从发酵肉汤中回收抑素化合物的方法技术

本发明专利技术公开了一种新的用于从发酵肉汤中回收化合物的方法，包含的步骤为：通过萃取形成富含化合物的溶液，从该富含溶液中获得所述化合物的盐，纯化该化合物的盐及将其转换盐型至该化合物的金属盐。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种分离所需化学产物的方法，该化学产物得自在含水发酵肉汤中实施的反应。本专利技术进一步涉及从发酵肉汤中分离帕伐他丁，密实菌素(compactin)和洛伐他丁，尤其是分离由密实菌素发酵而成的帕伐他丁。
技术介绍
心血管疾病的并发症诸如心肌梗塞、中风和外周血管疾病在美国占死亡原因的一半。血流中高水平的低密度脂蛋白(LDL)与冠状损伤的形成有关，冠状损伤将阻碍血液流动，且能使血栓破裂和导致血栓形成，Goodman和Gilman，The Pharmacological Basis of Therapeutics(治疗学之药理学基础)879(第9版，1996)。降低血浆中LDL水平证明能降低心血管疾病病人和虽无心血管疾病但患有高胆固醇的病人临床发病的风险。斯堪的纳维亚辛伐他丁生存研究小组(ScandinavianSimvastatin Survival Study Group)，1994；脂类研究临床项目(Lipid Research Clinics Program)，1984a，1984b。抑素(statin)药物是目前用于降低易患心血管疾病的病人血管中LDL水平的最有疗效的药物。此类药物特别包括密实菌素、洛伐他丁、辛伐他丁、帕伐他丁和氟伐他丁。抑素药物的作用机理已有较详细的说明。它们通过竞争性地阻止3-羟基-3-甲基-戊二酰基-辅酶A还原酶(″HMG-CoA还原酶″)而破坏了胆固醇和其它固醇在肝脏中的合成。HMG-CoA还原酶催化HMG-CoA到甲羟戊酸的转化反应，该反应为生物合成胆固醇的速率决定步骤。因此，阻止该反应将导致胆固醇在肝脏中形成速度的减慢。帕伐他丁是化合物]-1，2，6，7，8，8a-六氢-β，δ，6-三羟基-2-甲基-8-(2-甲基-1-氧代丁氧基)-1-萘-庚酸(CAS登记号No.81093-370)的常用医药名称。帕伐他丁游离酸形式的分子结构描述于式(Ia)中，其中R＝OH。其内酯形式描述于式(Ib)中，其中将原子标号，以表明原子的编号方式。 帕伐他丁、密实菌素(式Ib，R＝H)、洛伐他丁(式Ib，R＝CH3)、辛伐他丁和氟伐他丁各自具有烷基链，该烷基链由闭合形成内酯的羧酸基团封端，并且在相对于羧酸基团的β和δ位置上带两个羟基基团。所述烷基链是HMG-CoA还原酶的结合部分。在δ位的羧酸基团和羟基基团倾向于内酯化，如式(Ib)所示。可内酯化的化合物如抑素可以游离酸的形式、或以内酯的形式、或者两种形式的平衡混合物存在。内酯化作用导致了生产抑素药物的加工困难，这是因为游离酸和内酯形式的化合物具有不同的极性。提纯其中一种形式的方法可能会与杂质一起除去另一种形式，导致较低的产量。因此，为了以高产率进行分离，当处理可内酯化的化合物时通常必须非常小心。帕伐他丁显示了优于其它抑素的重要的治疗优点。帕伐他丁选择性地抑制胆固醇在肝脏和小肠中的合成，但基本不影响其在外周细胞中的合成。Koga，T.等，生物化学生物物理学报(Biochim.Biophys.Acta)，1990，1045，115-120。这一选择性似乎部分归因于六氢化萘核的C-6位置上羟基的存在。C-6位置在密实菌素中被氢原子占据，在洛伐他丁中则被甲基占据。较其它更具亲脂性的同类物质而言，帕伐他丁透过周边细胞的亲脂性膜的能力要弱些，Serajuddin等，药物科学杂志(J.Pharm.Sci.)，1991，80，830-34，且帕伐他丁有限的移动性被认为是导致其在肝脏和肠中更容易发生局部定位的原因。根据美国专利4,346,227(此处引入作为参考)，帕伐他丁具报道由M.Tanaka等在研究密实菌素的代谢时被作为密实菌素的代谢物分离而首次获得。根据′227专利，帕伐他丁可通过使用各种微生物发酵密实菌素而得到，这些微生物是犁头霉属(Absidia coreulea)IFO4423孢子，小克银汉霉属(Cunninghamella echinulata)IFO 4445，产玫瑰色链霉菌(Streptomyces rosochromogenua)NRRL 1233，Syncephalastrum racemosum IFO 4814和Syncephalastrumracemosum IFO 4828。发酵之后，帕伐他丁通过以下方法从发酵肉汤中分离将肉汤酸化到pH值为3，然后用乙酸乙酯萃取帕伐他丁和其它非亲水性的有机物，接着用盐水洗涤。通过加入催化量的三氟醋酸使帕伐他丁游离酸内酯化，之后用稀碳酸氢纳中和，在硫酸钠上干燥，然后蒸发至干燥。残余物用制备反相高效液相色谱(″HPLC″)进行纯化。本领域技术人员懂得，反相HPLC对于大规模化合物制剂的纯化而言不是一个经济的方法。美国专利5,942,423涉及到使用马杜拉放线菌属(Actinomadura)菌株的密实菌素到帕伐他丁的微生物羟基化。记载在实施例中的唯一分离方法是分离微量的物质用于发酵肉汤分析量HPLC的分析。根据更为广泛的关于从肉汤中分离帕伐他丁的讨论，优选的分离方法是HPLC。共同转让、共同未决的PCT申请序列号PCT/US00/19384涉及了使用Micromonospora maculata菌株的密实菌素到帕伐他丁的微生物羟基化，所述菌株能异乎寻常地抵抗密实菌素的抗菌效果。美国专利5,202,029涉及了一种使用HPLC纯化HMG-CoA还原酶抑制剂的方法。在HPLC柱上进行杂质分离后，HMG-CoA还原酶抑制剂以溶于洗脱剂的溶质形式从HPLC柱上洗脱下来。洗脱剂被部分蒸发，之后加入水以诱导HMG-CoA还原酶抑制剂结晶。美国专利5,616,595涉及通过切向过滤从发酵肉汤中回收水不溶性化合物的连续方法。所述发酵肉汤通过过滤器进行循环。由于通过过滤器的水份损失，因此肉汤经每次循环逐渐浓缩。一旦达到所需的浓度，使用可溶解所需化合物的溶剂来浆化浓缩的肉汤。然后使所述浆液通过过滤器进行循环。所需化合物的溶液作为滤液收集起来，再从该滤液中分离出所需的化合物，并任选地进行进一步的纯化。据说此方法能广泛适用于各种化合物，包括洛伐他丁、帕伐他丁和辛伐他丁。分离内酯形式的洛伐他丁的方法记载于美国专利5,712,130中。在此方法中，洛伐他丁用乙酸丁酯从发酵肉汤中萃取出来。然后将所得溶液进行离心，弃去分离出来的水相。有机相则在大于40℃下真空蒸馏，此操作除了能够浓缩溶液之外，还能通过去除水份而促进内酯化作用。洛伐他丁内酯的晶体在冷却时结晶，并重结晶达到90％或者更高的纯度。本领域技术人员能理解，本方法对于分离抑素的游离羧酸或者羧酸盐形式并不适合。目前，最经济可行的制备帕伐他丁的方法是通过密实菌素在C-6位置的酶的羟基化。然而，所知的从发酵肉汤中分离出抑素的方法并不适合于分离钠盐形式的帕伐他丁，不能达到药学上可接受的纯度水平，或者需要色谱分离以获到高纯度。本专利技术满足了本领域中对于无需色谱纯化即能有效地从发酵肉汤中高纯度、高产率地分离出用于制备规模的帕伐他丁的有效方法的需要。专利技术概述本专利技术的目的是提供从含水发酵肉汤中分离抑素化合物的有效方法。本专利技术尤其提供了无需色谱分离的、工业制备规模的纯化帕伐他丁、密实菌素和洛伐他丁的方法。本专利技术进一步的目的是为了得到高纯形式和高产量的帕伐他丁，以便获得显本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有帕伐他丁钠的组合物，特征在于该组合物含有以帕伐他丁钠计为０．１％或更低的表帕伐（ｅｐｉｐｒａｖａ），并可由下列组合的步骤得到：从含有由微生物制备的帕伐他丁的浓缩培养肉汤中利用有机溶剂萃取帕伐他丁，其中所述有机溶剂是通式为ＣＨ ↓［３］ＣＯ↓［２］Ｒ的有机溶剂，其中Ｒ为具有３或４个碳原子的烷基；用酸减少杂质；用碱减少杂质；和结晶。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：V科里，L迪克，I福加斯，C斯扎博，EA纳格伊内，
申请(专利权)人：特瓦药厂有限公司，
类型：发明
国别省市：HU[匈牙利]