分离辅酶Q10的提纯方法技术

本发明专利技术涉及一种辅酶Ｑ↓［１０］的提纯方法，所述方法包括将含有辅酶Ｑ↓［１０］的上柱液通过硅胶柱层析；再用正己烷与低级醇、或正己烷与低级酮的混合溶剂进行洗脱得到洗脱液；洗脱液减压浓缩至干，加乙醇结晶得到辅酶Ｑ↓［１０］。通过此种洗脱方式，大大降低了后续溶剂的回收工作的困难程度，同时辅酶Ｑ↓［１０］的有效组分含量得到提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种分离辅酶Qu)的提纯方法，具体地说涉及一种用 硅胶层析法对辅酶Qu)进行提纯的方法。
技术介绍
辅酶Qn)又称泛醌，是一种脂溶性醌类化合物，它在自然界中分 布广泛，主要存在于酵母、植物叶子、种子及动物心、肝和肾的细胞 中。它是细胞自身的天然抗氧化剂，是细胞代谢的天然激活剂。且经 多年来的研究表明，辅酶Qu)是一种良好的心脏病辅助药物，在心脏 外科手术中对心脏起保护作用，且无任何副作用。因此，在临床及保 健、美容护肤等方面有着极为广泛的用途，越来越受到人们的重视。目前，辅酶Qu)的制备方法有3种动植物组织提取法、化学合 成法和微生物发酵法。动植物组织提取法主要是指从动物的脏器或一 些植物的组织中提取产品，但这种方法由于受原料来源限制且收率不 高，因此产品成本高，价格昂贵，规模化生产受到制约。化学合成法 目前主要是采用茄尼醇和3， 4， 5-三甲氧基甲苯为原料合成辅酶Qn)， 但由于茄尼醇制得的烯丙基化试剂是顺、反异构体的混合物，活性不 强需分离，且副产物含量多，提纯成本也很高，因此这种方法的应用 也受到了限制。而利用微生物发酵生产辅酶Qu)就比较经济，易于大 规模生产、分离纯化，且产品活性好，易被人体吸收，是一种最有前 途的方法。在微生物发酵法生产辅酶Q1Q的过程中，目前一般的提纯工艺如 下发酵液经过滤后，滤渣用亲水性有机溶剂浸泡。浸泡液经过加热 减压浓縮后，再加疏水性有机溶剂和水进行萃取，分层后，辅酶Qu) 进入疏水性有机溶剂层。分离出这层溶剂，将它上硅胶柱，后用正 己烷洗涤，再用混合溶剂洗脱，洗脱液浓縮干后，加乙醇结晶，过滤得辅酶Qu)粗品。按以上流程生产出来的辅酶Qn)质量好，收率也高，因此这方法 被证明是行之有效的。有一点不足的是，在层析这一步，现在一般用 的洗脱剂为正己烷和另外一种疏水性有机溶剂如苯、乙醚和石油醚 等，这些溶剂的特点一个么是毒性较强，容易对人的健康及环境造成 影响；另外一个就是它们不溶于水，且与正己烷互溶性后，这样它们 就不容易分离，对后面的溶剂回收工作造成较大的困难，本专利技术就是 提供了 一种改变这种状况的方法。
技术实现思路
本专利技术提供了一种用各种混合溶剂层析法来对辅酶QK)进行分离纯化的方法。根据本专利技术，所述方法包括-(1) 将含有辅酶Qu)的上柱液通过硅胶柱层析；(2) 再用正己烷与低级醇、或正己烷与低级酮的混合溶剂进行 洗脱得到洗脱液；(3) 洗脱液减压浓縮至干，加乙醇结晶得到辅酶Qu)。 其中，含有辅酶Qu)的上柱液通过如下步骤制得(1) 辅酶Qu)发酵液通过过滤去除液体，得到湿的滤渣；(2) 湿的滤渣用无水乙醇在55 80。C的条件下浸泡，过滤得到浸泡液；(3)浸泡液在经过减压浓縮后，加一定量的水和正己烷进行萃 取，分出正己垸层以得到含有辅酶Qn)的上柱液。根据本专利技术，最好，含有辅酶Qn)的上柱液通过孔径为lnm的滤 芯过滤。根据本专利技术，最好，上柱流速控制在每小时1.5 2倍的柱体积。根据本专利技术，最好，通过硅胶柱层析得到的上柱液通过用量为1 倍柱体积、洗涤流速为每小时1.5 2倍柱体积的正己烷进行洗涤。根据本专利技术，最好，混合溶剂包括含2~3% (V/V)甲醇的正己垸 溶液、含1.5~2.5% (V/V)乙醇的正己烷溶液、或者含0.5 1% (V/V) 丙酮的正己垸溶液，洗脱流速为每小时0.5~1.5倍柱体积。根据本专利技术，最好，湿的滤渣用无水乙醇在65'C的条件下浸泡至 少两次。根据本专利技术，最好，无水乙醇的体积为湿的滤渣重量的6 7倍。 根据本专利技术，最好，浸泡液经过减压浓縮，得到的浓縮液的体积 为原体积的1/3 1/4。根据本专利技术，最好，加入的水与正己烷的体积为浓縮液体积的1/5， 并且，水正己垸的体积比为l: 1。根据本专利技术，最好，洗脱时采用一种浓度的溶剂洗到底；或者， 采用先低浓度的溶剂洗一定体积，再用高浓度的溶剂洗脱到底。根据本专利技术，最好，所述混合溶剂中甲醇、乙醇、丙酮或正己烷 的含量都要在99%以上。本专利技术所提供的工艺流程具体描述如下。首先是上柱液的获得。 辅酶Qu)发酵液经过过滤除去液体，得到湿的菌体，加入湿菌体重量 的6~7倍(V/W)体积的乙醇，在55 80。C的条件下搅拌30分钟后 过滤，得到浸泡液，浸泡液经过减压浓缩到原体积的1/3~1/4，分别加入浓縮液体积的1/5体积的水与正己垸，进行萃取，分离出正己烷 层，这样就得到了上柱液。将上柱液上硅胶层析柱，流速为每小时 1.5 2倍柱体积，上完后用1倍柱体积的正己垸洗涤，流速为每小时 1.5 2倍柱体积。接下来可用不同类型的溶剂混合液来洗脱，分别是含2~3% (V/V)甲醇的正己垸溶液、含1.5~2.5% (V/V)乙醇的正己垸溶液、 含0.5~1% (V/V)丙酮的正己垸溶液，洗脱流速都为每小时0.5~1.5 柱体积。洗脱时可以是一种浓度洗到底，也可以是先低浓度，再高浓 度洗。所用混合溶剂中甲醇、乙醇、丙酮或正己垸的含量都要在99% 以上。洗脱液经过减压浓縮去溶剂后加乙醇结晶，得到辅酶Qu)粗品。通过本专利技术得到的辅酶Qk)的有效组分得到提高，粗品经HPLC 测定，其峰面积比例可以达到98%以上。同时溶剂的回收工作比较简 单，先用水将两种溶剂分开，再用简单的蒸馏就可以将亲水性溶剂分 离出来。通过此种洗脱方式，大大降低了后续溶剂的回收工作的困难 程度，同时辅酶Qu)的有效组分含量得到提高。具体实施例方式通过以下实例来对本专利技术作进一步具体说明，但并不仅限于以下 实施例和实施例中的工艺参数范围。实施例l辅酶Qu)发酵液20L，效价1672|ig/ml，经过过滤出去液体，得 湿菌体3.2kg，加20L无水乙醇，在55。C条件下搅拌30分钟，过滤 得滤液20.5L，效价796(ig/ml。然后照同样方法再浸泡一次，得滤液 20.2L，效价684吗/ml。混合两次的浸泡液，效价740吗/ml，体积40.7L，在7(TC条件下真空浓縮到12L，力n水2.5L、正己垸2.5L，搅拌10分 钟，静置分层24小时。分离出正己烷层，得上柱液2.5L,效价 11608^g/ml。实施例2辅酶Qu)发酵液20L，效价1672pg/ml，经过过滤出去液体，得 湿菌体3.2kg，加20L无水乙醇，在65。C条件下搅拌30分钟，过滤 得滤液20.5L，效价842pg/ml。然后照同样方法再浸泡一次，得滤液 20.2L，效价726吗/ml。混合两次的浸泡液，效价780吗/ml，体积40.7L, 在70。C条件下真空浓縮到12L，力卩水2.5L、正己垸2.5L，搅拌10分 钟，静置分层24小时。分离出正己烷层，得上柱液2.5L,效价 12108pg/ml。实施例3辅酶Qu)发酵液20L，效价1672pg/ml，经过过滤出去液体，得 湿菌体3,2kg，加40L无水乙醇，在80。C条件下搅拌30分钟，过滤 得滤液40.5L，效价752[ig/ml。在70。C条件下真空浓縮到12L，加水 2.5L、正己烷2.5L，搅拌10分钟，静置分层24小时。分离出正己烷 层，得上柱液2.5L，效价11808吗/ml。实施例4如实施例1~3方法得到的上柱液1000ml，效价11926pg/ml，通 过孔径为lpm的滤芯过滤后上硅胶柱本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离辅酶Ｑ↓［１０］的提纯方法，所述方法包括：　（１）将含有辅酶Ｑ↓［１０］的上柱液通过硅胶柱层析；　（２）再用正己烷与低级醇、或正己烷与低级酮的混合溶剂进行洗脱得到洗脱液；　（３）洗脱液减压浓缩至干，加乙醇结晶得到辅 酶Ｑ↓［１０］。

【技术特征摘要】
1、一种分离辅酶Q10的提纯方法，所述方法包括(1)将含有辅酶Q10的上柱液通过硅胶柱层析；(2)再用正己烷与低级醇、或正己烷与低级酮的混合溶剂进行洗脱得到洗脱液；(3)洗脱液减压浓缩至干，加乙醇结晶得到辅酶Q10。2、 如权利要求1所述的提纯方法，其中，含有辅酶Qu)的上柱 液通过如下步骤制得(1) 辅酶Qn)发酵液通过过滤去除液体，得到湿的滤渣；(2) 湿的滤渣用无水乙醇在55 80。C的条件下浸泡，过滤得到 浸泡液；(3) 浸泡液在经过减压浓縮后，加入水和正己烷进行萃取，分 出正己烷层以得到含有辅酶Qu)的上柱液。3、 如权利要求1所述的提纯方法，其中，含有辅酶Qu)的上柱液 通过孔径为lpm的滤芯过滤。4、 如权利要求1所述的提纯方法，其中，上柱流速控制在每小时 1.5 2倍的柱体积。5、 如权利要求1所述的提纯方法，其中，通过硅胶柱层析得到的 上柱液通过用量为1倍柱体积、洗涤流速为每小时1.5~2倍柱体积的 正己烷进行洗涤。6、 如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢伟良，周苗，
申请(专利权)人：浙江医药股份有限公司新昌制药厂，
类型：发明
国别省市：33[中国|浙江]