GM-CSF部分与聚合物的缀合物制造技术

本发明专利技术提供了粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）部分与一个或多个水溶性聚合物的缀合物。典型地，所述的水溶性聚合物是聚（乙二醇）或者其衍生物。本发明专利技术还提供了含有该缀合物的组合物，制备该缀合物的方法，和对患者给予含有该缀合物的该组合物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术主要涉及包含GM-CSF部分(即，具有GM-CSF活性的部分)与聚合物的缀合物。此外，本专利技术还涉及(尤其是)含有该缀合物的组合物、合成该缀合物的方法，以及用于进行该缀合物给药的方法。
技术介绍
人类造血系统的一个重要功能是替换各种白细胞(包括巨噬细胞、嗜中性细胞和嗜碱性细胞/肥大细胞)、红细胞(即，红血球)以及血凝块形成细胞(例如，巨核细胞/血小板)。这些专化细胞都是由位于骨髓内的造血前体细胞形成的。被称作“集落刺激因子”的专一性类激素糖蛋白，控制着这些造血前体细胞分化和成熟为众多专化血细胞的任一种。一种这样的集落刺激因子是粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子或“GM-CSF”。顾名思义，这种集落刺激因子促进了白细胞(例如粒细胞和巨噬细胞)的增殖和分化，但是GM-CSF也能促进其它类型细胞的形成。随着细胞因子、免疫和炎性的刺激，大量不同类型的细胞(包括活化的T细胞、B细胞、巨噬细胞、肥大细胞、内皮细胞和成纤维细胞)产生GM-CSF。天然的GM-CSF是一种127个氨基酸的糖蛋白，根据糖基化的程度可具有多种分子量。在药理学方面，已经对癌症患者给予GM-CSF，以加速化疗期间被杀死的白细胞的替换。同理，为了加速白细胞的替换，已经对骨髓替换治疗的白血病患者给予这种集落刺激因子。已经提议其它的应用，例如加速伤口愈合。参见，例如，美国专利No.6,6899,351。一种与当前GM-CSF治疗形式有关的缺点是用药的频率。因为GM-CSF治疗一般需要每天注射，患者厌恶这种治疗方案有关的不便和不适。与此同时，患者需要经常验血以确定白细胞计数(这需要拜访保健医生)，许多患者更喜欢麻烦少和/或涉及注射次数少的可替代疗法。对于这些问题的一种解决方案是提供延长释放形式的GM-CSF。例如，美国专利No.5,942,253描述了GM-CSF的聚(乳酸-共-羟基乙酸)或者其它可生物降解聚合物的微球。然而，微球的形成是一个复杂的过程，需要若干合成步骤。因此，这种延长释放的方法具有理论上可以避免的复杂性。已经有描述，PEG化或者聚(乙二醇)衍生物结合至蛋白质作为一种延长蛋白质体内半衰期的手段，籍此产生延长的药理学活性。例如，美国专利No.5,880,0255描述了一种GM-CSF与聚(乙二醇)的缀合物，其形成于与2，2，2-三氟乙磺酸酯衍生的分子量为5,000道尔顿的线性单甲氧基聚(乙二醇)的反应。尽管具有上述的这种缀合物，仍然需要含有GM-CSF的其它缀合物，例如，分子量大于5,000道尔顿的聚合物，具有不同结构(如，分支和/或分叉结构)、不同结合位点、位点特异性或位点选择性结合位点等等的聚合物。因此，本领域还需要另外的GM-CSF部分-聚合物缀合物。此外，本专利技术的一个或多个实施方案因此针对这些缀合物以及含有该缀合物的组合物，和如本文描述的相关方法，认为这些是新颖的并且现有技术完全无启示。专利技术概述 因此，在本专利技术的一个或多个实施方案中，本专利技术提供了一种缀合物，该缀合物含有如下结构 其中POLY是一种水溶性聚合物；(a)为0或1；X1，当存在时，是一含有一个或多个原子的间隔部分；R1是有机基团；GM-CSF是GM-CSF部分。在本专利技术的一个或多个实施方案中，本专利技术提供了一种缀合物，该缀合物含有如下结构 其中POLY是一种水溶性聚合物；X是一含有一个或多个原子的间隔部分；(b)为0或数值为1至10的整数(即1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)；(c)为0或数值为1至10的整数(即1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)；R2各自独立地为H或者有机基团；R3各自独立地为H或者有机基团；并且GM-CSF是GM-CSF部分。在本专利技术的一个或多个实施方案中，本专利技术提供了一种缀合物，该缀合物含有GM-CSF部分，所述GM-CSF部分包括内部的胺直接或者通过含有一个或多个原子的间隔部分共价地结合至分支的水溶性聚合物。在本专利技术的一个或多个实施方案中，本专利技术提供了一种药物组合物，该组合物含有如本文提供的一种缀合物。在本专利技术的一个或多个实施方案中，本专利技术提供了一种药物组合物，该组合物含有(i)一种缀合物，该缀合物含有人GM-CSF，所述人GM-CSF直接或者通过含有一个或多个原子的间隔部分共价地结合至水溶性聚合物，其中，所述的水溶性聚合物具有大于5,000道尔顿的平均分子量，并规定，当该水溶性聚合物是分支的水溶性聚合物时，所述的分支水溶性聚合物不包括赖氨酸残基；和(ii)一种药学上可接受的赋形剂，其中，所述组合物中至少约85％缀合物具有总计一至二个聚合物结合至人GM-CSF。在本专利技术的一个或多个实施方案中，本专利技术提供了一种用于将一种缀合物给药于患者的方法，该方法包括对患者给予如本文提供的药物组合物的步骤。在本专利技术的一个或多个实施方案中，本专利技术提供了一种用于制备一种缀合物的方法，该方法包括在缀合条件下使GM-CSF部分与聚合试剂接触以产生如本文提供的缀合物和/或组合物。附图简述 附图说明图1是实施例1中所述的缀合物溶液的SEC-HPLC分析色谱图。图2是实施例1中所述的组合物的阴离子交换纯化色谱图。图3显示了实施例1中所述的缀合物馏分的SDS-PAGE结果。图4是实施例2中所述的缀合物溶液的SEC-HPLC分析色谱图。图5是实施例3中所述的组合物的阴离子交换纯化色谱图。图6是实施例4中所述的缀合物溶液的SEC-HPLC分析色谱图。图7是实施例5中所述的缀合物溶液的SEC-HPLC分析色谱图。图8是SEC-HPLC分析实施例6中所述的缀合物溶液而得到的色谱图。专利技术详述 在详细描述本专利技术的一个或多个实施方案之前，应当理解，本专利技术不限于特定的聚合物、合成技术、GM-CSF部分等，它们是可以变化的。应当注意的是，在此说明书和权利要求书中，单数形式“一个”、“一种”、“某种(个)”包括了复数形式，除非上下文另外明确指示。因此，例如，“一种聚合物”包括一种聚合物以及两种或更多种相同或不同的聚合物；“一种药学上可接受的赋形剂”是指一种药学上可接受的赋形剂以及两种或更多种相同或不同的药学上可接受的赋形剂，等等。在说明本专利技术和要求本专利技术的权利中，根据下面提供的定义来应用下列术语。本文所用的“PEG”、“聚乙二醇”和“聚(乙二醇)”是可以互换的。典型地，根据本专利技术所用的PEGs包括如下的结构“-(OCH2CH2)n-”，其中(n)为2至4000。如本文所用的，根据是否末端的氧被取代，PEG还包括“-CH2CH2-O(CH2CH2O)n-CH2CH2-”和“-(OCH2CH2)nO-。贯穿说明书和权利要求书，应当记住，术语“PEG”包括了具有各种末端或“封端”基团的结构。术语“PEG”也指一种包括大多数即大于50％的-OCH2CH2-或-CH2CH2O-重复亚单元的聚合物。在涉及特定的形式时，该PEG可以具有任意数目的多种分子量以及结构或几何形状如“分支”、“线性”、“分叉”、“多功能”等，下面将进行更详细地描述。术语“封端”和“封末端”在本文可以互换使用，是指具有封端部分的聚合物的一种末端或者终端。典型地，即使非必要地，所述的封端部分包括羟基或C1-20烷氧基，更优选C1-10烷氧基以及进一步优选C1-5烷氧基。因此，封端部分的例子包括烷本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种缀合物，其含有如下结构：　　　　ＰＯＬＹ－（Ｘ↑［１］）↓［ａ］－＊Ｈ－＊－ＮＨ－（ＧＭ－ＣＳＦ）　　　　其中：　　　　ＰＯＬＹ是水溶性聚合物；　　　　（ａ）为０或１；　　　　Ｘ↑［１］，当存在时，是含有一个或多个原子的间隔部分；　　　　Ｒ↑［１］是有机基团；　　　　ＧＭ－ＣＳＦ是ＧＭ－ＣＳＦ部分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：MJ博萨德，张平，
申请(专利权)人：尼克塔治疗亚拉巴马公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]