本发明专利技术属于生物医药领域，涉及一种神经元分化相关基因，即ＢＲＳＫ２，在制备抗糖尿病药物中的新用途。糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ）是一组由遗传和环境因素相互作用而引起的临床综合征。临床以高血糖为主要标志，久病可引起多个系统损害。本发明专利技术的ＢＲＳＫ２有抑制胰岛素分泌的功能，可以作为新的抗糖尿病药物和药靶进行开发。本发明专利技术的ＢＲＳＫ２及其拮抗剂用于制备抗糖尿病药物，将为治疗和检测糖尿病提供了一种新的途径和手段。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种神经元分化相关基因，即BRSK2，的新用途。
技术介绍
BRSK2 (Brain Selective Kinase 2)蛋白激酶在2002年由Manning等人根据 激酶结构域氨基酸的保守性归类到AMPK (AMP-activated Protein Kinase)激酶 亚家族。这个亚家族共有14个成员，包括AMPKal，AMPKo2，BRSKl/SAD-A， BRSK2/SAD-B， MARK1， MARK2， MARK3/Par-1A/C-TAK1， MARK4, NUAK1/ARK5, NUAK2/SNARI^ QSK SIK和MELK。在这些种内同源激酶中，AMPK被认为是一个监控细胞能量状态的探测器。 ATP的耗竭以及AMP浓度的上升，或者更准确的说是AMP:ATP比率的上升可 导致AMPK的激活。AMPK激活后将关闭消耗ATP的合成代谢途径并激活ATP 合成的分解代谢途径，从而调节细胞代谢水平。除了 AMPK以外，这个亚家族 的其它成员的功能最近几年才开始有比较多的研究。BRSK2是AMPK激酶亚家族成员，对于该蛋白激酶的研究已有的报道主要 着重于BRSK2在脑中与神经元极化相关的研究。小鼠中同源基因的敲除使得小 鼠显示出很少的自主运动，对外界刺激反应减弱，出生后两小时死亡。荧光染料 染色显示突变小鼠的神经元轴突和树突难以分辨。体外培养的突变小鼠的大脑皮 层和海马神经元不能形成明显的轴突和树突。最近的研究更是表明，BRSK2参 与了神经递质释放的调节。然而，到目前为止，尚未有人报道BRSK2对脑和神经以外器官或者组织的 作用
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种神经元分化相关基因，即BRSK2，的新用途，即其 在制备抗糖尿病药物中的应用。本专利技术提供了神经元分化相关基因BRSK2 (NCBI中核苷酸的序列号为 AF533880,核苷酸的序列号为AAP97727)在制备抗糖尿病药物中的应用。本专利技术的人BRSK2可以作为筛选和制备抗糖尿病药物的药耙。从而为寻找 有效的抗糖尿病药物提供一种新的方法和途径。本专利技术对于该基因的研究发现，BRSK2在胰腺中有很髙的表达量，甚至 超过在脑中的表达量。进一步的免疫组化结果显示，BRSK2主要在胰腺的胰岛 中高表达。将BRSK2在小鼠的胰岛P细胞(NTT)中过量表达，放射性免疫学方 法检测细胞培养上清中胰岛素的含量，结果显示，胰岛素分泌减少；另一方面用 siRNA的方法干扰小鼠的胰岛p细胞(NTT)中内源BRSK2，同样的放射性免疫 学方法检测结果显示，细胞培养上清中胰岛素的含量增加。由此认为，BRSK2 可能与糖尿病的发生相关，并且可能是糖尿病治疗的靶标。 一方面，通过检测 BRSK2表达量及活性的变化可以预见胰岛素分泌量的变化,即BRSK2活力越高， 胰岛素分泌量越低；BRSK2活力越低，胰岛素分泌量越高。另一方面，以BRSK2 为靶标，筛选抑制BRSK2活力的物质或者方法，可以用于增加胰岛素分泌量， 从而达到治疗或者缓解以胰岛素分泌量下降为症状的糖尿病。本专利技术的一种试剂盒中,:包括神经元分化相关基因BRSK2蛋白。该试剂盒 还可含有检测蛋白活力所需的其他试剂，例如缓冲液、分子量标记等及使用 说明。该试剂盒中还可以包含检测蛋白活性所用的底物等试剂。本专利技术的BRSK2蛋白可以采用各种常规的制备方法制备。如基因工程方法 或者人工合成方法等。例如，可将BRSK2基因表达为蛋白而得。本专利技术的BRSK2基因可以采用各种常规的制备方法制备。本专利技术的BRSK2 基因序列通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩 增法，可根据本专利技术的BRSK2核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员巳知的常规方法所制备的cDNA库作 为模板，扩增而得有关序列。在本专利技术中，术语神经元分化相关基因BRSK2指编码具有BRSK2蛋 白活性的多肽的核苷酸序列，如核苷酸的序列号为AAP97727的序列及其简并序 列。该简并序列是指该核酸序列开放阅读框中，有一个或多个密码子被编码相同 氨基酸的简并密码子所取代后而产生的序列。由于密码子的简并性，所以与该核 酸序列开放阅读框序列同源性低至约70%的简并序列也能编码出神经元分化相 关基因BRSK2的序列。该术语还包括能在中度严紧条件下，更佳地在高度严紧 条件下，与AAP97727开放阅读框序列杂交的核苷酸序列。该术语还包括与 AAP97727开放阅读框序列的同源性至少70%,较佳地至少80%，更佳地至少 卯％的核苷酸序列。该术语还包括能编码序列号为AF533880氨基酸序列的核苷酸序列变异形 式。这些变异形式包括(但并不限于)若干个(通常为l-卯个，较佳地l-60个， 更佳地l-20个，最佳地1-10个)核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5'和/或 3'端添加数个(通常为60个以内，较佳地为30个以内，更佳地为10个以内，最 佳地为5个以内)核苷酸。获得了 BRSK2基因序列后，就可以将BRSK2基因序列插入适当的表达载 体，以获得重组表达质粒。--旦获得了含有BRSK2基因序列的重组表达质粒， 就可将其转化到相应宿主中进行蛋白表达。在本专利技术中，术语BRSK2蛋白指可影响胰岛素分泌的BRSK2多肽。 该术语还包括可影响胰岛素分泌的BRSK2变异形式。这些变异形式包括(但并不 限于)若干个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10 个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个(通 常为20个以内，较佳地为IO个以内，更佳地为5个以内)氨基酸。例如，在本 领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。 又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的 功能。该术语还包括人BRSK2蛋白的活性片段和活性衍生物。该多肽的变异形式包括同源序列、保守性变异体、等位变异体、天然突 变体、诱导突变体、在髙或低的严紧度条件下能与人BRSK2DNA杂交的DNA所编码的蛋白、以及利用抗人BRSK2多肽的抗血清获得的多肽或蛋白。本专利技术 还提供了其他多肽，如包含人BRSK2多肽或其片段的融合蛋白。除了几乎全长 的多肽外，本专利技术还包括了人BRSK2多肽的可溶性片段。通常，该片段具有人 BRSK2多肽序列的至少约10个连续氨基酸，通常至少约30个连续氨基酸，较 佳地至少约50个连续氨基酸，更佳地至少约80个连续氣基酸，最佳地至少约 100个连续氨基酸。本专利技术还提供人BRSK2蛋白或多肽的类似物。这些类似物与天然人BRSK2 多肽的差别可以是氨基酸序列上的差异，也可以是不影响序列的修饰形式上的差 异，或者兼而有之。这些多肽包括天然或诱导的遗传变异体。诱导变异体可以通 过各种技术得到，如通过辐射或暴露于诱变剂而产生随机诱变，还可通过定点诱 变法或其他已知分子生物学的技术。类似物还包括具有不同于天然L-氨基酸的残基(如D-氨基酸)的类似物，以及具有非天然存在的或合成的氨基酸(如e、 Y-氨基酸)的类似物。应理解，本专利技术的多肽并不限于上述例举的代表性的多肽。修饰(通常不改变一级结构)形式包本文档来自技高网...
【技术保护点】
神经元分化相关基因ＢＲＳＫ２在制备抗糖尿病药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.神经元分化相关基因BRSK2在制备抗糖尿病药物中的应用。2. 如权利要求1所述的应用，其特征是，BRSK2是筛选和制备抗糖尿病药物的药耙。3. —...
【专利技术属性】
技术研发人员：余龙，汤文文，郭泽坤，袁健，唐丽莎，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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