步炼苗10-15天。其间需要 喷洒1/10MS大量元素营养液以利于缓解蒸腾失水，并补充植物营养，以防止叶片发黄。权利要求1.一项铁线莲‘阿拉贝拉’组织培养快繁技术，其特征在于以下四个部分组成(1)腋芽诱导将当年新生枝条带芽无菌茎段，接种到诱导培养基，该培养基含有 1/4MS、1/2MS、MS常规基本培养基、2，4- 二氯苯氧乙酸1. 0毫克/升、吲哚丁酸0. 1毫克/ 升、蔗糖30克/升，培养20天后，待培养物诱导出芽原基，即可开始下一步骤的培养；(2)不定芽增殖将第1步所得的培养物转移到增殖培养基上，增殖培养基含有MS常 规基本培养基、6-苄基嘌呤0. 5-1. 5毫克/升、吲哚丁酸0. 05-0. 15毫克/升、蔗糖20-40 克/升，培养20天左右，进入以下第3步；(3)生根将第2步所得的无根小苗齐根取下，转至常规生根培养基中，生根基本培养 基含有1/4MS，1/2MS，MS常规基本培养基、萘乙酸0. 03毫克/升，培养20天左右，待小苗根 部长出短根，即可进行根的伸长，根伸长培养基为1/2MS常规基本培养基、萘乙酸0-1. 0毫 克/升或吲哚丁酸0. 03-1. 0毫克/升、蔗糖30克本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一项铁线莲‘阿拉贝拉’组织培养快繁技术，其特征在于以下四个部分组成：（１）腋芽诱导：将当年新生枝条带芽无菌茎段，接种到诱导培养基，该培养基含有１／４ＭＳ、１／２ＭＳ、ＭＳ常规基本培养基、２，４－二氯苯氧乙酸１．０毫克／升、吲哚丁酸０．１毫克／升、蔗糖３０克／升，培养２０天后，待培养物诱导出芽原基，即可开始下一步骤的培养；（２）不定芽增殖：将第１步所得的培养物转移到增殖培养基上，增殖培养基含有ＭＳ常规基本培养基、６－苄基嘌呤０．５－１．５毫克／升、吲哚丁酸０．０５－０．１５毫克／升、蔗糖２０－４０克／升，培养２０天左右，进入以下第３步；（３）生根：将第２步所得的无根小苗齐根取下，转至常规生根培养基中，生根基本培养基含有１／４ＭＳ，１／２ＭＳ，ＭＳ常规基本培养基、萘乙酸０．０３毫克／升，培养２０天左右，待小苗根部长出短根，即可进行根的伸长，根伸长培养基为：１／２ＭＳ常规基本培养基、萘乙酸０－１．０毫克／升或吲哚丁酸０．０３－１．０毫克／升、蔗糖３０克／升，３５天左右，即可移栽长成正常的铁线莲植株；（４）移栽与炼苗：待第３步小苗长出４－５根主根时，先把封口膜打开，在培养室内炼苗１周左右，取出小苗，洗净小苗根部的琼脂，移栽到珍珠岩与泥炭以１∶３混合的基质里，放入温室大棚进一步炼苗１０－１５天，其间需要喷洒１／１０ＭＳ大量元素营养液以利于缓解蒸腾失水，并补充植物营养。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：季孔庶，仵丹丹，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：84
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