青稞提取物的新作用制造技术

本发明专利技术涉及青稞提取物的新作用，特别是在治疗神经杆细胞损伤中的应用。本发明专利技术从青稞中分离纯化得到青稞提取物对神经干细胞硫代硫酸钠损伤的保护作用进行研究，结果表明，青稞提取物对神经干细胞硫代硫酸钠损伤有明显的保护作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及青稞提取物的新作用，特别是在治疗神经干细胞损伤中的应用。
技术介绍
青稞是青藏高原特有农作物品种，也是西藏最主要的粮食作物品种，藏族群众通常将青稞磨制成″糌粑″(青稞面)食用。青稞常年播种面积和总产量分别占西藏粮食总播面积和总产的55-60％，总产在55-60万吨。尼玛扎西和强小林等研究证明西藏青稞β-葡聚糖平均含量为5.25％。“藏青25”的β-葡聚糖含量则高达8.62％。荷兰、加拿大、英国、澳大利亚等国外数千个品种化验结果表明，β-葡聚糖平均在5％以下。西藏长寿老人多是否与青稞中含有的特效保健功能因子-β-葡聚糖有关，目前还没有相关证明。生物医学界普遍认为β-葡聚糖具有清肠、降血脂、降胆固醇和预防心血管疾病的作用；β-葡聚糖还具有调节血糖、提高免疫力、抗肿瘤的作用。其在医药、食品、护肤等方面有广泛应用，市场开发前景广阔。一些专家还认为β-葡聚糖的抗癌作用具有研究价值。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种青稞提取物在治疗脑功能性疾病中的应用。特别是在对神经干细胞保护中的应用。本专利技术从青稞中分离纯化得到青稞提取物对神经干细胞硫代硫酸钠损伤的保护作用进行研究，结果表明，青稞提取物对神经干细胞硫代硫酸钠损伤有明显的保护作用。本专利技术的青稞提取物采用如下方法制备青稞研碎用适量水溶解，再用乙醇沉淀，乙醇最终浓度不低于80％，沉淀干燥后得粗品。用水溶解后上DEAE一纤维素柱，依次用水和不同浓度的NaCl溶液洗脱，洗脱液分部收集，用酚硫酸法检测。多糖高峰部分合并，合并液浓缩至适当体积后用20％H2O2脱色，透析脱盐，透析液浓缩后进一步用SepharoseCL-6B凝胶柱纯化，并用0.2mol/L NaCl洗脱。收集多糖高峰部分，真空干燥得到多糖的各个级分。本专利技术从青稞中提取了青稞提取物，并应用神经干细胞硫代硫酸钠损伤模型研究其对中枢神经系统的保护作用。对青稞提取物在脑功能性疾病的应用提供了一种新方法。具体实施例方式1.神经干细胞的分离培养与鉴定无菌条件下取出大鼠胚胎的纹状体，放入含有1％B27，20ng·mL-1表皮生长因子(EGF)，10ng·mL-1碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的F12-DMEM(1∶1)培养基中，吹打制成细胞悬液，于37℃，5％CO2饱和湿度下常规培养，每培养一周传代一次。将细胞贴附在载玻片上生长，2d后取出。吸出培养液，用磷酸盐缓冲液(PBS)洗去残余培养液，4％(m/m)多聚甲醛固定20min。PBS洗2次；10％正常山羊血清封闭1h；PBS洗3次；抗nestin抗体(v/v 1∶100，用抗体稀释液稀释)4℃过夜，PBS洗3次；二抗(v/v 1∶50，用抗体稀释液稀释)32℃孵育1h，PBS洗3次；50％(v/v)甘油封片，观察荧光。2.脑缺氧体外模型的构建将1mL密度为5×105mL-1细胞悬液置于24孔板中，加入浓度为250mmol·L-1的硫代硫酸钠(Na2S2O3)溶液20μL，使硫代硫酸钠溶液浓度为5mmol·L-1，混匀，置于37℃，5％CO2的培养箱中培养，每隔24h观察并细胞计数(用1.5％台盼蓝染色，计算500个总细胞中活细胞的百分率)。3.实验分组与检测指标 正常对照组细胞培养液为正常神经干细胞培养液；硫代硫酸钠损伤组方法如2.7.2所述。试验组不同浓度RRTP-1加入硫代硫酸钠损伤组培养液中形成3个亚组，即低浓度组(20μmol·L-1)、中浓度组(40μmol·L-1)和高浓度组(80μmol·L-1)。神经干细胞死亡率将1mL密度为5×105mL-1各组细胞悬液置于24孔板中，置于37℃，5％CO2的培养箱中培养，观察并计算活细胞的百分率(1.5％台盼蓝染色，显微镜下计数500个总细胞)；乳酸脱氢酶(LDH)漏出率各组换无血清培养液12h后收集上清液，用速率法测定细胞外液中LDH活性。4.结果硫代硫酸钠损伤组培养液中细胞死亡率和LDH漏出率明显增加，与对照组比较有显著性差异(P＜0.01)。青稞提取物高浓度组神经干细胞培养液中，细胞死亡率和LDH漏出率相对较小，与硫代硫酸钠损伤组比较有显著性差异(P＜0.01)。说明一定剂量青稞提取物对神经干细胞缺氧损伤有明显的保护作用。在实验浓度范围内，青稞提取物对神经干细胞损伤的保护作用与其浓度呈现一定的量效关系。权利要求1.青稞提取物在治疗脑功能性疾病中的应用。2.青稞提取物在治疗神经干细胞损伤中的应用。全文摘要本专利技术涉及青稞提取物的新作用，特别是在治疗神经杆细胞损伤中的应用。本专利技术从青稞中分离纯化得到青稞提取物对神经干细胞硫代硫酸钠损伤的保护作用进行研究，结果表明，青稞提取物对神经干细胞硫代硫酸钠损伤有明显的保护作用。文档编号A61P25/00GK1966006SQ20061002923公开日2007年5月23日 申请日期2006年7月21日 优先权日2006年7月21日专利技术者段燕红, 陈付学 申请人:上海大学本文档来自技高网...

【技术保护点】
青稞提取物在治疗脑功能性疾病中的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：段燕红，陈付学，
申请(专利权)人：上海大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]