精子功能的调节制造技术

将细胞外基质蛋白质如纤连蛋白、玻连蛋白或层粘连蛋白加入精子样品中使精子处于低运动性非获能状态或保持在预先存在的非获能状态。随后，在合适的时间在体外受精研究或体内受精过程中，将血管紧张素Ⅱ或相关的肽加入精子样品中以增强精子运动性并使其获能。该细胞外基质蛋白质防止不适宜的提早自然获能，并且可更准确地进行人工授精操作，因为可准确地在恰当时间使精子处于恰当的获能状态以进行移植。血管紧张素Ⅱ处理可与肽ＲＧＤ组合使用以对抗细胞外基质蛋白质的结合并如此抑制其效果。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及精子功能的调节。本专利技术特别涉及特定蛋白质如纤连蛋白和血管紧张素II分别用于保存非获能或非活化状态的精子和将非获能/非活化精子转化为获能/活化状态的用途。
技术介绍
诱导并保持哺乳动物精子成熟和运动性的生理因素通常仍不清楚，尽管已知涉及多种试剂。例如来自志愿者和看生育力门诊的病人的受刺激和非受刺激精子的运动性数据显示，血管紧张素II既可提高运动性精子的百分比又可提高其线速度，而特定的ATI受体拮抗剂洛沙坦(losartan)抑制血管紧张素II对运动精子的百分比的作用。已证明血管紧张素II对特定的运动性参数，包括曲线速度、直线速度和侧向头运动的幅度有作用。这些运动性变化在特征上与精子获能即最终使卵子受精的能力相关。这些发现是专利技术WO 95/32725“血管紧张素II促进生育力的用途”的基础。与此同时，引起注意的是精子与细胞外基质蛋白质的相互作用，该细胞外基质蛋白质特别包括纤连蛋白。已在精子表面上的各个位置发现纤连蛋白，其存在于精子上可能与不育症有关。在其它研究中，已讨论了有关精子冷冻的问题。精子冷冻是为家畜和人类人工受精和体外受精而保藏精子的一个基本方法。然而，取决于物种和个体，存在与精子冷冻和解冻相关的不同程度的损害，因此与新鲜的未冷冻精子相比其生育力受到损害。部分原因是冷冻和解冻似乎引起反映获能的变化。
技术实现思路
本专利技术基于如下发现细胞外基质蛋白质如纤连蛋白可用作添加剂以通过减少运动性保存非获能状态的精子，而血管紧张素II和其类似物以及含RGD三肽的小肽可用于通过增强运动性使其中获能已被存在的细胞外基质蛋白质抑制的样品获能。因此，本专利技术提供一种精子调节方法，该方法包括提供含细胞外基质蛋白质的精子样品以使精子处于非获能状态，和加入血管紧张素II或相关的肽以使精子获能。含细胞外基质蛋白质的精子样品一般通过将细胞外基质蛋白质加入精子样品中以通过降低运动性使其处于非获能状态或保持预先存在的非获能状态。这种基质蛋白质用于保存低运动性、非获能状态的精子的用途是本专利技术的另一方面。然而，本专利技术的调节方法还可用于天然含细胞外基质蛋白质的精子样品。附图说明在附图中图1为来自实施例1的操作的运动性测量值的图示；图2为来自实施例2的操作的运动性测量值的图示；图3为来自实施例3的操作的运动性测量值的图示；图4为来自实施例4的操作的运动性测量值的图示；图5为来自实施例5的操作的运动性测量值的图示；和图6、7、8和9为来自实施例6的操作的获能测量值的图示。具体实施例方式天然处于非获能状态的精子具有固有的最终进行获能的潜能，无论是否刺激。然而，冷冻和解冻精子对其造成很大损害，但是在解冻后或从冷藏(但不冷冻)贮藏中取出样品后在可成活的条件下复原的那些精子经常很快开始获能，通常限制其解冻后或急冷后的用途。本专利技术的一个特征是利用加入的细胞外基质蛋白质和血管紧张素II提供对整个方法的一些控制，在技术人员控制下，使用该精子例如在受精研究或治疗人类生育临床病人样本或动物人工受精中，有效地提供“刹车和加速器”。通过使用本专利技术的基质蛋白质，已发现可以将精子样品的使用寿命延长3-4倍。在优选的方面，本专利技术包括将细胞外基质蛋白质加入精子样品中以使该精子处于非获能状态或保持预先存在的非获能状态，随后在体外受精研究或体内受精过程中在合适的时间将血管紧张素II或相关的肽加入精子样品中以使其获能。本专利技术一方面包括将一种或多种细胞外基质蛋白质用作通过降低运动性保存非获能/非活化状态精子的试剂。可通过使用下面用于指导的实施例的常规试验得到有效量。例如，可将基质蛋白质以约1μg/ml至50μg/ml，通常2μg/ml至20μg/ml的标准加入样品中。可将细胞外基质蛋白质适宜地加入用于冷藏或作为冷冻精子低温保存之前的在常规膨胀剂介质中的新鲜精子中。做为选择，当样品保留待用时可将细胞外基质蛋白质加入解冻后或急冷贮藏后的精子样品中。解冻后的样品一般可由供给者悬浮在所有者的介质中。负责IVF操作或进行受精研究的技术人员可发现，可方便地洗涤解冻后的精子，通过离心浓缩精子，然后将该精子重悬于适合研究或IVF的介质中。本专利技术另一方面包括当样品已通过存在的细胞外基质蛋白质以低运动性、非获能状态贮藏时，将血管紧张素II或相关的肽用作通过增强运动性使精子样品获能的试剂。可通过使用下面用于指导的实施例的常规试验得到有效量。例如，在被处理组合物中以0.1nM至100nM、通常1nM至10nM的量提供血管紧张素II或其类似物是适当的。提供非获能精子的含细胞外基质蛋白质的精子样品可来自解冻含细胞外基质蛋白质的冷冻精子、或来自以非冷冻贮藏的含细胞外基质蛋白质的精子样品、或天然含细胞外基质蛋白质的精子样品。做为选择，可将细胞外基质蛋白质加入解冻后或贮藏后或新鲜样品中，接着使用血管紧张素II或相关的肽，所以在使用血管紧张素II诱导获能时，技术人员可以将精液保持在低运动性非获能状态直至使用前。细胞外基质蛋白质能够与细胞表面结合，并且据信涉及根据本专利技术保持低运动性非获能状态的精子，尽管实际机理仍不清楚。用于本专利技术的合适细胞外基质蛋白质包括纤连蛋白、玻连蛋白和层粘连蛋白。作为获能试剂，可将血管紧张素II用相关的肽例如WO95/32725中提及的盐和类似物取代，其整个公开在这里引入作为参考。合适的类似物是血管紧张素II酰胺。做为选择，可将含三肽基元RGD(Arg-Gly-Asp)的肽用作获能的试剂。该基元可由三肽RGD本身或由其它小肽如市购的四肽RGDS(Arg-Gly-Asp-Ser)提供。RGD为在所有细胞外基质蛋白质中发现的三肽基元，细胞膜中的整连蛋白与其结合。使用游离RGD或其它含基元RGD的肽，因此与细胞外基质蛋白质竞争，并通过该蛋白质抑制细胞结合。可通过使用下面用于指导的实施例的常规试验得到有效量。RGD合适地用于与血管紧张素II组合，原因在于RGD抑制细胞外基质蛋白质结合、提高加入的血管紧张素II在刺激运动性中的效率并因此提高获能/活化。然而，血管紧张素II在不存在RGD肽下仍然是有效的获能试剂。为进行贮藏，优选将新鲜精子加入精子膨胀剂介质或其它生殖细胞介质中。因此，本专利技术另一方面为含细胞外基质蛋白质如纤连蛋白、玻连蛋白或层粘连蛋白的精子膨胀剂介质，这样加入的精子保持非获能状态。精子膨胀剂介质可市购并且通常包括缓冲水溶液。精子膨胀剂介质通常在使用时通过将固体的、通常为粉末状的膨胀组合物加入水中制备。因此，本专利技术还提供精子膨胀剂组合物，其通常为与水再构造的粉末，包含细胞外基质蛋白质。再一方面，本专利技术提供一种或多种细胞外基质蛋白质用于制备保存非获能状态的精子的试剂或用于制备保存非获能状态的精子的精子膨胀剂介质的用途。当膨胀剂介质用于精子低温保存时，膨胀剂介质还优选还包含一种或多种低温防护试剂如甘油。类似地，为使精子获能，可将精子样品加入含获能试剂的膨胀剂介质中，或反之亦然。因此，本专利技术还提供含血管紧张素II或其类似物和/或含RGD的肽的精子膨胀剂介质或组合物。再一方面，本专利技术提供血管紧张素II或类似物和/或含RGD的肽用于制备使精子获能的试剂或用于制备使精子获能的精子膨胀剂介质或组合物的用途。精子膨胀组合物是本专利
熟练技术人员公知的，并且通常包含缓冲剂如柠檬酸或柠檬酸钠和碳本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种精子调节方法，该精子调节方法包括提供含细胞外基质蛋白质的精子样品以使精子处于低运动性非获能状态，和加入血管紧张素Ⅱ或相关的肽以刺激运动性和使精子获能。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】GB 2003-11-20 0327046.91.一种精子调节方法，该精子调节方法包括提供含细胞外基质蛋白质的精子样品以使精子处于低运动性非获能状态，和加入血管紧张素II或相关的肽以刺激运动性和使精子获能。2.根据权利要求1所述的精子调节方法，其中，含细胞外基质蛋白质的精子样品通过将细胞外基质蛋白质加入精子样品中来制备，由此使精子处于非获能状态。3.根据权利要求所述的精子调节方法，其中，含细胞外基质蛋白质的精子样品为天然包含细胞外基质蛋白质的样品。4.根据权利要求1、2或3所述的精子调节方法，其中，含细胞外基质蛋白质的精子样品在加入血管紧张素II或相关的肽以使精子获能之前已进行贮藏。5.根据权利要求4所述的精子调节方法，其中，含细胞外基质蛋白质的精子样品已进行冷冻或急冷贮藏并在加入血管紧张素II或相关的肽以使精子获能之前已进行解冻。6.根据权利要求4所述的精子调节方法，其中，在进行冷冻或急冷贮藏前将细胞外基质蛋白质加入精子样品中，并在加入血管紧张素II或相关的肽以使精子获能之前进行解冻。7.根据权利要求1至6任一项所述的精子调节方法，该精子调节方法在体外进行。8.根据权利要求1至6任一项所述的精子调节方法，该精子调节方法至少部分在体内进行。9.根据权利要求1至8任一项所述的精子调节方法，其中，细胞外基质蛋白质选自纤连蛋白、玻连蛋白和层粘连蛋白。10.根据权利要求1至9任一项所述的方法，其中，获能试剂为血管紧张素II或血管紧张素II酰胺或包含三肽RGD的肽。11.一种或多种细胞外基质蛋白质作为保存低运动性非获能状态的精子的试剂的用途。12.根据权利要求11所述的用途，其中，含细胞外基质蛋白质的精子以液体形式贮藏。13.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：加文文森，
申请(专利权)人：玛丽女王和威斯菲尔德学院，
类型：发明
国别省市：GB[英国]