本发明专利技术公开一种七叶总皂苷的制备方法以及在抗肥胖作用中的应用。将干燥的日本七叶树种子粗粉５ｋｇ用８０％乙醇２０Ｌ浸泡过夜，超声波室温条件下提取３０ｍｉｎ，过滤，重复三次，合并滤液，减压浓缩，得到８０％乙醇提取物，水溶，过大孔树脂Ｄ１０１柱，依次用水、８０％乙醇洗脱。乙醇溶液减压浓缩，真空干燥，得七叶总皂苷。本发明专利技术动物实验具有明显的抗肥胖作用，可用于制备预防、治疗肥胖的药物。本发明专利技术属于中药有效成分提取技术领域。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术公开一种七叶树总皂苷的制备方法及在预防和治疗肥胖的医药品和保健食品中的应用， 属于中药有效成分提取
技术介绍
《本草纲目拾遗》记载；娑罗树出西番海中...秋后结实如栗可食，正所谓七叶树也。本专利技术 所述的七叶树种子为七叶树科植物日本七叶树escw/s7^Wa/aBlume.)的干燥成熟种子。本专利技术所涉 及的七叶树种子总皂苷药效，目前临床上主要用于脑水肿、创伤性肢体肿胀、静脉炎等疾病的辅助治疗。 七叶皂苷药理作用可靠，临床用途广泛，不良反应少，尤其在抗渗出、消肿胀、对机体保护作用等方面发 挥着重要作用。此外，该药在治疗腰椎间盘突出症、流行性乙型脑炎、视网膜炎、肾病综合征、腹泻、周 围神经性疾病等方面也有研究报道。但是经检索未见有七叶皂苷抗肥胖作用的报道。目前，世界肥胖人口 日益增加，肥胖对人们的健康影响十分严重，容易引发高脂血症、动脉粥样硬化、冠心病、高血压、糖尿 病等一系列疾病。本专利技术所述七叶皂苷的抗肥胖作用对开发抗肥胖药物及保健食品具有十分现实的意义。
技术实现思路
本专利技术提供了日本七叶树种子总皂苷提取物的制备方法，适用于工业化生产。本专利技术公开了日本七叶树总皂苷提取物预防及治疗肥胖的用途。本专利技术中日本七叶树种子提取物的提取方法包括以下步骤干燥的日本七叶树种子粗粉5kg用80%乙醇20L浸泡过夜，超声波室温条件下提取30min,过滤，重 复三次，合并滤液，减压浓縮，得到80%乙醇提取物，水溶，过大孔树脂D101柱，依次用水、80%乙醇 洗脱。乙醇溶液减压浓縮，真空干燥，得七叶总皂苷400g。七叶总皂苷用Zorbax Columns Cis高效液相色 谱仪半制备柱经制备、分离、纯化得化合物1和2，经鉴定分别为化合物七叶皂苷Ib、七叶皂苷IIa。实验例l胰脂肪酶活性的测定I实验材料与方法 U材料[3H]三油酸甘油酯购于日本东京Amersham公司；胰脂肪酶购自Sigma公司。七叶树总皂苷由本室提供。 1.2实验方法从三油酸甘油酯释放油酸的量来判定酶的活性。90 n mol/L三油酸甘油酯，12.6 u mol/L卵磷脂，9.45 umol/L牛磺胆酸置于9mL的0.1mol/LN-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(TES)， pH7.0,含有0.1mol/L NaCl,超声波处理5min。测定溶液总体积200 u L含有下列物质50liL七叶总皂苷，50uL胰脂肪酶， 0.5umol/L三油酸甘油酯，0.053 umol/L牛磺酸，0.07 n mol/L卵磷脂,20umol/LTES， 20 u mol/LNaCl， 于37°C, pH7.0的条件孵化30 min。释放油酸的测定按BelfmgeW的方法进行测定。 2数据的统计学处理所有数据以X士S^来表示。用t检验进行显著性检验。 3结果七叶皂苷对胰脂肪酶的作用显著，随着剂量的增加对胰脂肪酶的抑制作用越显著，在2.0g丄—'其活性 只有2.3% (见表1-1、附图1、附图3)表1-1七叶皂苷对胰脂肪酶的作用<table>table see original document page 3</column></row><table>七叶皂苷在体外对胰脂肪酶活性有非常显著的抑制作用，在2.0g丄—'时胰脂肪酶活性只有2.3%。 实验例2小鼠排泄物中三酰甘油含量的测定1实验材料与方法1.1材料实验动物，3周龄的ICR系雌性小鼠购自于大贩CLEA公司，购买后置于室温25土rC，相对湿度60% 的室内并且明暗12h循环适应1周，供试验。预备饲养期间，自由采食和饮水。七叶树总皂苷由本室提供。 1.2实验方法将ICR系雌性小鼠分成5组，每组12只，分别食普通饲料、高脂肪词料、高脂肪饲料+0.35%七叶总 皂苷、高脂肪饲料+1%七叶总皂苷、高脂肪饲料+2%七叶总皂苷。3天后测定小鼠排泄物中三酰甘油含量， 用和光三酰甘油酯E-试剂盒方法测定。 2数据的统计学处理所有数据以X士Sf来表示。用t检验进行显著性检验。 3结果3天后与对照组相比，食用高脂肪组的小鼠其粪重降到0.14士0.035g，食用高脂肪食物+0.35%、 1%、 2%七叶皂苷，其粪重和粪中三酰甘油含量都比高脂肪组小鼠有所增加,2%七叶皂苷组作用显著(见表2-1)。表2-1七叶总皂苷对小鼠排泄物中脂肪排出的作用组别 动物数(只) 粪重(g) 粪中三酰甘油含量(mg/g)对照121.04±0.017*11.96 ±0.70高脂肪食物20.14±0.03518.84 ±1.03高脂肪食物+0.35%皂苷120.22 ±0.04916.31 ±3.48高脂肪食物+1%皂苷120.26±0.01224.35±0.80高脂肪食物+2%皂苷120.31 ±0.04928.27 ±1,47*N=I2, *P<0.05vs高脂肪食物组 4结论七叶总皂苷能增加高脂饲料小鼠排泄物重量及粪便中的三酰甘油的含量。 实验例3七叶树总皂苷对高脂肪食小鼠体重、子宫周围脂肪及肝脏中三酰甘油和总胆固醇含量的作用1实验材料与方法 U材料实验动物，3周龄的ICR系雌性小鼠购自于大贩CLEA公司，购买后置于室温25士rC,相对湿度60% 的室内并且明暗12h循环适应l周，供试验。预备饲养期间，自由采食和饮水。七叶树总皂苷由本室提供。 1.2实验方法将1CR系雌性小鼠分成5组，每组12只，自由进食l周后，分别食普通饲料、高脂肪饲料、高脂肪 饲料+0.35%七叶总皂苷、高脂肪饲料+1%七叶总皂苷、高脂肪饲料+2%七叶总皂苷，试验U周后，乙醚 麻醉处死动物，迅速摘除子宫周围脂肪、肝脏于-80'C储存，供分析用。各鼠的体重每周测定1次，每只 鼠的进食量每周记录3次。取0.5g肝脏，置于Krebs Ringer磷缓冲液(PH7.4， 4.5ml)中，匀浆。匀浆液 0.2ml，用混合液(V氯仿V甲醇:2: 1) 4ml萃取。萃取液在氮气流下浓縮，残渣用和光三酰甘油E-试 剂盒及和光胆固醇E-试剂盒方法测定三酰甘油和总胆固醇含量。 2数据的统计学处理所有数据以X土Sf来表示。用t检验进行显著性检验。 3结果高脂组小鼠体重比正常饲料对照组明显增加(见表3-l、附图2)。饲喂体重无太大差别，在第3周与 高脂肪组对比，小鼠体重有所下降。七叶皂苷能使子宫周围脂肪组织质量下降(见表3-2)。食用高脂食物 的小鼠肝脏经过11周后，其肝重、肝三酰甘油含量和总胆固醇含量都比对照组增加了很多，分别达到2.07 ±0.73, 150.1 ±21.8， 8.5±1.48,而对照组分别为1.5±0.36， 34.0±2.3, 4.5±0.37。食用高脂肪食物+0.35% 皂苷、高脂肪食物+1%皂苷、高脂肪食物+2%皂苷能明显的降低因摄入高脂肪而引起的肝重、肝中三酰甘 油及总胆固醇含量的增加(见表3-3)。表3-l七叶总皂苷对高脂肪小鼠体重的影响(g)周对照高脂肪食物高脂肪食物 +0.35。/。皂苷高脂肪食物 + 1%卓苷高脂肪食物 +2%皂苷021.6±1.8521.6±1.7621.6±1.6121.6±1.6321.6±1,61129.0 ±1.9129.1 ±1.6628.8 ±1.7728.8 ±2.03本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种以日本七叶树种子总皂苷提取物预防治疗肥胖的医药品和保健食品。
【技术特征摘要】
1. 一种以日本七叶树种子总皂苷提...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑毅男，韩立坤，王丹辉，胡蒋宁，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]
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