羽扇豆球蛋白用于治疗Ⅱ型糖尿病的用途制造技术

本发明专利技术公开了羽扇豆球蛋白γ或与羽扇豆球蛋白γ具有５０％以上同源性的蛋白质用于制备治疗Ⅱ型糖尿病的药物、食品补充剂或食品的用途，含有羽扇豆球蛋白γ的药物组合物或营养组合物，羽扇豆球蛋白γ作为治疗剂、特别是作为降血糖剂的用途。羽扇豆球蛋白γ可以以纯净的形式或以提取物、混合物或浓缩物的形式使用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及羽扇豆球蛋白用于治疗II型糖尿病的用途。
技术介绍
羽扇豆(Lupinus albus)是豆科一年生草本植物，自古以来它就生长在地中海和中东地区，它的种子既可以用于营养目的(由于它们不同寻常的蛋白质含量)又可以在传统医学中用作驱虫药和抗寄生物药。羽扇豆的种子含有毒性喹诺里西啶环(quinolizidine)类生物碱如白羽扇豆碱、13-氧-白羽扇豆碱、蔷薇苷及其衍生物以及甲基-白羽扇豆宾(albin)，已知它们可以对中枢神经系统产生致抑郁和致麻痹的作用。所述生物碱可通过在水中浸渍而除去，它们是羽扇豆种子苦味的来源，在野生的羽扇豆种子中大量存在，但是在所谓的甜羽扇豆(Lupinus albus)中含量却很少。羽扇豆种子中含量最高的蛋白质成分是球蛋白，占总蛋白含量的87％。所述成分包括可溶于稀生理盐水的水溶性蛋白质(Duranti等，Phytochemistry，20，2071-2075，1981)。羽扇豆球蛋白γ约占总球蛋白的6％。由凝胶滤过法测定的蛋白质表观分子量约为199,000Da(Duranti等，凝集素生物学、生物化学、临床-生物化学-第十一卷(Van Driesche E，Rouge P，Beeckams S，Bog-Hahsen TC编)1997，Textop Publ.，Hellerup，Denmark，pp.881-85，1997中)。羽扇豆球蛋白γ由表观分子量为47,000Da的单体组成。将该单体还原的结果表明它由两条通过一个二硫键桥相连的多肽链组成，表观分子量分别为30,000Da和17,000Da(Restani等，Phytochemistry，20，2077-2083，1981)。在天然条件下和变性条件下获得的分子质量值已表明羽扇豆球蛋白γ具有四聚体结构。已发现羽扇豆球蛋白γ的轻亚基不含有共价键合的碳水化合物，而重链则是糖基化的。它的氨基酸组成与大多数羽扇豆储备蛋白显著不同(Restani等，1981，同上)。实际上，羽扇豆球蛋白γ含有许多硫酸化的氨基酸和相当数量的赖氨酸、苏氨酸和色氨酸，已证明它对内源性和外源性蛋白酶的蛋白水解作用具有很强的抵抗力(Duranti，Narhung，30，271-274，1986)。对于该蛋白氨基酸序列的认识(Scarafoni等，Biochim.Biophys.Acta1519，147-151，2001)使得我们可以排除它与储备蛋白、催化蛋白或结构蛋白以及其它来源的蛋白的任何序列同源性。羽扇豆球蛋白γ显示出与其它蛋白如大豆BG7S(70％同源性)(Kagawa等，Febs Letters，226，145-149，1987；Komatsu等，Biosci.Biotech.Biochem.58，1705-1706，1994)和功能尚待澄清的胡萝卜种子中的糖蛋白EDGP(58％同源性)(Satoh等，Planta，188，432-438，1992)具有同源性或相似性。Horvath描述了羽扇豆全提取物用于降血糖的用途(J.Pharmacol.(Amer.)，38，303，1930)，并提出在轻度至中度糖尿病中用它来代替胰岛素。随后Clementi和Torrisi(Boll.Soc.It.Biol.Sper.，9，1004，1935e Arch.Fisiol.，34，290，1935)鉴定了生物碱白羽扇豆碱中的降血糖活性成分，但是它的作用却很短暂。最近Mario Villaroel等在Archivos Latinoamericanos de Nutrición，Vol.46，N.3，1996，pp.234-237中也描述了羽扇豆粉的降血糖作用，该文表明含有羽扇豆粉的李子酱可以用于糖尿病患者的食物疗法中。就羽扇豆球蛋白γ而言，Duranti等(Phytochem.56(6)，529-533，2001)描述了它与不同金属的相互作用能力。在中性pH中，羽扇豆球蛋白γ与Zn2+离子的亲和力最强。而且，羽扇豆球蛋白γ还与复合了Zn2+和Ni2+的亲和色谱柱相结合；结合的蛋白可以使用pH低于6或含有EDTA或咪唑的缓冲试剂洗脱。羽扇豆球蛋白γ在金属亲和柱中的保留曲线与组氨酸侧基(pKa＝6)的滴定曲线一致。然而迄今为止，尚未见羽扇豆球蛋白γ用于治疗II型糖尿病的报道。根据本专利技术，已发现羽扇豆球蛋白γ以及与羽扇豆球蛋白γ具有50％以上同源性的蛋白质可产生显著的降血糖作用。与羽扇豆球蛋白γ具有50％以上同源性的已知蛋白质的实例有大豆BG7S(70％同源性)(Kagawa等，Febs Letters，226，145-149，1987；Komatsu等，Biosci.Biotech.Biochem.58，1705-1706，1994)和EDGP(58％同源性)(Satoh等，Planta，188，432-438，1992)。还证明对大鼠施用葡萄糖后，羽扇豆球蛋白γ和同源蛋白具有很强的降低血浆曲线作用。因此本专利技术涉及羽扇豆球蛋白γ以及与羽扇豆球蛋白γ具有50％以上同源性的蛋白质用于制备治疗II型糖尿病的药物、食品补充剂或食品的用途。本专利技术还涉及含有羽扇豆球蛋白γ或与羽扇豆球蛋白γ具有50％以上同源性的蛋白质的药物组合物或营养组合物。羽扇豆球蛋白γ优选基本上纯净的蛋白质或含有所述羽扇豆球蛋白γ的羽扇豆蛋白的混合物或提取物。基本上纯净是指浓度通常应高于80重量％，优选高于90％。羽扇豆球蛋白γ可通过图3所示的工艺获得。根据所述方法，将羽扇豆压碎，将核仁去皮并制成薄片，用溶剂提取去油。然后将已去油的薄片在酸性条件下通过提取步骤A获得提余物A和酸性提取物A，再进行进一步处理。从提余物A开始，进行以下步骤B)在轻度碱性条件下对提余物A连续进行两次提取，获得提余物B和提取物B，弃去提余物B；C)用酸处理提取物B以沉降蛋白质；D)将蛋白质分离，除去固体蛋白质，澄清上清液(SP)待用于后续步骤。同时从酸提取步骤A得到的酸性提取物A开始，进行以下步骤E)净化提取物A，获得澄清的提取物(AEP)；F1)对AEP进行超滤，获得F1-渗余物；F2)对合并SP和F1-渗余物所得的混合物进行透析过滤，获得渗余物DFP和F2-渗透物(弃去)；G)将DFP进行巴斯德灭菌和喷雾干燥后获得NCGP(天然羽扇豆球蛋白γ)。以下报告了羽扇豆球蛋白γ的药理学实验结果。在大鼠中与二甲双胍(对照标准品)相比较测试了羽扇豆球蛋白γ的降血糖活性。实施例1使用起始体重为275-300g的雄性CD种大鼠。将动物饲养于模克隆笼中，环境中具有自动控制的灯光(12小时光照/12小时黑暗)，温度(21±1℃)，湿度(60±5％)。羽扇豆球蛋白γ通过实施例2中报告的方法制备。向100只大鼠(分为5组，每组20只)预先施用(时间-30分钟)以下物质第1组载体(1％羧甲基纤维素[CMC]；2ml/kg口服)第2组羽扇豆球蛋白γ(50mg/kg口服，在1％CMC中的溶液)第3组羽扇豆球蛋白γ(100mg/kg口服，在1％CMC中的溶液)第4组羽扇豆球蛋白γ(200mg/kg口服，在1％CMC中的溶液)第5组二甲双胍(50mg/kg口服，在1％CMC中的溶液)随后以口服途径给予(时间0分钟)全部大鼠葡萄糖(2g/kg)以升高本文档来自技高网...

【技术保护点】
羽扇豆球蛋白γ或与羽扇豆球蛋白γ具有５０％以上同源性的蛋白质用于制备治疗Ⅱ型糖尿病的药物、食品补充剂或食品的用途。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】IT 2003-2-11 MI2003A0002371.羽扇豆球蛋白γ或与羽扇豆球蛋白γ具有50％以上同源性的蛋白质用于制备治疗II型糖尿病的药物、食品补充剂或食品的用途。2.根据权利要求1的羽扇豆球蛋白γ的用途。3.权利要求1的用途，其中所述与羽扇豆球蛋白γ具有50％以上同源性的蛋白质选自大豆BG7S或胡...

【专利技术属性】
技术研发人员：P莫拉佐尼，M杜兰蒂，
申请(专利权)人：因德纳有限公司，
类型：发明
国别省市：IT[意大利]