南蛇藤茎总萜提取物及其制备方法及用途技术

本发明专利技术公开了一种南蛇藤茎提取物，它是从南蛇藤属植物南蛇藤茎中提取分离而得到的含有南蛇藤茎总二、三萜的提取物。经药效学及毒理学实验证明，该提取物对多种肿瘤具有较好的治疗作用，它的有效成分比较明确，有利于保证药物的安全性和有效性。原料提取得率高，成本低，操作简便，适用于工业化生产，因此具有广阔的工业应用前景。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种南蛇藤茎提取物总二、三萜的制备方法，以及该方法制得的 提取物在抗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
南蛇藤为卫矛科南蛇藤属植物南蛇藤 Celastrus orbiculatus Thunb.的干燥藤 $」药性辛温，有小毒，具有祛风除湿、活血消肿解毒的功效，可治疗类风湿性 关节炎、跌打损伤、腰腿痛等。近年的药效学研究证明南蛇藤茎提取物具有抗肿 瘤活性。南蛇藤茎的主要有效成分为H萜和二萜类成分。公开号为CN1823870A的中国专利文献，其方法是从南蛇藤的根及其藤茎 中利用大孔树脂富集三萜和倍半砲，方法繁琐，流程时间较长。因树脂可能产生 毒性残留，《中华人民共和国食品卫生法》规定对申报与审评规定应提供安全性 研究资料，建立成品中树脂残留物及裂解产物的检测方法，制订合理的限量。甚 至树脂纯化前后的药物按新药药效学研究，必须进行对比^F究，以充分保证上柱 前与洗脱后药物的等效性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种南蛇藤茎总萜提取物及其制备方法，该方法对南 蛇藤茎的醇提取物采用有机溶剂萃取，有机溶剂的回收简单易行，确保了有效成 分最大程度的保留。且避免了己有技术使用大孔树脂后期烦杂的药效学研究。 本专利技术的另一目的在于南蛇藤茎总萜提取物在抗肿瘤药物中的应用。 本方法采用的技术方案是 一种南蛇藤茎总萜提取物，其总二、三萜含量大 于50%。南蛇藤茎总萜提取物的制备方法是，取南蛇藤茎饮片，,用高浓度醇作提取溶 剂提取，合并提取液，回收醇；浸膏加水分散后用醚、酯类溶剂依次萃取；收集 酯类有机溶剂层用水或低浓度醇作洗涤溶剂洗涤后，减压浓縮，干燥，得南蛇藤 茎总二、三萜。所述提取溶剂高浓度醇是浓度50%~100%的甲醇或乙醇。所述萃取所用的酯类溶剂为乙酸乙酯。 所述洗涤所用的溶剂低浓度醇为水或浓度30%以下的甲醇或乙醇。 南蛇藤茎总二、三萜提取物在制备用于抗肿瘤,药物中的应用。 抗肿瘤药物组合物制剂形式可以是片剂、胶囊、软胶囊、滴丸、颗粒剂、注 射剂及粉针剂。本专利技术优选的技术方案为取南蛇藤茎饮片，用6倍量95%乙醇提取2次， 合并提取液，回收乙醇，浸膏加水分散后用石油醚萃取3次，再用乙酸乙酯萃取 3次，收集乙酸乙酯层，用水洗涤3次后，减压浓縮，干燥，得南蛇藤茎总二、 三萜。所用的酯类有机溶剂优选为乙酸乙酯。上述专利技术中的干燥方法可以为烘干或减压干燥或喷雾干燥或冷冻干燥等。 总萜类的含量在50%以上，总萜主要由总三萜和总二萜两部分组成。 上述南蛇藤茎提取物具有抗肿瘤作用，能用于制备抗癌药物，可以制成各种 剂型，如片剂、胶囊、软胶囊、滴丸、颗粒剂、注射剂及粉针剂等。 南蛇藤茎提取物总萜类含量测定对照品溶液的制备精密称取105'C下干燥至恒重的乙酰齐墩果酸对照品 2mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每lml含乙酰 齐墩果酸(0.08mg)。标准曲线的制备精密吸取上述对照品溶液0.2、 0.3、 0.4、 0.5、 0.6ml, 分别置具塞试管中，水浴挥去溶剂，冷却，准确加入0.4ml香草醛-冰醋酸溶液 和1.8ml高氯酸，混匀，密塞。置70'C恒温水浴中加热20min，取出，放冷，加 冰醋酸5ml，摇匀，在540nm处测定吸光度，以试剂为空白。以吸光度为纵坐标， 浓度为横坐标绘制标准曲线。含量测定(UV法测定)供试品溶液的制备取南蛇藤茎总萜提取物10mg, 置25ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，即得供试品溶液。精密量取供试品 溶液0.4ml按标准曲线制备项下的方法，自分别置具塞试管中，水浴挥去溶剂 起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含乙酰齐墩果酸的量，计 算含量。本专利技术的有益效果是南蛇藤茎药材用乙醇提取，成本较低，而且乙醇可反 复循环使用，节约了成本。纯化方法较简单，从原料中分离总萜类，收率约2%。 避免了大孔树脂的使用，即避免了后期烦杂的药效学研究。对南蛇藤茎的醇提取 物采用有机溶剂萃取，有机溶剂的回收简单易行，确保了有效成分最大程度的保 留。可在制备过程中富集活性成分，去除大量杂质；同时，本方法的重复性、稳 定性好，从而保证了疗效的稳定；原料提取得率高，成本低，操作简便，适用于 工业化生产，因此具有广阔的工业应用前景。经药效学及毒理学试验证明，该南 蛇藤茎提取物具有较好的抗肿瘤作用，有效成分明确。其主要有效成分为总瞎， 且总萜含量较高，杂质成分较少，可减少服用量，在一定程度上也可减小副作用， 更有利于保证药物的安全性和有效性。具体实施方式下面结合实施例及实验例对本专利技术进一步说明。实施例l取南蛇藤茎饮片10kg，加6倍量95%乙醇，浸泡lh，回流提取2次，每次 2h，合并提取液，减压回收乙醇后加水混悬，用石油醚萃取3次，再用乙酸乙酯 萃取3次，分离出乙酸乙酯层，加水洗涤3次后将乙酸乙酯层减压浓縮，干燥， 即得南蛇藤茎总萜部位195g，其中总二、三萜含量68.3%。实施例2取南蛇藤茎饮片10kg，加6倍量90%乙醇，浸泡lh，回流提取2次，每次 2h,合并提取液，减压回收乙醇后加水混悬，用石油醚萃取3次，再用乙酸乙酯 萃取3次，分离出乙酸乙酯层，加水洗涤3次后将乙酸乙酯层减压浓縮，干燥， 即得南蛇藤茎总萜部位212g，其中总二、三萜含量62.5%。实施例3取南蛇藤茎饮片10kg，加6倍量90%乙醇，浸泡lh，回流提取3次，每次 2h，合并提取液，减压回收乙醇后加水混悬，用石油醚萃取3次，再用乙酸乙酯 萃取3次，分离出乙酸乙酯层，加20%乙醇洗涤3次后将乙酸乙酯层减压浓縮， 干燥，即得南蛇藤茎总萜部位220g，其中总二、三萜含量71.2%。实施例4取南蛇藤茎饮片10kg，加6倍量95%乙醇，浸泡lh，回流提取3次，每次 2h，合并提取液，减压回收乙醇后加水混悬，用石油醚萃取3次，再用乙酸乙酯 萃取3次，分离出乙酸乙酯层，加20%乙醇洗涤3次后将乙酸乙酯层减压浓缩，喷雾干燥，即得南蛇藤茎总萜部位204g，其中总二、三砲含量70.7%。 实施例5取南蛇藤茎饮片10kg，加6，量甲醇，浸泡lh,回流提取3次，每次2h, 合并提取液，减压回收甲醇后加水混悬，用石油醚萃取3次，再用乙酸乙酯萃取 3次，分离出乙酸乙酯层，加水洗涤3次后将乙酸乙酯层减压浓縮，喷雾干燥， 即得南蛇藤茎总萜部位224g，其中总二、三萜含量62.4%。 南蛇藤茎总萜提取物抗肿瘤药效实验实验例l:南蛇藤提取物体外对肿瘤细胞抑制作用。 材料与方法1、 细胞株人肝癌细胞株SMMC-7721;人胃癌细胞株SGC-7901、人宫颈癌细胞株 Hda;红白血病细胞株K562及其耐药株K562-A由本院中医药研究室传代保种。2、 药材与试剂药材南蛇藤饮片，为卫矛科南蛇藤属植物南蛇藤的藤茎。 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑(MT T，噻唑蓝)、二甲基亚砜(DMSO): RMPI-1640培养基干粉、胰蛋白酶。 新生牛血清(NBCS)。 注射用盐酸阿霉素(ADM)。 氟尿嘧啶注射液(5-FU)。正己垸、乙酸乙酯、正丁醇、95%乙醇，均为分析纯。3、 仪器与设备C02培养箱(RCO3000TVBA)，超净工作台(SW-CJ-1F),倒置相差显微镜 (CKX41-32PH),酶标仪(Multiskan MK3)，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种南蛇藤茎总萜提取物，其特征在于，总二、三萜含量大于５０％。

【技术特征摘要】
1、 一种南蛇藤茎总萜提取物，其特征在于，总二、三萜含量大于50%。2、 一种权利要求1所述南蛇藤茎总萜提取物的制备方法，其特征在于，取 南蛇藤茎饮片，用醇回流提取，合并提取液，回收醇，浸膏加水分散后依次用醚 类、酯类溶剂萃取，收集酯类有机溶剂层，用水洗涤后减压浓縮，得南蛇藤茎总 萜。3、 根据权利要求2所述的南蛇藤茎总萜提取物的制备方法，其特征在于 所用拷取溶剂为浓度50% 100%的甲醇或乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘延庆，
申请(专利权)人：徐州工程学院，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]