一种麻疯树种子胚乳蛋白质提取方法技术

本发明专利技术公开了一种麻疯树种子胚乳蛋白质提取方法，包括取成熟风干麻疯树种子胚乳，用研钵研磨成精细的粉末，然后加入预冷匀浆缓冲液，在冰上研磨至匀浆后转移到离心管中，４℃下于１００００－２００００ｇ离心１０－２０分钟，弃沉淀，在上清液中加入１０％（ｖ／ｖ）的三氯乙酸，然后在冰浴中沉淀２０－５０分钟；再次离心后，去掉上清液，沉淀用丙酮清洗后离心，再取沉淀；重复用丙酮清洗２－３次，４℃下于１００００－２００００ｇ离心１０－２０分钟，去上清液，将沉淀真空干燥得到蛋白干粉。本发明专利技术解决了麻疯树种子胚乳因含油高达６０％而蛋白质提取难的问题，创建了麻疯树种子胚乳蛋白质大量、快速和高效的提取方法。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种植物种子蛋白质提取方法，更特别的涉及一种麻疯 树种子胚乳蛋白质提取方法。二
技术介绍
麻疯树(/ao; / a cwrcas L.)是大戟科麻疯树属多年生落叶亚乔 木植物，生长快，当年可开花结果，种子含油高，还具有抗干旱、耐贫 瘠、抗逆性强。随着能源危机和环境污染问题的日益加剧，可再生能源 的开发利用迫在眉睫。正是麻疯树的这些优点使其成为生物质能研究中 一个被相当看好的树种。联合国已将麻疯树及其提取物用于贫穷的千热 河谷地区生态建设，并作为扶贫的重大项目加以扶持。在我国四川、云 南等省水土流失严重区域，麻疯树在保水固土，防沙化、增加有机土质、 建防护林等方面发挥了重要作用，并被国家列为发展再生能源生物柴油 的重要树种。麻疯树种子含有大量的油分，除主要做生物燃料外，还可 做肥皂、化妆品，同时含有多种活性成分可用于农药和医药领域。因此 广泛分布于热带亚热带地区的麻疯树是集环保、能源建设、生态建设、 医药产品、扶贫等为一体的多年生木本。麻疯树种子含有很多有用蛋白质，对其研究较多的是一种麻疯树毒 蛋白质(Curcin),又称核糖体失活蛋白(RIPs)，它具有抑制真核细胞 无细胞系统蛋白质合成的作用，对肿瘤癌症、真菌病害有较强的抑制和 杀伤能力，在临床医学及农业应用上表现出诱人的前景。麻疯树胚乳约占种子重量的55%以上，是储藏脂肪、蛋白等有效 成分的重要部位，其蛋白质含量约占种仁干重的25%以上。但对其蛋 白质组分和种类至今知之甚少，为了很好的研究、开发和利用麻疯树种 子生物学问题和经济价值，必须建立高效的种子胚乳蛋白质的提取方 法。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种以麻疯树种子胚乳为原料，提取蛋白 质的方法。本专利技术的目的之二是提供一种麻疯树种子胚乳蛋白质大量、快速和 高效的提取方法。本专利技术的这些以及其他目的将通过下列详细描述和说明来进一步体 现和阐述。本专利技术的麻疯树种子胚乳蛋白质提取方法，是以麻疯树种子胚乳为 原料。进一步的，本专利技术的麻疯树种子胚乳蛋白质提取方法，包括如下步骤A、 取成熟风干麻疯树种子胚乳，用研钵研磨成精细的粉末，然后 加入预冷勻浆緩冲液，在水上研磨至匀浆；B、 将匀浆转移到离心管中，4°(3下于10000 - 20000g离心10-20 分钟，弃沉淀，在上清液中加入10% (v/v)的三氯乙酸，然后在冰浴 中沉淀20 - 50分钟；C、 与B步骤相同条件下再次离心后，去掉上清液，沉淀用丙酮清 洗后离心，再取沉淀；D、重复用丙酮清洗2-3次，4℃下于10000 - 20000g离心10-20 分钟，去上清液，将沉淀真空干燥得到蛋白干粉。可以逸择的是，本专利技术的麻疯树种子胚乳蛋白质提取方法，包括如 下步骤A、 取200毫克成熟风干麻疯树种子胚乳，用研钵研磨成精细的粉 末，然后加入2毫升预冷匀浆緩沖液，在水上研磨至匀浆；B、 将匀浆转移到离心管中,4℃下于12000 - 18000g离心12-15 分钟，弃沉淀，在上清液中加入10% (v/v)的三氯乙酸，然后在水浴 中沉淀30 - 50分钟；C、 与B步骤相同条件下再次离心后，去掉上清液，沉淀用丙酮清 洗后离心，再取沉淀；D、 重复用丙酮清洗2-3次，4℃下于12000 - 18000g离心30-50 分钟，去上清液，将沉淀真空干燥得到蛋白干粉。在本专利技术的麻疯树种子胚乳蛋白质提取方法中，所迷的预冷匀浆緩 沖液含有Tris-HCl、蔗糖、乙二胺四乙酸、二好u^又糖醇和1 %辛基苯氧 基聚乙氧乙醇X-100，余量是去离子水。较好的是所述的2毫升预冷 匀浆緩冲液含有15-25 mM Tris-HC1、 200 - 300mM蔗糖、5-13mM乙 二胺四乙酸、0.5-1.5 mM 二硫叔糖醇和1%辛基苯氧基聚乙氧乙醇X -100，余量是去离子水。所述的Tris-HCl的PH值为7-9,较好的是 7-8。 4分末的粒径为0. 01-0. lmm，研磨时间为3-10分钟，转速为120-200转/分钟。本专利技术通过三氯乙酸/丙酮沉淀法解决了麻疯树种子胚乳因含油高 达60%而蛋白质提取难的问题，并且创建了麻疯树种子胚乳蛋白质大量、快速和高效的提取方法。用本专利技术的方法提取的麻疯树种子胚乳蛋白质对胃癌细胞生长具有 强抑制作用，并且毒性低，麻疯树毒蛋白属I型核糖体失活蛋白，细胞毒性极低，对正常细胞的生长几乎没有影响；作用镨广，在一定的浓度 范围下，对多种主要农作物和森林树种的真菌病害的生长有抑制作用， 并且可与其它抗真菌病资源协同作用，提高作用强度和增加作用谱。四附图说明图l是麻疯树种子蛋白质双向电泳蛋白质组表达语。图2是麻疯树种子蛋白质组表达i普图象数字分析结果。五具体实施例方式以下通过具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例仅用于说明， 并不能限制本专利技术范围。在本专利技术中，若非特指，所有的份、量均为以总重量为基础的重 量单位，所有的原料均可以从市场购得。实施例1按如下步骤进行提取A、 取200毫克成熟风干麻疯树种子胚乳，用研钵研磨成精细的粉 末(粒径约为0. Olmm)，然后加入2毫升预冷匀浆緩冲液，该緩冲液含 有20 mM Tris-HC1、 230mM蔗糖、8mM乙二胺四乙酸、0.8 mM 二硫duF唐 醇和1%辛基苯氧基聚乙氧乙醇X-100,余量为去离子水。在冰上研磨 至匀浆(研磨时间为3分钟，转速为200转/分钟左右)；B、 将匀浆转移到离心管中，4℃下于13000g离心15分钟，弃沉淀， 在上清液中加入10% (v/v)的三氯乙酸，然后在冰浴中沉淀50分钟；C、 与B步骤相同条件下再次离心后，去掉上清液，沉淀用丙酮清 洗后离心，再取沉淀；D、 重复用丙酮清洗2-3次，4。C下于14000g离心50分钟，去上 清液，将沉淀真空干燥得到蛋白干#%实施例2按如下步骤进行提取A、 取200毫克成熟风干麻疯树种子胚乳，用研钵研磨成精细的粉 末(粒径为0. lmm左右)，然后加入2毫升预冷匀浆緩沖液，该緩沖液 含有20 mM Tris-HC1、 250mM蔗糖、10mM乙二胺四乙酸、1. 0 mM 二硫 叔糖醇和1%辛基苯氧基聚乙氧乙醇X-IOO、余量为去离子水。在冰上 研磨至匀浆(研磨时间为IO分钟，转速为120转/分钟左右)；B、 将匀浆转移到离心管中，4。C下于15000g离心15分钟，弃沉淀， 在上清液中加入10% ( v/v )的三氯乙酸，然后在水浴中沉淀40分钟；C、 与B步骤相同条件下再次离心后，去掉上清液，沉淀用丙酮清 洗后离心，再取沉淀；D、 重复用丙酮清洗2-3次，4。C下于15000g离心40分钟，去上 清液，将沉淀真空干燥得到蛋白干粉。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种麻疯树种子胚乳蛋白质提取方法，其特征在于是以麻疯树种子胚乳为原料。

【技术特征摘要】
1、一种麻疯树种子胚乳蛋白质提取方法，其特征在于是以麻疯树种子胚乳为原料。2、 根据权利要求1所述的麻疯树种子胚乳蛋白质提取方法，其特征在 于包括如下步骤A、 取成熟风干麻疯树种子胚乳，用研钵研磨成精细的粉末，然后加 入预冷匀浆緩冲液，在水上研磨至匀浆；B、 将匀浆转移到离心管中，4。C下于10000 - 20000 g离心10-20 分钟，弃沉淀，在上清液中加入10% (v/v)的三氯乙酸，然后 在水浴中沉淀20 - 50分钟；C、 与B步骤相同条件下再次离心后，去掉上清液，沉淀用丙酮清洗 后离心，再取沉淀；D、 重复用丙酮清洗2-3次，4。C下于10000 - 20000g离心10-20 分钟，去上清液，将沉淀真空千燥得到蛋白干粉。3、 根据权利要求1所述的麻疯树种子胚乳蛋白质提取方法，其特征在 于包括如下步骤A、 取200毫克成熟风干麻疯树种子胚乳，用研钵研磨成精细的粉 末，然后加入2毫升预冷匀浆緩冲液，在水上研磨至匀浆；B、 将匀浆转移到离心管中，4C下于12000 - 18000g离心12 - 分钟，弃沉淀，在上清液中加入10% (v/v)的三氯乙酸，然 后在水浴中沉淀30 - 50分钟；C、 与B...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈世华，刘玉君，苟平，
申请(专利权)人：云南神宇新能源有限公司，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]