兔耳风提取物的提取方法及用途技术

本发明专利技术公开一种兔耳风提取物，该提取物主要是由如下步骤制成的：取兔耳风药材，粉碎，加蒸馏水煮提，过滤，滤液浓缩，用盐酸调ｐＨ值，离心，其上清液上大孔吸附树脂柱吸附，乙醇洗脱，合并酸沉物，干燥，得兔耳风提取物。同时本发明专利技术公开了该提取物及其制剂在制备治疗急慢性宫颈炎的药物中的应用。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种药物提取物的提取方法及新用途，特别涉及兔耳风提取物的提取方法及新用途。
技术介绍
杏香兔耳风(Ainsliaea fragrans Champ.)是菊科兔耳风属植物。杏香兔耳风性味甘、微苦、性凉，归肺、肝经。具有清热补虚，凉血止血，利湿解毒。主治虚劳骨蒸，肺痨咳血，妇女崩漏，湿热黄疸，水肿，痈疽肿毒，瘰疬结核，跌打损伤，毒蛇咬伤。临床上用杏香兔耳风制剂及民间验方配伍治疗宫颈糜烂[3，4]、子宫内膜炎[5]、热疖[6]、鹅口疮[7]。杏香兔耳风作为少常用中药，在许多方面尚属空白，有待进一步开发利用，以期发挥其最大作用。药理实验证明杏香兔耳风对金黄色葡萄球菌，乙型链球菌等有抑制作用，其水煎液(100％)对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，其抑菌圈清晰透明，直径有17mm(纸片法)。目前市售兔耳风制剂的制备工艺方法陈旧，有效成分含量低(总有机酸含量约10％)。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种兔耳风提取物，本专利技术另一个目的在于提供一种兔耳风提取物的提取方法及提取物的新用途。本专利技术目的是通过如下技术方案实现的取兔耳风药材，切段或粉碎，按重量份加80℃-100℃的蒸馏水8-12倍量煮提2-4次，每次1.5-2.5小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩，用盐酸调pH为1，离心，其上清液上大孔吸附树脂柱吸附，80-95％乙醇洗脱，回收乙醇，合并酸沉物，干燥，得兔耳风提取物。上述兔耳风提取物经过确定其中化学成分为有机酸类，经含量测定，测得其提取物中总有机酸含量50％以上。本专利技术兔耳风提取物的日服用剂量为0.6g-1.2g。本专利技术兔耳风提取物的日服用剂量可以为0.9g。可将上述兔耳风提取物加上药剂学接受的辅料制成临床可接受的剂型，如片剂、胶囊剂、软胶囊剂、分散片、丸剂、颗粒剂、注射液、滴丸剂、口服液体制剂，皮下给药制剂或栓剂等剂型。本专利技术通过2种不同动物、2个实验模型通过对兔耳风不同工艺方法提取成分的抗炎活性进行了筛选，并对筛选成分进行了抑制急性非特异性炎症作用的初步药效学试验观察。通过体外抑菌试验，观察兔耳风提取物对引起盆腔感染主要致病菌的体外抑菌和杀菌作用及其强度。下面实验例用于进一步说明但不限于本专利技术。实验例1三种提取方法试验醇提法取兔耳风1Kg，95％乙醇提取2次，合并提取液，回收乙醇，干燥，得乙醇膏，称重。收率约5％。1g提取物相当于生药20g；为F1。水提醇沉法取兔耳风1Kg，切段或粉碎，加热水10倍量煮提3次，每次2小时，过滤，合并3次滤液，加乙醇使含醇量到70％，静置12小时，过滤，回收乙醇，干燥，得乙醇膏263g。1g提取物相当于生药3.8g；为F2。本专利技术的大孔吸附树脂法应用大孔吸附树脂进行兔耳风的有机酸成分的纯化。取兔耳风1Kg，切段或粉碎，加热水10倍量煮提3次，每次2小时，过滤，合并3次滤液，滤液适当浓缩，上树脂柱吸附，95％乙醇解吸附，回收乙醇，干燥，得乙醇膏30g。1g提取物相当于生药33.3g，为F3。实验例2杏香兔耳风提取物的化学结构鉴定取1kg杏香兔耳风全草，切碎，用水提取三次，每次1小时，减压浓缩至6升，离心取上清液过1kg大孔树脂。95％乙醇洗脱。浓缩干燥后得到兔耳风提取物30g(即为上述实验例中的F3)。取提取物粉末1g经高速逆流色谱分离，按色谱峰收集，得化合物A1(21mg)，A2(26mg)。高速逆流色谱分离条件以溶剂系统氯仿∶甲醇∶水＝2∶2∶1分离，检测波长为254nm，流速3ml/min，压力8千克力。化合物A1淡黄色无定形粉末(甲醇)，经紫外、红外、质谱、核磁共振等波谱技术鉴定化合物A1的化学结构为3，5-二咖啡酰基奎宁酸(3，5-Dicaffeoylquinic acid)。A1分子式为C25H24O12。化合物A2淡黄色无定形粉末(甲醇)，经紫外、红外、质谱、核磁共振等波谱技术鉴定化合物A2的化学结构为4，5-二咖啡酰基奎宁酸(4，5-Dicaffeoylquinic acid)。A2分子式为C25H24O12。实验例3杏香兔耳风提取物化学成分性质确定取提取物适量，用甲醇配置成一定浓度的溶液，用带二极管阵列检测器的高效液相检测，其主要色谱峰紫外吸收峰型一致，证明兔耳风提取物为同一类化合物，其中含量较高的2个化合物A1、A2被鉴定为有机酸类，故兔耳风提取物主要成分为有机酸类。色谱条件Waters高效液相色谱仪(自动进样、600泵、2996紫外二极管阵列检测器)；十八烷基硅胶键合相填充柱；流动相甲醇-水(42∶58)。对照品溶液制备精密称取A2对照品2.04mg，用甲醇定容于2mL容量瓶中，摇匀，即得浓度为1.02mg/mL的对照品储备液。供试品溶液制备取杏香兔耳风大孔树脂提取物20mg，精密称定，置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，超声20分钟，摇匀，过滤，精密吸取续滤液0.8mL，置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。杏香兔耳风大孔树脂提取物中总有机酸含量测定精密称取三批杏香兔耳风大孔树脂提取物样品，每批2份，每份约20mg，按供试品溶液的制备方法制备后，在328nm处测定吸收度，计算总有机酸含量。结果见下表。杏香兔耳风大孔树脂提取物样品测定结果 经计算，杏香兔耳风提取物中总有机酸的平均含量为54.11％。实验例4不同工艺提取兔耳风成分抗炎活性的筛选取WisFar大鼠60只，随机分组，实验组大鼠分别给予实验例1的提取方法所得的F1、F2、和F3，其中F1350mg·kg-1、F21840mg·kg-1、F3210mg·kg-1；阳性药物对照和溶媒对照组大鼠分别给予阿斯匹林100mg·kg-1和同体积蒸馏水，1.0ml·100g-1w容积灌胃给药，12小时(±2小时)1次，连续4次。末次给药后立即以1％角叉菜0.1ml注射于大鼠右后足跖皮下致炎；自制毛细管放大测量装置测定大鼠致炎足外踝突出处平面以下部位致炎前和致炎后1-5小时的容积，计算大鼠足跖肿胀率(％)和肿胀抑制率(％)。t检验比较组间足跖肿胀率(％)的显著性差异，方差分析组间方差不齐者，改用t’检验。实验结果见表1。表1不同工艺提取兔耳风成分对角义菜致大鼠足跖急性炎症(肿胀)反应的影响 注与溶媒对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。实验结果，阳性对照药物阿斯匹林在所试剂量下表现了明显的抗炎活性，药后1-5小时与对照组比较差异有高度显著性(P＜0.01)，作用高峰时间在药后2-3小时。两批次试验，所试临床等效剂量的不同工艺提取兔耳风成分给药后均表现了不同程度的抗炎活性，其中F3在药后1-3小时与对照组比较差异有显著性和高度显著(P＜0.01或0.05)，F2和F1分别在药后2-3小时和药后3小时时与对照组比较差异有显著性或高度显著性(P＜0.01或0.05)。试验结果，兔耳风F3成分试验所用剂量较低，抗炎作用较强且稳定。实验例5兔耳风提取物F3对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀反应的影响WisFar大鼠40只，随机分组，实验组大鼠分别给予F352.5-210mg·kg-1，阳性药物对照和溶媒对照组大鼠分别给予阿斯匹林100mg·kg-1和同体积蒸馏水，1.0ml·100g-1w容积灌胃给药，12小时(±2小时)1次，连续4次。同上方法制备模型、量取足容积、计本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种兔耳风提取物，其特征在于该提取物由如下方法制成：取兔耳风药材，切段或粉碎，按重量份加８０℃－１００℃的蒸馏水８－１２倍量煮提２－４次，每次１．５－２．５小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩，用盐酸调ｐＨ为１，离心，其上清液上大孔吸附树 脂柱吸附，８０－９５％乙醇洗脱，回收乙醇，合并酸沉物，干燥，得兔耳风提取物。

【技术特征摘要】
1.一种兔耳风提取物，其特征在于该提取物由如下方法制成取兔耳风药材，切段或粉碎，按重量份加80℃-100℃的蒸馏水8-12倍量煮提2-4次，每次1.5-2.5小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩，用盐酸调pH为1，离心，其上清液上大孔吸附树脂柱吸附，80-95％乙醇洗脱，回收乙醇，合并酸沉物，干燥，得兔耳风提取物。2.如权利要求1所述的兔耳风提取物，其特征在于该提取物中总有机酸含量50％以上。3.如权利要求1或2所述的兔耳风提取物，其特征在于该提取物制成临床上或药学上接受的片剂、胶囊剂、软胶囊剂、分散片、丸剂、颗粒剂、注射液、滴丸剂、口服液体制剂，皮下给药制剂或栓剂等剂型。4.如权利要求3所述的兔耳风提取物的制备方法，其特征在于该方法为取兔耳风药材，切段或粉碎，按重量份加80℃-100℃的蒸馏水8-12倍量煮提2-4次，每次1.5-2.5小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩，用盐酸调pH为1，离心，其上清液上大孔吸附树脂柱吸附，80-95％乙醇洗脱，回收乙醇，合并酸沉物，干燥，得兔耳风提取物。5.如权利要求4所述的兔耳风提取物的制备方法，其特征在于该方法为取兔耳风药材，切段或粉碎，按重量份加80℃-100℃的蒸馏水8倍量煮提2次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩，用盐酸调pH为1，离心，其上清液上D101大孔吸附树脂柱吸附，80％...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈正道，
申请(专利权)人：陈正道，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]