经修饰环孢菌素用于治疗HCV疾病的用途制造技术

公开了在预防或治疗丙型肝炎感染中具有有用性质的非免疫抑制性结合亲环蛋白的环孢菌素，例如文中定义的式Ⅰ、Ⅰａ或Ⅱ的环孢菌素。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及非免疫抑制性环孢菌素的新用途。环孢菌素包含一类一般具有药学，特别是免疫抑制和抗炎活性的结构独特、环状的聚-N-甲基化十一肽。第一种分离的环孢菌素为天然存在真菌代谢物环孢素，也已知为环孢菌素A。环孢菌素A通过阻断IL-2的转录起始作用干扰T细胞活化过程已非常确实。已经显示环孢菌素A与称为亲环蛋白的17kD胞质蛋白质形成复合体，亲环蛋白在许多细胞类型中发生且显示与参与蛋白质折叠的一种酶肽基-脯氨酰顺式-反式异构酶相同。然而，发现结合亲环蛋白对免疫抑制活性是必需的但不是充分标准。环孢菌素A/亲环蛋白复合体也可与属于磷酸酶超家族的称为钙依赖磷酸酶(CN)的细胞蛋白质结合。该结合消除了它的磷酸酶活性，导致转录因子NF-AT的沉默。CN/NF-AT途径的抑制是环孢菌素A介导的免疫抑制的基本机制。已经鉴定与亲环蛋白强烈结合但不具有免疫抑制的环孢菌素。在混合淋巴细胞反应(MLR)中一种环孢菌素的活性为环孢菌素A的不超过5％，优选不超过2％时，认为该环孢菌素为非免疫抑制的。混合淋巴细胞反应通过T.Meo在“Immunological Methods”L.Lefkovits和B.Peris，Eds.，Academic Press，N.Y.pp.227-239(1979)中进行描述。来自Balb/c小鼠(雌性，8-10周)的脾细胞(0.5×106)与0.5×106个经照射(2000拉德(rad))或经丝裂霉素C处理的来自CBA小鼠(雌性，8-10周)的脾细胞共孵育5天。经照射的同种异体细胞在Balb/c脾细胞中诱导增殖反应，所述增殖反应可通过经标记前体掺入到DNA中进行测定。由于刺激细胞是经照射的(或经丝裂霉素C处理的)，它们对Balb/c细胞增殖不反应但保持它们的抗原性。在平行实验中，在MLR中检测化合物的IC50与平行实验中环孢菌素A的IC50进行比较。此外，非免疫抑制性环孢菌素缺乏抑制CN及下游NF-AT途径的能力。EP 0 484 281 A1公开了非免疫抑制性环孢菌素在治疗AIDS或AIDS相关疾病中用途。现在令人惊讶的发现与亲环蛋白结合的非免疫抑制性环孢菌素对丙型肝炎病毒(HCV)具有抑制作用。已认为已鉴定为非甲、非乙型肝炎的主要病因的HCV的持续感染与肝病如慢性肝炎、肝硬化或肝细胞癌密切相关。这些肝病的发展是主要的公共卫生问题。有效的抗HCV治疗限制在用干扰素或干扰素与利巴韦林组合的治疗。然而，由于不能自约半数用这些已知活性剂治疗的HCV患者中清除病毒，所以仍强烈需要备选抗HCV活性剂。因此，本专利技术提供了非免疫抑制性结合亲环蛋白的环孢菌素在预防或治疗丙型肝炎感染或HCV诱导疾病中的用途。丙型肝炎感染或HCV诱导疾病为例如慢性肝炎、肝硬化和肝癌，例如肝细胞癌。非免疫抑制性结合亲环蛋白的环孢菌素也可作为例如预防性治疗HCV感染母亲所生新生儿或暴露于所述病毒的卫生保健人员应用，或预防性治疗移植受者，例如器官或组织移植受者，例如肝移植受者应用以清除移植后可能的HCV感染的再次发生。如果在通过Quesniaux在Eur.J.Immunol.1987 17 1359-1365中描述的竞争ELISA试验中，环孢菌素与人重组亲环蛋白结合为环孢菌素A与亲环蛋白结合的至少五分之一，那么认为环孢菌素结合亲环蛋白。在这个试验中，在亲环蛋白与经包被的BSA-环孢菌素A孵育期间，加入欲进行试验的环孢菌素且计算无竞争剂时得到对照反应的50％抑制的浓度(IC50)。结果以结合率(BR)表达，所述BR为测试化合物的IC50与环孢菌素A自身的同时进行试验中IC50比率的以10为底数的对数。因此BR为1.0表明测试化合物对人亲环蛋白的结合为环孢菌素A的十分之一，且负值表明结合强于环孢菌素A。对HCV具有活性的环孢菌素的BR为0.7以下，优选等于或低于零。非免疫抑制性结合亲环蛋白的环孢菌素的实例包括例如式I的化合物。 其中W为MeBmt、二氢-MeBmt、8’-羟基-MeBmt或O-乙酰基-MeBmt1；X为αAbu、Val、Thr、Nva或0-甲基苏氨酸(Me0Thr)；R为Pro、Sar、(D)-MeSer、(D)-MeAla或(D)-MeSer(O乙酰基)；Y为MeLeu、硫代MeLeu、γ-羟基-MeLeu、MeIle、MeVal、MeThr、MeAla、MeaIle或MeaThr；N-乙基Val、N-乙基Ile、N-乙基Thr、N-乙基Phe、N-乙基Tyr或N-乙基Thr(O乙酰基)；Z为Val、Leu、MeVal或MeLeu，Q为MeLeu、γ-羟基-MeLeu、MeAla或Pro，T1为(D)Ala或Lys，T2为MeLeu或γ-羟基-MeLeu，T3为MeLeu或MeAla。优选的式I的化合物为例如式Ia的化合物 其中W’为MeBmt、二氢-MeBmt或8’-羟基-MeBmt；X为αAbu、Val、Thr、Nva或0-甲基苏氨酸(Me0thr)；R’为Sar、(D)-MeSer、(D)-MeAla或(D)-MeSer(O乙酰基)；Y’为MeLeu、γ-羟基-MeLeu、MeIle、MeVal、MeThr、MeAla，MeaIle或MeaThr；N-乙基Val、N-乙基Ile、N-乙基Thr、N-乙基Phe、N-乙基Tyr或N-乙基Thr(O乙酰基)；Z为Val、Leu、MeVal或MeLeu；且Q’为MeLeu、γ-羟基-MeLeu或MeAla。基团W’、X、Y’、Z、Q’及R’独立地具有以下优选重要性W’优选W”其中W”为MeBmt或二氢-MeBmt；X优选X’其中X’为αAbu或Nva，更优选X”其中X”为αAbu；R’优选R”其中R”为Sar；Y’优选Y”其中Y”为γ-羟基-MeLeu、MeVal、MeThr、MeIle、N-乙基Ile或N-乙基Val；Z优选Z’其中Z’为Val或MeVal；且Q’优选Q”其中Q”为MeLeu；式Ia化合物的优选基团为W’为其中W”、X为X’、Y’为Y”、Z为Z’、Q’为Q”且R’为R”的基团。式Ia的优选化合物的实例为例如a)[二氢-MeBmt]1-[γ-羟基-MeLeu]4-环孢菌素；BR*＝0.1；IR＜1％b)[MeVal]4-环孢菌素；BR＝0.1；IR＜1％c)[MeIle]4-环孢菌素；BR＝-0.2；IR＜1％d)[MeThr]4-环孢菌素；e)[γ-羟基-MeLeu]4-环孢菌素；BR＝0.4；IR＜1％f)[乙基-Ile]4-环孢菌素；BR＝0.1；IR＜2％g)[乙基-Val]4-环孢菌素；BR＝0；IR＜2％h)[Nva]2-[γ-羟基-MeLeu]4-环孢菌素；i)[γ-羟基-MeLeu]4-[γ-羟基-MeLeu]6-环孢菌素；j)[MeVal]5-环孢菌素；BR＝0.4；IR＝5.3％k)[MeOThr]2-[(D)MeAla]3-[MeVal]5-环孢菌素；l)[8’-羟基-MeBmt]1-环孢菌素；BR＝0.35；IR＝1.8％m)[MeAla]6-环孢菌素；BR＝-0.4；IR＝3.2n)[(γ-羟基-MeLeu]9-环孢菌素；BR＝0.15；IR＝2.9IR＝免疫抑制比率，以相对于环孢菌素A的活性百分数表示。非免疫抑制性环孢菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
环孢菌素在制备用于预防或治疗丙型肝炎感染或ＨＣＶ诱导的疾病的药物组合物中的用途，其中所述环孢菌素（ｉ）以０．７以下的结合比率（ＢＲ）结合人重组亲环蛋白，ＢＲ为在竞争ＥＬＩＳＡ试验中测定的环孢菌素ＩＣ↓［５０］与环孢菌素Ａ在同时发生的试验中ＩＣ↓［５０］比率的以１０为底数的对数；和（ｉｉ）在混合淋巴细胞反应中活性不超过环孢菌素Ａ的５％。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】GB 2003-9-3 0320638.01.环孢菌素在制备用于预防或治疗丙型肝炎感染或HCV诱导的疾病的药物组合物中的用途，其中所述环孢菌素(i)以0.7以下的结合比率(BR)结合人重组亲环蛋白，BR为在竞争ELISA试验中测定的环孢菌素IC50与环孢菌素A在同时发生的试验中IC50比率的以10为底数的对数；和(ii)在混合淋巴细胞反应中活性不超过环孢菌素A的5％。2.根据权利要求1的环孢菌素的用途，用于制备用于抑制HCV复制的药物组合物。3.根据权利要求1的环孢菌素的用途，用于制备用于在移植受者中预防HCV感染再次发生的药物组合物。4.根据权利要求1、2或3的用途，其中所述环孢菌素为式I的化合物 其中W为MeBmt、二氢-MeBmt、8’-羟基-MeBmt或O-乙酰基-MeBmt1；X为αAbu、Val、Thr、Nva或0-甲基苏氨酸(Me0Thr)；R为Pro、Sar、(D)-MeSer、(D)-MeAla或(D)-MeSer(O乙酰基)；Y为MeLeu、硫代MeLeu、γ-羟基-MeLeu、MeIle、MeVal、MeThr、MeAla、MeaIle或MeaThr；N-乙基Val、N-乙基Ile、N-乙基Thr、N-乙基Phe、N-乙基Tyr或N-乙基Thr(O乙酰基)；Z为Val、Leu、MeVal或MeLeu，Q为MeLeu、γ-羟基-MeLeu、MeAla或Pro，T1为(D)Ala或Lys，T2为MeLeu或γ-羟基-MeLeu，T3为MeLeu或MeAla；式Ia化合物 其中W’为MeBmt、二氢-MeBmt或8’-羟基-MeBmt；X为αAbu、Val、Thr、Nva或0-甲基苏氨酸(Me0thr)；R’为Sar、(D)-MeSer、(D)-MeAla或(D)-MeSer(O乙酰基)；γ’为MeLeu、γ-羟基-MeLeu、MeIle、MeVal、MeThr、MeAla、MeaIle或MeaThr；N-乙基Val、N-乙基Ile、N-乙基Thr、N-乙基Phe、N-乙基Tyr或N-乙基Thr(O乙酰基)；Z为Val、Leu、MeVal或MeLeu；Q’为MeLeu、γ-羟基-MeLeu或MeAla；或式II的化合物 其中Wa为 其中Ra为式Ic或Id的残基-CH2-CH＝CH-CH2-R4Ic 或-CH2-SH-R′4Id其中R4为C1-4烷硫基、氨基C1-4烷硫基、C1-4烷基氨基C1-4烷硫基、二C1...

【专利技术属性】
技术研发人员：土方诚，下远野邦忠，渡士幸一，
申请(专利权)人：诺瓦提斯公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]