一种叶片组织自由基测定的原位显色和定量的方法技术

本发明专利技术公开了一种叶片组织自由基测定的原位显色和定量的方法，属于叶片自由基测定领域。其步骤为：第一步：采集植物新鲜叶片，快速漂洗干净；第二步：叶片自由基显色反应，1)超氧阴离子自由基：将叶片置于真空抽滤装置内，加入含SOD酶和MnCl2的溶液，抽真空，效果以叶片表面冒出明显气泡为宜；2）过氧化氢自由基：将叶片置于真空抽滤装置内，加入含抗坏血酸和mm过氧化氢酶的溶液，抽真空，效果以叶片表面冒出明显气泡为宜。第三步：脱除叶片叶绿素，清洗叶片并扫描成像用于软件分析定量。本发明专利技术能够直观地显示叶片组织中O2.-和H2O2的非均匀分布状况，可实现较为准确的半定量，成本低，操作简单，易推广。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种叶片组织的原位显色和定量的方法，更具体的说是一种叶片组织 自由基测定的原位显色和定量的方法。
技术介绍
植物组织的光合作用、呼吸、氧化磷酸化、脂肪酸的-β_氧化以及许多氧化酶的代 谢过程均可产生活性氧自由基(统称为R0S)。愈来愈多的研究报道，ROS是植物体代谢的正 常部分，可作为信号分子诱导植物体对环境胁迫的应激响应，而过量ROS的积累却能诱导 膜脂质过氧化、蛋白分子的氧化修饰或降解，以及DNA分子的氧化损伤等。因此，研究自由 基的产生、积累和代谢的变化，能够反映植物体在逆境条件下的氧化胁迫和应激响应水平， 可为环境污染物的早期诊断提供预警信号。因此，准确测定植物组织ROS的产生和积累水 平具有十分重要的理论意义和应用前景。植物体内的ROS通常存在超氧阴离子自由基(02_ _)、过氧化氢(H2A )、羟基自由基 (0Η )、单线态氧(1O2)等类型，其中产生最早的是02__，氧化能力最强的是0Η。这些ROS类 型可以形成一个复杂的反应网络，通过协同作用相互转化。例如，02__和H2O2可通过!^nton 反应、Haber-Weiss反应、Winterbourn反本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种叶片组织自由基测定的原位显色和定量的方法，其步骤为：第一步：采集植物新鲜叶片，快速漂洗干净；第二步：叶片自由基显色反应；第三步：脱除叶片叶绿素，清洗叶片并扫描成像用于软件分析定量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓蓉，姜锦林，汪承润，田园，耿金菊，顾雪元，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：84