包含几种肉毒杆菌毒素的组合物制造技术

本发明专利技术涉及组合物，其包含至少：一种Ａ１型肉毒杆菌神经毒素，和一种Ａ型肉毒杆菌神经毒素，其氨基酸序列与Ａ１型肉毒杆菌神经毒素的氨基酸序列有至少５％的差异。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含几种肉毒杆菌毒素的组合物本专利技术主题是包含几种A型肉毒杆菌毒素的组合物。 自20世纪80年代以来，肉毒杆菌毒素，尤其是A1型肉毒杆菌毒素(由 Ipsen出售的Dysport⑧或由AUergan出售的Botox )已经用于在人类中治 疗多种疾病/病症。在使用肉毒杆菌毒素治疗的疾病/病症中，尤其可以提及 肌障碍(例如睑痉挛、成人或儿童的痉挛状态或斜颈)、偏头痛、肌起源疼 痛、神经性疼痛、糖尿病、多汗症(或过量出汗)、唾液分泌过多或甚至皱 紋。如在提及的治疗中描述的，目前已知的肉毒杆菌毒素的用途涉及它们 的标准肌内施用。肌内注射引起它们暂时麻痹，即在某段时间内阻断肌肉 收缩。现在，目前4吏用的肉毒杆菌毒素组合物具有时间有限的作用时间。 为了响应工业需要，寻找增加肉毒杆菌毒素作用时间而不改变它生物活性的方法已经成为必须。因此，本专利技术计划解决的问题是提供具有延长作用时间的新的肉毒杆菌毒素组合物。出乎意料地，专利技术人已表明组合几种肉毒杆菌毒素是可能的。 为此目的，本专利技术提出组合物，其包括至少 -一种Al型肉毒杆菌神经毒素，-和一种A型肉毒杆菌神经毒素，其氨基酸序列与Al型肉毒杆菌神经 毒素的氨基酸序列有至少5%的差异。本专利技术提供确定的优点，尤其是当将所迷组合物注射进平滑肌或骨骼 肌内时，本组合物引起延长的肌肉麻痹持续时间。在某些情况中肌肉麻痹 的持续时间可高达10个月，并且更通常地在2至8个月间变动。本专利技术提供如下事实作为另一优点，所述事实是与目前市售肉毒杆菌 毒素的剂量相比，本专利技术的组合物可以以低得多的剂量来使用。换句话讲， 为获得肌肉相同的松弛，注射更少量的肉毒杆菌毒素。对于相同的治疗适应症，已经观察到给药剂量降低10至70%，优选25至50%(为得到相同 的生物学效应，在注射的毒素单位间进行的比较)。本专利技术组合物的另一优点是它们引起很少的副作用，并且尤其是比目 前已知的肉毒杆菌毒素组合物引起少得多的副作用。特别是使用低剂量的 本专利技术组合物的可能性有利地使减少副作用成为可能。在避免的副作用中， 可以提及与蛋白质自身的免疫原性相关的那些，及咽下困难、上睑下垂或 全身肌无力，该列表并非穷尽的。此外，本专利技术组合物具有当将所述组合物注射进平滑肌或骨骼肌内时 具有提高的作用速度的另一优点。生物学或临床效应可在注射后12小时出 现，并且更通常在注射后14至24小时期间出现。有利地是，根据本专利技术的组合物获得非常均一的肌肉松弛效应。最后，本专利技术具有能够在所有工业，尤其是在制药、兽医和化妆品工 业中及在每日保健或身体保健领域中利用的优点。阅读下面的描述和实施例后本专利技术的其它优点和特征将变得非常明 显，所述描述和实施例完全以阐明的方式给出并且是非限制性的。本专利技术的主题是组合物，该组合物包含至少-一种Al型肉毒杆菌神经毒素，-和一种A型肉毒杆菌神经毒素，其氨基酸序列与Al型肉毒杆菌神经 毒素的氨基酸序列有至少5%的差异。表述"肉毒杆菌神经毒素"是指肉毒杆菌毒素，其为游离蛋白质(即没 有与它复合的蛋白质)，或蛋白质复合体，所述蛋白质复合体能够包括，例 如，与肉毒杆菌毒素组合的血凝素(HA蛋白质)，或蛋白质片段。表述"肉毒杆菌毒素，，是指具有肉毒杆菌毒素生物活性的分子，其可 以是蛋白质，或多肽，或肽，或融合蛋白，或截短的蛋白质，或嵌合蛋白， 或突变蛋白质或重组蛋白质。表述"毒素的生物活性"在本专利技术意义中是指肌肉麻痹或胞吐的抑制 作用，尤其是乙酰胆碱或另一神经递质的胞吐的抑制作用。"蛋白质、多肽或肽"在本专利技术意义中是指氨基酸的聚合物，其为天 然的或非天然的、左旋的或非左旋的、右旋的或非右旋的。"嵌合蛋白"在本专利技术意义中是指不同类型分子进行组合后获得的蛋 白质，例如脂类、糖脂、肽、多肽、蛋白质、糖蛋白、碳水化合物、多糖、 核酸、聚乙二醇等等进行组合后。例如才艮据在Current topics in Microbiology and Immunology (1995)， 195， p. 151-154中描述的方法从包含肉毒杆菌毒素的蛋白质复合体中可以 获得纯的或基本纯的肉毒杆菌神经毒素。例如通过对含有肉毒梭菌 (Clostridium botulinum )菌林的发酵培养基或培养液进行纯化可以获得 纯的或基本纯的肉毒杆菌神经毒素，并且例如可以用肉或富含蛋白质的食 物来进行富集。组合物的第一基本成分由Al型肉毒杆菌神经毒素构成。Al型肉毒杆菌神经毒素事实上对应标准的肉毒杆菌毒素，所述标准的 肉毒杆菌毒素在不区分亚型的情况下通常被称为A型肉毒杆菌毒素。Al 型肉毒杆菌神经毒素以DYSPORT⑧或BOTOX⑧名称出售。根据本专利技术，Al型肉毒杆菌神经毒素可以对应Al肉毒杆菌毒素和血 凝素的复合体，或可以对应没有所有复合体蛋白质的Al型肉毒杆菌毒素。组合物的第二基本成分由A型肉毒杆菌神经毒素构成，其氨基酸序列 与Al型肉毒杆菌神经毒素的氨基酸序列有至少5%的差异。为了方便阅读 本公开的剩余内容，该神经毒素被称为Ax型肉毒杆菌神经毒素。表述"A型肉毒杆菌神经毒素，其氨基^列与Al型肉毒杆菌神经 毒素的氨基酸序列有至少1%的差异"是指这些氨基酸序列(重链和轻链) 对应没有所有复合体蛋白质的肉毒杆菌毒素的序列。例如，10%的差异是 指在100个氨基酸中有10个氨基酸是不同的。应理解差异可以是丟失，在 实例中10%的差异可以是指在100个氨基酸中有10个氨基酸丟失了。更特别地，本专利技术组合物包含至少一种A型肉毒杆菌神经毒素，其氨基酸序列与Al型肉毒杆菌神经毒素的氨基酸序列有至少8%的差异。优选地，本专利技术组合物包含至少一种A型肉毒杆菌神经毒素，其氨基 酸序列与Al型肉毒杆菌神经毒素的氨基酸序列有至少10%的差异。更优选地，本专利技术组合物包含至少一种A型肉毒杆菌神经毒素，其氨 基酸序列与Al型肉毒杆菌神经毒素的氨基酸序列有至少12%的差异。在Ax型肉毒杆菌神经毒素中，可以提及A2型肉毒杆菌毒素。优选地，本专利技术组合物包含至少-一种Al型肉毒杆菌神经毒素，和-一种A2型肉毒杆菌神经毒素。在1990年左右，从患肉毒中毒的儿童病例开始第一次分离到A2型肉 毒杆菌毒素(Sakaguchi et al" Int. J. Food Microbiol. (19卯)，11， 231-242)。 该毒素在免疫学和生化上不同于Al型肉毒杆菌毒素。可以从以下菌抹中分离A2型肉毒杆菌毒素Kyoto-F、 Chiba-H、 Y-8036、 7103-H、 7105-H、 KZ1828、 NCTC2012或NCTC9837(Cordoba et al.， System. Appl. Microbiol. (1995)， 18， 13-22; Franciosa et al.,在2003年 11月40th Interagency Botulism Research Coordinating Committee(IBRCC) Meeting上的摘要)。优选地，本专利技术组合物包含从菌林肉毒梭菌分离的A2型肉毒杆菌毒 素，该菌林肉毒梭菌可以在国立典型培养物保藏中心(National Collection of Type Culture-Central Public Health Labo本文档来自技高网...

【技术保护点】
组合物，其包含至少：　－一种Ａ１型肉毒杆菌神经毒素，和　－一种Ａ型肉毒杆菌神经毒素，其氨基酸序列与Ａ１型肉毒杆菌神经毒素的氨基酸序列有至少５％的差异。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：L贝吕埃，
申请(专利权)人：科学研究和应用咨询公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]